हम [ 18 एफ] 3F4AP और गुणवत्ता नियंत्रण प्रक्रियाओं के अर्द्ध-स्वचालित रेडियोकैमिकल संश्लेषण का प्रदर्शन करते हैं।
3- [ 18 एफ] फ्लोरो -4-एमिनपीरिडाइन, [ 18 एफ] 3 एफ 4 एपी, एकाधिक स्केलेरोसिस 4-एमिनपीरीडिन (4 एपी) के लिए एफडीए द्वारा अनुमोदित दवा का एक रेडियोफ्लोअर्नेट एनालॉग है। इस परिसर वर्तमान में जांच के तहत एक पीईटी ट्रेसर के रूप में है। हमने हाल ही में एक प्य्राइडिन एन-ऑक्साइड के प्रत्यक्ष फ्लोरिनिशन से युक्त मेटाफ़्लोरेनेटेड पाइरिडाइंस का उत्पादन करने के लिए एक उपन्यास रासायनिक प्रतिक्रिया का वर्णन किया है और [ 18 एफ] 3 एफ 4 एपी के रेडियोकैमिकल संश्लेषण के लिए इस प्रतिक्रिया का उपयोग किया है। इस अनुच्छेद में, हम यह दर्शाते हैं कि एक स्वचालित सिंथेसाइज़र और एक इन-हाउस निर्मित फ्लो हाइड्रोजनीकरण रिएक्टर का उपयोग करके इस ट्रेसर को कैसे तैयार किया जाए। हम प्रीक्लिनिकल पशु इमेजिंग अध्ययनों के लिए रेडियोोट्रेसर जारी करने से पहले मानक गुणवत्ता नियंत्रण प्रक्रियाओं को भी दिखाते हैं। यह अर्द्ध-स्वचालित प्रक्रिया नैदानिक अध्ययन के लिए [ 18 एफ] 3F4AP के भविष्य के उत्पादन के आधार के रूप में सेवा कर सकती है।
मानव शरीर के अंदर गैर-आक्रामक रूप से एक छोटे से अणु दवा का पता लगाने की क्षमता सटीक दवा की ओर काफी संभावना है। आणविक इमेजिंग तकनीकों के बीच, पॉज़िट्रॉन एमिशन टोमोग्राफी (पीईटी) में कई अनुकूल विशेषताएं हैं: पीईटी डिटेक्टरों की उच्च संवेदनशीलता बहुत कम मात्रा में रेडियोधर्मी सामग्री का पता लगाने और मात्रा का ठहराव की अनुमति देती है और स्कैनर की विशेषताओं में दवा स्थानीयकरण 1 , 2 के सटीक मैपिंग की अनुमति है , 3 उदाहरण के लिए, पीईटी एक रेडियोधर्मी ग्लूकोज एनालॉग की तेजता के स्तर के आधार पर ट्यूमर और मेटास्टैसिस का पता लगाने और स्थानीयकरण की अनुमति देता है, [ 18 एफ] एफडीजी 4 पीईटी विशिष्ट मस्तिष्क रिसेप्टर्स और उनके अधिभोग के स्थानीयकरण और मात्रा का ठहराव भी प्रदान कर सकता है जो न्यूरोलॉजिकल और मानसिक विकारों के निदान और समझने के लिए मूल्यवान हो सकता है। विकसित करने के क्रम मेंएक छोटे अणु पीईटी ट्रेसर, ब्याज के मिश्रित पॉज़िट्रॉन-उत्सर्जन आइसोटोप के साथ लेबल किया जाना चाहिए, आमतौर पर 11 सी या 18 एफ। इन दो रेडियोसोटोप के बीच, 18 एफ में लंबे आधे जीवन (109 मिनट बनाम 20.3 11 सी के लिए) , जो बहु-खुराक और ऑफसाइट उत्पादन की अनुमति देता है। फिर भी, एक अणु के लिए 18 एफ जोड़ना चुनौतीपूर्ण हो सकता है। 18 एफ लेबलिंग के लिए तेजी से प्रतिक्रियाएं की आवश्यकता होती है जो स्वचालन से गतिविधि के प्रत्यक्ष संचालन के कैमिस्ट को राहत देने और उच्च अवशोषित विकिरण खुराक प्राप्त करने के साथ संगत है।
