טכניקות מעבדה המשמשות לשמירה על ביו-טיפוסים של<em> ויבריו כולרה</em> בידוד קליני ואיכותי
Summary
כתב יד זה מתאר ראוי Vibrio cholerae טכניקות תחזוקה בנוסף סדרה של מבחני ביוכימי, מנוצל קולקטיבית עבור הבחנה מהירה ואמינה בין קליני וסביבתי V. ביו-טיפוסים של כולרה במעבדה.
Abstract
החיידק הגרימי שלילי של גראם הוא Vibrio cholerae הוא הסוכן האטיולוגי של כולרה זיהומית זיהומית. בשל השכיחות והחומרה הגלובלית של המחלה, V. Cholerae נחקרה בהרחבה הן בהגדרות סביבתיות והן במעבדה, המחייבת תחזוקה נאותה וטכניקות טיפוח. קלאסי ואל טור הם שני ביו-טיפוסים עיקריים המרכיבים את ה- V. Cholerae O1 serogroup, שכל אחד מהם מציג מאפיינים גנוטיפיים ופנוטיפיים ייחודיים המספקים מנגנונים אמינים לאפיון ביוטיפ, ודורשים ארסיות מובהקות הגורמות לתרבות. ללא קשר לביוטיפ של זן סיבתי עבור כל זיהום או פרוץ מסוים, הטיפול הסטנדרטי עבור המחלה כולל טיפול rehydration בתוספת משטר של אנטיביוטיקה. עם זאת, סיווג ביוטיפ עשוי להיות נחוץ ללימודי מעבדה ועלולות להיות השפעות רחבות יותר בתחום הביו-רפואי.בתחילת שנות האלפיים, זוהו הבדידות הקליניות, אשר הציגו תכונות גנוטיפיות ופנוטיפיות הן מהביוטיקים הקלאסיים והן מהאל-טור. ההיברידיות שזוהו לאחרונה, המכונה אל וריאציות של אל-טור, גרמו לקליניקה ולסביבה לזהות בידוד ביו-טיפוסי כדי להיות מורכבות יותר מאשר בפרוטוקולי זיהוי מסורתיים בודדים. בנוסף לתיאור V. Cholerae תחזוקה כללית ו culturing טכניקות, כתב היד הזה מתאר סדרה של גנים ספציפיים ( ctxB ו tcpA ) מסכי PCR מבוססי PCR ו מבחנים פנוטיפי (התנגדות polyyxin B, מטבוליזם ציטראט, פעילות proteolytic, פעילות hemolytic, תנועה, ומטבוליזם גלוקוז באמצעות Voges- Assay Proskauer) השתמשו באופן קולקטיבי לאפיין ו / או להבדיל בין ביוטוסים קלאסיים לאל טור. יחד, מבחני אלה מספקים גישה שיטתית יעילה לשמש חלופה, או בנוסף, יקר, ניסויים עתירי עבודה ב characterizaשל V. Cholerae קליני (וסביבתי) מבודד.
Introduction
כולרה היא מחלה של המעי הדק הרחוק שנגרם על ידי הצריכה של מזון מזוהם או מים המכילים את החיידק הגראמי שלילי חיידקים Vibrio cholerae. תסמינים של כולרה כוללים הקאות ושילשול מימי בלתי נשלט, מה שמוביל להתייבשות קשה, אשר אם לא מטופלים כראוי, יביא למוות. אשר Cholerae יכול להיות מחולק ליותר מ 200 serogroups מבוסס על המבנה של משטח התא lipopolysaccharide O- אנטיגן. עם זאת, רק 2 serogroups, O1 ו O139, הראו מגיפה או פוטנציאל מגיפה 1 , 2 . יתר על כן, serogroup O139 היה מבודד בעיקר בדרום מזרח אסיה 3 , 4 , בעוד serogroup O1 מופץ ברחבי העולם. יתר על כן, ניתן לחלק את הסרוגרופוס O1 לשני ביו-טיפוסים עיקריים: קלאסית ואל טור. הביוטיפ הקלאסי היה אחראי על מגיפת הכולרה הראשונהS בין 1817 ו 1923. המגיפה השביעית המתמשכת היא תוצאה של ביוטיפ אל טור, אשר גלשו באופן גלובלי את הביוטיפ הקלאסי בסביבה 5 , 6 , 7 . לאחרונה נוצרו זנים המכילים מאפיינים ייחודיים של ביו-טיפוסים קלאסיים ואל-טוריים 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 ומאז נקראו אל וריאנטים של אל טור 13 , 17 . כמה גרסאות של אל-טור הראו יכולות ארסיות גבוהות עם התקדמות מחלה מהירה וחמורה יותר ממה שנצפתה קודם לכן, והדגישהצורך בגישה מקיפה יותר לזיהוי סוכן ומניעת מחלות וטיפול 8 , 9 , 18 . בעוד הזיהוי של ביו-טיב אינו מכתיב מיד טיפול, התקדמות נוספת בפיתוח החיסונים ובסוכני הטיפול העתידיים עשויה להפיק תועלת מהבחנה ביו-טייתית.
