Method Article

클리닉 기반 생물 저장소의 설립

DOI:

10.3791/55583

⸱

May 29th, 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Affiliated Dermatology & Affiliated Laboratories, Midwestern University Osteopathic Postdoctoral Training Institute, Midwestern University, 2Department of Microbiology & Immunology, Arizona College of Osteopathic Medicine, Midwestern University, 3Biomedical Sciences Program, College of Health Sciences, Midwestern University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

피부 종양은 모스 (Mohs) 현미경 수술 후 폐기됩니다. 임상 지원 직원이 임상 작업을 방해하지 않고 하류 실험실 응용을위한 피부 종양 ( 예 : 편평 세포 암종, 기저 세포 암종 및 흑색 종) 샘플을 효과적으로 처리하고 저장할 수있는 프로토콜이 여기에 설명되어 있습니다.

Abstract

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지난 몇 년 동안 피부암 ( 예, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종 및 흑색 종)이 증가 해 왔습니다. 생물 의학 연구를위한 피부 종양 샘플에 대한 병행 요구가있을 것으로 예상됩니다. 그러나 조직 가용성은 생물 저장소를 확립하는 비용과 임상 조작을 방해하지 않는 임상 샘플을 입수 할 수있는 프로토콜이 없기 때문에 제한적입니다. 모스 수술 날짜에 일상적인 임상 절차에 최소한의 영향을 미치는 피부 종양 및 관련 혈액 및 타액 샘플을 수집하고 처리하기위한 프로토콜이 수립되었습니다. Mohs histotechnologist가 생검에서 입증 된 피부 악성 종양에 대한 첫 번째 모스 수술을받는 환자로부터 종양 샘플을 수집하고 가공합니다. 인접한 정상 조직은 수술 종결시 수집됩니다. 수집 할 수있는 추가 샘플은 전혈 및 협측 스왑입니다.. 정상적으로 폐기 된 조직 표본을 활용함으로써 병원에서 실험실 환경을 기반으로 여러 가지 주요 이점을 제공하는 생물 저장소가 생성되었습니다. 여기에는 광범위한 수집 된 샘플이 포함됩니다. 병리학 보고서를 포함하여 확인되지 않은 환자 기록에 대한 접근; 전형적인 기증자의 경우 추적 방문 중에 추가 샘플을 이용할 수 있습니다.

Introduction

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암 및 바이오 마커 연구는 우수한 인체 조직 샘플의 공급에 의존하며, 제한된 공급으로 인해 연구 1,2 가 방해 받고 있습니다. 많은 피부 과학 연구는 인간 조직의 사용과 관련된 부적절한 공급, 다양한 품질 및 비용으로 인해 제한됩니다. 대형 전용 바이오 뱅크를 설립하는 데 드는 비용은 약 2 백만 달러로 추정되며, 이러한 비용은 인체 조직을 많은 연구자들이 사용할 수 없게 만듭니다. 또한 연구 샘플을 생성하고 저장하는 과정은 신중하게 실행하지 않으면 임상 조작에 영향을 미치고 환자 치료를 지연시킬 위험이 있습니다. 비용 효과적인 클리닉 기반의 바이오 저장소는 권장되는 모범 사례와 샘플 검증 4 , 5 , 6 에 따라 피부암 샘플에 초점을 맞추고 있습니다.

7 , 8 에서 문제가 될 수 있습니다.

Mohs 현미경 수술 기술의 목표는 최대한 많은 건강한 조직을 보존하면서 모든 암 조직을 제거하는 것입니다. 이 절차는 종양 조직의 얇은 층....

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Protocol

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인간 조직 샘플에 대한 모든 실험은 Western IRB (WIRB Protocol # 20142461)에 의해 승인되었습니다. 이 절차에 대한 조직 수집에 대한 단일 기준은 생검에서 입증 된 SCC 진단입니다. 원래의 IRB 프로토콜에는 제외 기준이 제시되어 있지 않았지만, 혈액으로 전염 된 질병이 알려진 환자의 샘플은 사용되지 않았습니다. 피부 조직, 혈액 및 타액을 수집하기 전에 사전 동의를 얻었습니다. 중서부 기관 검토위원회 (Midwestern Institutional Review Board)는 Midwestern University (AZ # 807)에서 진료소 기반의 생물 저장소 샘플을 사용한 검증 작업을 승인했습니다.

1. 피부 종양 조직 처리

참고 : 이것은 Mohs histotechnologist가 수행해야합니다.

  1. RNA 및 외과 적 배양을위한 새로운 편평 세포 암종 (SCC) 조직의 가공
    1. 조직이 모스 외과 의사에 의해 절제 된 후, 10 ~ 50 mg (≥ 10 mm 3 ) 조직 샘플을 추가 처리하기 전에 이완하는 동안 조직의 꼭대기 쪽 중심에서 제거합니다 (이는 슬라이드에....

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Results

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종양 및 ANT는 단백질 분리에 성공적으로 사용되고 웨스턴 블 랏팅으로 시험되었습니다. 그림 3 에서 볼 수 있듯이, 클리닉 기반 바이오 저장소에 수집 및 저장 한 환자 표본에서 피부 편평 세포 암종 마커 (Muc1 14 , FHL-1 15 및 p40 16 , 17 )를 검출 할 수 있습니다.