हमने हाल ही में पाइरिडाइन एन-ऑक्साइड के उपयोग के लिए प्यूरीडिन के फ्लोरिनेशन के लिए अग्रदूतों के रूप में वर्णित किया है और [ 18 एफ] 3 एफ 4 एपी 6 के रेडियोकैमिकल संश्लेषण में, इस रसायन के उपयोग के लिए एकाधिक स्केलेरोसिस के लिए एफडीए-अनुमोदित दवा का एक रेडियोलफ़्लोरिनेट एनालॉग, 4- Aminopyridine (4 एपी) 7 , 8 , 9 गुउपन्यास रेडियोट्रेसर वर्तमान में पीईटी ट्रेसर के रूप में 10 , 11 , 12 को नष्ट करने के लिए जांच कर रहा है। इस वीडियो लेख में, हम इस परिसर के अर्द्ध-स्वचालित संश्लेषण को आईबीए सिंथेरा सिंथेसिस यूनिट (अब "सिंथेसाइज़र" कहा जाता है) और एक इन-हाउस निर्मित फ्लो हाइड्रोजनीकरण डिवाइस का उपयोग करते हुए प्रदर्शित करते हैं। संश्लेषण चित्रा 1 में दिखाया गया प्रतिक्रिया पर आधारित है। प्रक्रिया के लिए तैयारी लगभग 1 घंटे लगते हैं, रेडियोलैबेलिंग और शुद्धि 1.5 घंटे और गुणवत्ता नियंत्रण प्रक्रिया 0.5 एच।
पीईटी ट्रैसर की तैयारी के लिए न्यूनतम उपयोगकर्ता हस्तक्षेप के साथ कुशल लेबलिंग की आवश्यकता होती है ताकि विकिरण के जोखिम 14 को कम किया जा सके यहां, हमने इमेजिंग डेमिलेनेशन की जांच के तहत वर्तमान में पीईटी ट्रैसर के [ 18 एफ] 3 एफ 4 एपी के रेडियोकैमिकल संश्लेषण के लिए पहली अर्ध स्वचालित प्रक्रिया का वर्णन किया है। यह अर्ध-स्वचालित पद्धति पशु चिकित्सा के लिए उच्च शुद्धता और पर्याप्त विशिष्ट गतिविधि के साथ रेडियोट्रेसर का उत्पादन करती है। मैन्युअल संश्लेषण 6 पर भरोसा इस परिसर के संश्लेषण के लिए पूर्व तरीकों, जो कि रेडियोधर्मी ट्रैसर की मात्रा को सीमित करता है जो कि उत्पादित किया जा सकता है। संश्लेषण के लिए एक स्वचालित पद्धति होने से अधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य पैदावार भी मिलती है और इसी तरह के उपकरणों के साथ अन्य प्रयोगशालाओं को प्रक्रिया को हस्तांतरित करना आसान बनाता है। प्रक्रिया को पूरी तरह से स्वचालित करने के लिए भविष्य के प्रयास बड़े जानवरों या मनुष्यों में अध्ययन के लिए उच्च मात्रा में ट्रेसर के उत्पादन के लिए सहायक होंगे।
<p cLass = "jove_content"> यह प्रक्रिया 1 9 एफ के 18 एफ के न्यूक्लियोफ़िलिक आदान-प्रदान का उपयोग करती है, जिसमें ब्याज के अणु में रेडियोआईसोटोप को शामिल किया जाता है। इस प्रतिक्रिया के लाभ यह है कि यह तेजी से है और लगभग अनन्य रूप से वांछित उत्पाद का उत्पादन करता है बिना पूर्ववर्ती से अधिक निकालने के लिए संभावित रूप से लंबा शुद्धि चरण की आवश्यकता के बिना। फ्लोराइड-एक्सचेंज लेबलिंग प्रतिक्रियाओं का उपयोग करने की एक सीमा जैसे कि यहां इस्तेमाल की गई एक वस्तु यह है कि प्रारंभिक द्रव्यमान ठंडा परिसर के कारण μmol में परिसर की मात्रा से एमसीआई में रेडियोधर्मिता की मात्रा के रूप में परिभाषित अंतिम विशिष्ट गतिविधि सीमित हो सकती है। हमारे मानक परिस्थितियों में, 18 एफ के 100-200 एमसीआई और 50 माइक्रोग्राम के अग्रदूत के साथ, संश्लेषण के अंत में विशिष्ट विशिष्ट गतिविधि 100-200 एमसीआई / माइक्रोन तक होती है, जो प्रीक्लेक्निकल पीईटी इमेजिंग अध्ययन के लिए पर्याप्त प्रतीत होती है । फिर भी, 18 एफ के लिए शुरुआती राशि में वृद्धि करके विशिष्ट गतिविधि में सुधार हो सकता है – </suपी> जन मात्रा को कम रखते हुए उच्च गतिविधि और कम पूर्ववर्ती राशि 15 , 16 के साथ शुरू करके उच्च विशिष्ट गतिविधि (1-3 सीआई / μmol) के साथ फ्लोराइड-एक्सचेंज द्वारा रेडियोलिग्स तैयार करने की कई रिपोर्टें हैं।