הסדרה הראשונה של הפרוטוקולים המפורטים כאן תאפשר לחוקרים לשמור כראוי V. Cholerae זנים במעבדה הגדרה. עקביות וניתוח שלאחר מכן דורש הכנת מלאי וצמיחה של מבודדים, אשר אינו תלוי ביו-טיב. עם זאת, כדי לגרום באופן אופטימלי ביטוי גנים ארסיות, ביוטיפ עצמאית טכניקות culturing ספציפיים נדרשים 19 . בנוסף, הכנה לבדיקות גנטיות וביוכימיות שונות מתוארים בכתב יד זה.
כולרה רעלן (CT) ואת רעלן שיתוף reגלוטן gulated (TCP) הם שני הגורמים העיקריים ארסיות נשלט על ידי הרגולטור הראשי ToxT בשני biotypes של V. Cholerae O1 serogroup 20 . CT הוא רעלן דו-חמצני המורכב מחמש CtxB תת יחידות המקיפות יחידה אחת של CtxA, ואחראית על אובדן אלקטרוליטים מהיר הקשור לכולרה. TCP הוא סוג IV פילוס מקודדים על ידי tcp operon ( tcpABqCRDSTEF ), והוא מעורב בהתקשרות ו קולוניזציה של המעי הדק הרחוק. TcpA הוא הגן הראשון של אופרון tcp אשר מקודד את יחידות יחידת הפרט Pilin חיוני לבנייה של הפילוס 8 . רצף הגן עבור ctxA נשמר לחלוטין בין ביוטיקים קלאסיים אל Tor, בעוד ctxB ו tcpA נבדלים על פני שני biotypes אבל נשמרים בתוך כל ביוטיפ 8 . CtxB נשמר לחלוטין בין biotypes למעט שתי posi בסיסTions (115 ו 203). ב biotype אל Tor, thymine מתגורר בנקודות הבסיס 115 ו 203, בעוד הביוטיפ הקלאסי מכיל ציטוזין בבסיסים אלה. Tcpa נשמר לחלוטין בתוך כל ביוטיפ, אך נבדלים בסיסים מרובים בין biotypes. הבדלים גנטיים אלה משמשים כסימני זיהוי ביו-טיים ראשוניים, ולאחר סידור תגובת תגובת שרשרת הפולימרז (PCR), כולל אלה, ניתן לבודד רצפים מבודדים עם O395 או WT El N1696 הקלאסית מסוג Wild-type כדי לקבוע את הרקע הביוטיפי של CT ו- TCP, בהתאמה, ב V. cholerae נתון לבודד.