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그림 3 : ANT와 SCC에서 추출한 단백질 분석. 총 단백질을 ANT 및 SCC 샘플로부터 분리하고, S.......

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Discussion

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저자의 지식에 따르면이 프로토콜은 비용 효율적이고 빠른 접근 방식으로 피부 조직 샘플을 임상 적으로 조달하는 데 주력하는 최초의 제품입니다. Mohs 미세 수술을받는 환자는 일반적으로 특정 시간대에 예정되며 수집은이 기간으로 제한됩니다. 샘플 채취에는 환자 관리에 종사하는 의료 보조원, 종양 샘플을 처리하는 모스 (Mohs) histotechnologist 및 샘플 진입 및 혈액 처리를 담당하는 지정 실험실 직원의 노력이 필요합니다.

수집 팀 ( 예 : 의료 비서, 모스 histotechnologist 및 실험실 기술자) 세 멤버 사이의 조심 조정과 함께, 우리는 기존의 의료 지원 직원이 3-5 조직 샘플의 수집과 관련된 추가 작업을 완료 할 수있는 것으로 나타났습니다 하루에 클리닉 운영에서 명백한 지체없이. 환자 동의서 받기 모스 마이크로 수술 절차와 관련된 일반적인 대기 기간 중에 협측 스왑 및 혈액 수집이 완료됩니다. 샘플을 처리하는 방법에 대한 의사 결.......

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Disclosures

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저자는 공개 할 것이 없습니다.

Acknowledgements

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이 연구는 중서부 대학 건강 과학 연구 촉진 기금, EEH 수여, Midwestern University Office of Research 및 후원 프로그램 교내 기금, KJL에게 수여되었습니다. Affiliated Laboratories 및 Affiliated Dermatology에서 추가 지원을 제공했습니다. 기술 지원을 위해 Sarah Potekhen, Jamie Barto, Stefani Fawks, Cody Jording, Stacie Schimke, Heather Kissel 및 Ali Zaidi에게 감사드립니다.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
BD Vacutainer 플라스틱 혈액 채취 튜브와 K3EDTAThermoFisher Scientific02-685-2B
전자 현미경 과학 양날ThermoFisher Scientific50-949-411
곡선형 중간 포인트 범용 펜치ThermoFisher Scientific16-100-110
프리미엄 마이크로 원심분리기 튜브ThermoFisher Scientific05-408-138
Lonza Walkersville KGM Keratinocyte MediumThermoFisher ScientificNC9791321
전자 현미경 과학 조직 TEK OCT 화합물ThermoFisher Scientific50-363-579
Leica CM1950 CryostatLeica Biosystems14047743909
Frosted Microscope SlidesThermoFisher Scientific12-550-343
Shandon 급속 크롬 H& E 냉동 섹션 염색 키트ThermoFisher Scientific99-900-01
Nalgene 장기 저장 극저온 튜브ThermoFisher Scientific03-337-7X
Falcon 15 mL 원추형 원심분리기 튜브ThermoFisher Scientific14-959-53A
Boca Scientific BuccalT-Swab ThermoFisher ScientificNC9679349
세포 신호 전달 기술 10x RIPA 버퍼ThermoFisher Scientific50-195-822
중단 프로테아제 및 인산가수분해효소 억제제 칵테일ThermoFisher ScientificPI78443
Eppendorf 5424R 마이크로원심분리기ThermoFisher Scientific05-401-203
펠릿 모르터 무선 균질화기ThermoFisher Scientific12-141-3
RNAse Free Pellet PestleThermoFisher Scientific121-141-364
Forma SteriCycle CO2 인큐베이터ThermoFisher Scientific13-998-089
HyClone Fetal Bovine SerumThermoFisher ScientificSH30071.02
Gibco Advanced DMEM/F-12ThermoFisher Scientific12-634-028
Gibco 페니실린-스트렙토마이신ThermoFisher Scientific15140148
Gibco 1 M HepesThermoFisher Scientific15-630-130
Nunc 세포 배양 35 mm, 벤트 포함ThermoFisher Scientific1256591
Anti-CFH 단클론 항체 클론 OX-24AbnovaMAB12583
Anti-p40 (p63 delta) 항체AbnovaABX-144A
Anti MUC-1 항체Santa Cruz Biotechsc-7313
Anti-Snail + Slug (phospho S246)AbcamAb63568
염소 anti-rabbit IgG, Alexa Fluor 488InvitrogenA-11034
Alexa Fluor 568 PhallodinMolecular Probes A12380
ProLong Gold Antifade Mountant with DAPIMolecular Probes P36941
Zeiss Axio Imager Z1 현미경(Axiocam 카메라포함) Zeiss4300009901
Olympus IX51 위상차(DP72 카메라포함) OlympusIX511F3
블레이드

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Baker, M. Biorepositories: Building better biobanks. Nature. 486, 141-146 (2012).
  2. Ambrosone, C. B., Nesline, M. K., Davis, W. Establishing a cancer center data bank and biorepository for multidisciplinary research. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 15<....

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