पीईटी ट्रैसर के सभी रेडियोकैमिकल संश्लेषण के साथ, रेडियोधर्मी क्षय को कम करने के लिए जल्दी से काम करना महत्वपूर्ण है। रेडियोधर्मी सामग्रियों से निपटने के समय को कम करने, रेडियोधर्मी सामग्री के उचित दूरी का उपयोग करने और विकिरण के जोखिम को कम करने के लिए उपयोगकर्ता के बीच की दूरी को अधिकतम करने के लिए भी महत्वपूर्ण है। इन पहलुओं को प्रोटोकॉल (शुद्धिकरण और गुणवत्ता नियंत्रण) के दूसरे छमाही के दौरान विशेष रूप से महत्वपूर्ण होता है जिसमें उपयोगकर्ता को मैन्युअल रूप से एचपीएलसी में समाधान इंजेक्शन करना पड़ता है, अंश एकत्र करना और अंतिम उत्पाद को फ़िल्टर करना है।
पीईटी ट्रैसर के सभी रेडियोकैमिकल संश्लेषण के साथ, एम के लिए जल्दी से काम करना महत्वपूर्ण हैरेडियोधर्मी क्षय को कम करें रेडियोधर्मी सामग्रियों से निपटने के समय को कम करने, रेडियोधर्मी सामग्री के उचित दूरी का उपयोग करने और विकिरण के जोखिम को कम करने के लिए उपयोगकर्ता के बीच की दूरी को अधिकतम करने के लिए भी महत्वपूर्ण है। प्रोटोकॉल (हाइड्रोजनीकरण और शुद्धि) के दूसरे छमाही के दौरान इन पहलुओं को विशेष रूप से महत्वपूर्ण है जिसमें उपयोगकर्ता को हाइड्रोजनेटर में स्वयं को इंजेक्शन करना है, अपूर्णांक इकट्ठा करना, सुखाने की प्रक्रिया को स्थापित करना, उत्पाद को बफर में पुनःनिर्यात करना और उसे फ़िल्टर करना है फ़िल्टरिंग चरण के दौरान शीशियों की दीवारों में बड़ी मात्रा में रेडियोधर्मी सामग्री खोना आसान है। इस प्रकार, फ़िल्टरिंग से पहले सभी तरल एकत्र करने का प्रयास करना महत्वपूर्ण है। भंग करने के लिए अधिक से अधिक बफर का उपयोग करके वसूली की पैदावार में सुधार हो सकता है लेकिन इसके उपयोग को हतोत्साहित किया जाता है क्योंकि यह एचपीएलसी पर एक बड़ी मात्रा में इंजेक्शन लगाने की आवश्यकता होगी, जिससे चोटी को अंतिम मात्रा का विस्तार और बढ़ाना होगा।
एक का निवारण करने के लिएप्रत्येक चरण की पैदावार का ट्रैक रखने के लिए प्रक्रिया का अनुकूलन करना महत्वपूर्ण है। अधिकांश चरणों के लिए यह किसी भी कदम से पहले और बाद में रेडियोधर्मिता की मात्रा को मापने के द्वारा किया जाता है। प्रतिक्रिया के मामले में उपज एचपीएलसी चोटियों की मात्रा का ठहराव के माध्यम से गणना की जा सकती है। परिणाम अनुभाग में तालिका 1 प्रत्येक चरण के लिए विशिष्ट पैदावार दर्शाता है नीचे दी गई तालिका 2 की विफलता के संभावित कारणों के साथ आम तौर पर कई असफलताएं हैं और उन्हें ठीक करने के लिए
अंत में, भले ही यहां प्रदर्शित प्रक्रिया में [ 18 एफ] 3 एफ 4 एएपी के संश्लेषण के लिए विशिष्ट है, सामान्य वर्कफ़्लो और कई व्यक्तिगत कदम 17 अन्य संयुग्मों के संश्लेषण के लिए आम हैं। इस अनुच्छेद में हमने किसी भी पीईटी ट्रेसर पर किए गए विशिष्ट क्यूसी परीक्षणों का भी प्रदर्शन किया है।
The authors have nothing to disclose.