פרוטוקולים רבים פותחו על מנת לאפיין את ההבחנות הפנוטיפיות בין הביוטיקים הקלאסיים לאל טור , 21 , 22 , 23 . Polymyxin B הוא אנטיביוטיקה פפטיד כי compromises את יושרה של קרום התא החיצוני ב- Gram שלילי bacTeria, ואת התנגדות polyixxin B יכול להיות דמיינו דרך assay התנגדות polymyxin B 21 . ציטרט הוא המצע העיקרי של מחזור של Kreb, ואת היכולת metabolize ציטרט כמקור פחמן יחיד ניתן לקבוע באמצעות assay מטבוליזם ציטראט 22 . HapR מקודד הרגולטור העולמי ו הרגולטור חישה המניין קוורום ב V. cholerae, HapR, אשר נקשר לאזורים שונים האמרגן מסדיר ביטוי הגן האופרה 24 . כמה זנים פתוגניים של V. cholerae יש באופן טבעי מוטציה משמרת מסגרת בגן hapR שגרם זה צפיפות תלויה תקנה של ביטוי גנים ארסיות לאיבוד 24 , 25 . מדידת פעילות פרוטאז HAPR-regulated באמצעות מדיה אגר חלב מאפשר החוקר כדי לזהות אם לבודד מסוים מכיל HAPR תפקודית 23 . הבדיקות המוליזה של המעי הגס על יכולתו של מתח להפריש אנזימים hemolytic כי lyse תאי דם אדומים; את מידת המוליזה יכול להיות דמיינו על צלחות אגר דם 23 . תנועתיות קשורה לעיתים קרובות עם ארסיות V. cholerae וניתן לנתח באמצעות לוחות אגר התנועה 23 . מבחני ה- Voges-Proskauer בודקים את יכולתו של זן להסיס את הגלוקוז כמקור פחמן יחיד ומייצרים את התוצר האסייתי 21 . עם הופעת גרסאות אל Tor, קשה לחזות את התוצאות של assay פנוטיפי נתון ללא בדיקות genotypic נרחב, ולפני deducing את הרקע של ביוטייפ של V. Cholerae מבודד, מומלץ לבצע את הרכבה זו של מבחני 23 ולהשוות את התוצאות זנים התייחסות כמו בטבלה 2 .
כאן, יש לנו סדרה מתקדמת של פרוטוקולים, באופן קולקטיבי ניצול foreeeהבחינו genotypic ו מבחני פנוטיפי לגישה מקיפה יותר לאפיון V. ביוטכנולוגי כולרה . יתר על כן, יש לנו תיאר את ההבחנה גנוטיפי פנוטיפי של V ידוע. Cholerae אל Tor וריאנטים (MQ1795 ו BAA-2163), בהשוואה זנים התייחסות ביוטיפ נפוץ (WT קלאסי O395, WT אל Tor C6706, ו WT אל Tor N16961, טבלה 1 ). הופעתה של גרסאות אל Tor הציגה אתגרים האמינות של המועסקים בעבר פרוטוקול יחיד אפיון ביו-טיוב אפיון; עם זאת, זה מספר רב של מערכת זיהוי assay יאפשר אפיון אמין יותר של קליני וסביבתי V. כולסטרס מבודד.
Protocol
Representative Results
Discussion
של מעל 200 מזוהה V. Cholerae serogroups, רק O1 ו O139 יש פוטנציאל מגיפה. ניתן לחלק את הסרוגרופ O1 לשני ביו-טיפוסים: קלאסית ואל טור. עם זאת, זנים היברידיים, הנקראים אל ור גורפים 13 , 17 , התברר כי בעלי רקע ביוטיפ אל Tor, ומאפיינים קלאסיים הנמל 8…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
מחקר נתמך על ידי ניו המפשייר- INBRE באמצעות פרס פיתוח מוסדי (IDeA), P20GM103506, מהמכון הלאומי למדעי הרפואה הכללית של NIH.