इस परियोजना को एनआईएच / एनआईबीबी 1 के 99 ईबी 02 20075 के पेड्रो ब्रुग्रोलास के लिए अनुदान और शिकागो इनोवेशन एक्सचेंज से ब्रायन पॉपको और पेड्रो ब्रुग्रोलास के लिए एक इनोवेशन फंड पुरस्कार का समर्थन किया गया था। प्रो। ब्रायन पॉपको इस परियोजना के लिए अपनी सलाह और वित्तीय सहायता के लिए आभार व्यक्त करते हैं। प्रोफेसर चिन्-तु चेन और शिकागो विश्वविद्यालय में समेकित लघु पशु इमेजिंग अनुसंधान संसाधन को उदारतापूर्वक प्रयोगशाला अंतरिक्ष और उपकरणों को साझा करने के लिए स्वीकार किया गया है। इस आलेख के खुले-प्रवेश को प्रायोजित करने के लिए आईबीए को स्वीकार किया गया है
Cyclotron produced [18F]fluoride | House supplied/Zevacor | IBA Cyclone 18 | 100-200 mCi |
Integrated fluid processor for production FLT/FDG | ABX | K-2715SYN | Cassette used for nucleophilic substitution |
Anhydrous acetonitrile | Janssen | 36431-0010 | Transfer under nitrogen |
Methanol | Janssen | 67-56-1 | |
ultrapure water | house supplied | Millipore MilliQ system | |
TBA-HCO3 | ABX | 808.0000.6 | abx.de |
QMA | Waters | WAT023525 | Quaternary methyl ammonium: Anion exchange solid phase extraction cartridge for trap and release of 18F- from the target water |
Sodium bicarbonate | ABX | K-28XX.03 | Prefilled 5 mL syringes |
Alumina-N | Waters | WAT020510 | Alumina-N solid phase extraction cartridge (for trapping unreacted 18F-) |
3-fluoro-4-nitropyridine N-oxide | Synthonix | 76954-0 | Store in desicator. Precursor |
3-fluoro-4-aminopyridine | Sigma Aldrich | 704490-1G | Reference standard |
Oxalic acid | Sigma Aldrich | 75688-50G | |
Sodium phosphate monobasic | Fisher Scientific | S80191-1 | |
Triethyl amine | Fisher Scientific | 04885-1 | |
Ethanol | Decon Labs | DSP-MD.43 | USP |
Final product vial | ABX | K28XX.04 | |
Millex Filter Syringe | Millex | SLGVR04NL | |
10% Pd/C cartridge | Sigma Aldrich | THS-01111-12EA | |
11 mm vials + crimp seals | Fisher Scientific | 03-250-618, 06-451-117, or equivalent | |
13 mm vials + crimp seals | Fisher Scientific | 06-718-992, 06-718-643, or equivalent | |
HPLC vials | Fisher Scientific | 03-391-16, 03-391-17, or equivalent | |
SEMIPREP C18 column | Agilent | 990967-202 | |
V-vials | Alltech | ||
Syringes: 1, 3, 10 mL | Fisher Scientific | 14-829-10D, 14-829-13Q, 14-829-18G, or equivalent | |
Compressed gases: N2, He, H2 | Airgas | UHP N300, UHP HE300, UHP H300, or equivalent | |
TLC plates | Sigma Aldrich | Z193275, or equivalent | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Equipment | |||
Synthera automated synthesizer | IBA SA, Belgium, iba-worldwide.com | Synthera, 250.001 | Automatic synthesis unit |
In-house hydrogenator | See picture | See text description | |
Hot cells | Comecer | For manipulating radioactive materials | |
RadioTLC scanner | Eckert and Ziegler | For handling sterile materials | |
HPLC | Dionex | Ultimate 3000 | |
Dose calibrator | Capintec | CRC15 | Or equivalent |
Gamma counter | Capintec, 7 Vreeland Road, Florham Park, NJ 07932 | CRC 15, PET-CRC25, or equivalent | For measuring radioactivity |
Personal dosimeters | Packard | Cobra II | For measuring gamma spectrum |
Personal radiation badges and rings | Atlantic Nuclear | Rados Rad-60 Electronic Dosimeter, or equivalent | |
Rotavap + vacuum pump | Landauer | ||
Lead pigs + syringe shields | Heidolph | Or equivalent | |
Geiger counters | Pinestar | ||
Ludlum | Model 3 + Pancake GM detector, 4801605, 47-1539, or equivalent |