Materials
| 1 kb DNA Ladder | New England Biolabs | N3232S | https://www.neb.com/products/n3232-1-kb-dna-ladder |
| 60% Glycerol | Calbiochem | 356352 | http://www.emdmillipore.com/US/en/product/Glycerol%2C-Molecular-Biology-Grade—CAS-56-81-5—Calbiochem,EMD_BIO-356352 |
| Agar | Becto, Dickinson and Co. | 214030 | http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=214030&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D214030%26typeOfSearch%3DproductSearch |
| Agar with brain-heart infusion | Becto, Dickinson and Co. | 237500 | http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=237500&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D237500%26typeOfSearch%3DproductSearch |
| Agarose | Peqlab | 732-2789 | https://de.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=732-2789&_DARGS=/store/cms/de.vwr.com/de_DE/header_2016111711383215.jsp_AF&_dynSessConf=1766917479792147141&targetURL=/store/catalog/product.jsp%3Fcatalog_number%3D732-2789&lastLanguage=en&/vwr/userprofiling/EditPersonalInfoFormHandler.updateLocale=&_D%3AcurrentLanguage=+¤tLanguage=en&_D%3AlastLanguage=+&_D%3A/vwr/userprofiling/EditPersonalInfoFormHandler.updateLocale=+ |
| Anhydrous K2HPO4 | Fisher Scientific | P288-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-phosphate-dibasic-anhydrous-crystalline-powder-certified-acs-fisher-chemical-5/p288500?searchHijack=true&searchTerm=P288500&searchType=RAPID |
| Blood Agar Plates | Remel | R01200 | Store at 4 °C; http://www.remel.com/Catalog/Item.aspx?name=Blood+Agar |
| Boric Acid | Fisher Scientific | A73-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/boric-acid-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-6/a73500?searchHijack=true&searchTerm=A73500&searchType=RAPID |
| Bromothymol Blue | Fisher Scientific | B388-10 | https://www.fishersci.com/shop/products/bromothymol-blue-certified-acs-fisher-chemical/b38810?searchHijack=true&searchTerm=B38810&searchType=RAPID |
| Cirtric acid ·H2O | Fisher Scientific | S72836-3 | https://www.fishersci.com/shop/products/citric-acid-monohydrate-4/s728363#?keyword=s728363 |
| Deoxynucleotide (dNTP) Solution Kit | New England Biolabs | N0446S | Store at -20 °C; https://www.neb.com/products/n0446-deoxynucleotide-solutionset |
| Disodium EDTA | Fisher Scientific | S311-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/ethylenediaminetetraacetic-acid-disodium-salt-dihydrate-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-7/s311500?searchHijack=true&searchTerm=S311500&searchType=RAPID |
| DNA Clean & Concentrator™ -25 Kit | Zymo Research | D4007 | http://www.zymoresearch.com/dna/dna-clean-up/zymoclean-gel-dna-recovery-kit |
| GelGreen Nucleic Acid Stain | Biotium | 41005 | https://biotium.com/product/gelgreentm-nucleic-acid-gel-stain-10000x-in-water/ |
| Genesys 10SUV-VIS Spectrophotometer | Thermo Scientific | 840-208100 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/840-208100?ICID=search-840-208100 |
| Gentra Puregene Yeast/Bact. Kit | Qiagen | 158567 | https://www.qiagen.com/us/shop/sample-technologies/dna/dna-preparation/gentra-puregene-yeastbact-kit/#orderinginformation |
| HCl | Fisher Scientific | A144-212 | Corrosive; https://www.fishersci.com/shop/products/hydrochloric-acid-certified-acs-plus-fisher-chemical-10/a144212?searchHijack=true&searchTerm=A144212&searchType=RAPID |
| KCl | Fisher Scientific | P217-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-chloride-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-4/p217500?searchHijack=true&searchTerm=P217500&searchType=RAPID |
| KH2PO4 | Fisher Scientific | P285-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-phosphate-monobasic-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-5/p285500?searchHijack=true&searchTerm=P285500&searchType=RAPID |
| KOH | Fisher Scientific | P250-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-hydroxide-pellets-certified-acs-fisher-chemical-5/p250500?searchHijack=true&searchTerm=P250500&searchType=RAPID |
| Le Loop | Decon Labs Inc. | MP190-25 | http://deconlabs.com/products/leloop/ |
| Le Stab | Decon Labs Inc. | MP186-5 | http://deconlabs.com/products/lestab/ |
| MgSO4·7H2O | Fisher Scientific | M63-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/magnesium-sulfate-heptahydrate-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-3/m63500?searchHijack=true&searchTerm=M63500&searchType=RAPID |
| Mini-Sub Cell GT Horizontal Electrophoresis System | Bio Rad Labs | 1704406 | http://www.bio-rad.com/en-us/product/mini-sub-cell-gt-cell?WT.srch=1&WT.mc_id=aw-cbb-NA-sub_cell_systems_brand_gold&WT.knsh_id=7eb1981f-a011-42a3-aece-1236ff453373 |
| MR-VP Broth | Difco | 216300 | http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=216300&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3Dmr-vp%2Bmedium%26typeOfSearch%3DproductSearch |
| Na2HPO4 | Fisher Scientific | S374-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/sodium-phosphate-dibasic-anhydrous-granular-powder-certified-acs-fisher-chemical-5/s374500?searchHijack=true&searchTerm=S374500&searchType=RAPID |
| NaCl | Fisher Scientific | S271-10 | https://www.fishersci.com/shop/products/sodium-chloride-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-6/s27110?searchHijack=true&searchTerm=S27110&searchType=RAPID |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | S233-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/sodium-bicarbonate-powder-certified-acs-fisher-chemical-5/s233500?searchHijack=true&searchTerm=S233500&searchType=RAPID |
| NaNH4HPO4·4H2O | Fisher Scientific | S218-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/sodium-ammonium-phosphate-tetrahydrate-crystalline-certified-fisher-chemical/s218500?searchHijack=true&searchTerm=S218500&searchType=RAPID |
| NanoDrop Lite Spectrophtometer | Thermo Scientific | ND-LITE-PR | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/ND-LITE-PR?ICID=search-ND-LITE-PR |
| Nonfat dry milk | Nestle Carnation | N/A | N/A |
| Peptone | Becto, Dickinson and Co. | 211677 | http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=211677&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D211677%26typeOfSearch%3DproductSearch |
| Petri Dishes (100 mm x 15 mm) | Fisher Scientific | FB0875712 | https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875712#?keyword=FB0875712 |
| Petri Dishes (150 mm x 15 mm) | Fisher Scientific | FB0875714 | https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875714?searchHijack=true&searchTerm=FB0875714&searchType=RAPID |
| Polymyxin B sulfate salt | Sigma-Aldrich | P1004-10MU | Store at 2-4 °C; http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/p1004?lang=en®ion=US |
| Taq DNA Polymerase | New England Biolabs | M0273S | Store at -20 °C; https://www.neb.com/products/m0273-taq-dna-polymerase-with-standard-taq-buffer |
| Taq Reaction Buffer | New England Biolabs | M0273S | Store at -20 °C; https://www.neb.com/products/m0273-taq-dna-polymerase-with-standard-taq-buffer |
| Thermal Cycler Bio-Rad C1000 Touch™ | Bio Rad Labs | 1840148 | http://www.bio-rad.com/evportal/evolutionPortal.portal?_nfpb=true&_pageLabel=search_page&sfMode=search&sfStartNumber=1&clearQR=true&js=1&searchString=1840148&database=productskus+productcategories+productdetails+abdProductDetails+msds+literatures+inserts+faqs+downloads+webpages+assays+genes+pathways+plates+promotions&tabName=DIVISIONNAME |
| Triphenyltetrazolium chloride | Alfa Aesar | A10870 | https://www.alfa.com/en/catalog/A10870/ |
| Tris Base | Fisher Scientific | BP152-1 | https://www.fishersci.com/shop/products/tris-base-white-crystals-crystalline-powder-molecular-biology-fisher-bioreagents-7/bp1521?searchHijack=true&searchTerm=BP1521&searchType=RAPID |
| Tris∙HCl | Calbiochem | 9310 | http://www.emdmillipore.com/US/en/product/OmniPur-TRIS-Hydrochloride—CAS-1185-53-1—Calbiochem,EMD_BIO-9310-OP |
| Tryptone | Becto, Dickinson and Co. | 211705 | http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=211705&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D211705%26typeOfSearch%3DproductSearch |
| Yeast Extract | Becto, Dickinson and Co. | 212750 | http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=212750&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D212750%26typeOfSearch%3DproductSearch |
| α-napthol | MP Biomedicals | 204189 | http://www.mpbio.com/product.php?pid=05204189 |
References
- Shimada, T., et al. Extended serotyping scheme for Vibrio cholerae. Curr. Microbiol. 28 (3), 175-178 (1994).
- Yamai, S., Tadayuki, O., Toshio, S., Yasuji, K. Distribution of serogroups of Vibrio cholerae non-O1 non-O139 with specific reference to their ability to produce cholera toxin, and addition of novel serogroups. Jpn. J. Infect. Dis. 71 (10), 1037-1045 (1997).
- Karaolis, D. K., Lan, R., Reeves, P. R. The sixth and seventh cholera pandemics are due to independent clones separately derived from environmental, nontoxigenic, non-O1 Vibrio cholerae. J. Bacteriol. 177 (11), 3191-3198 (1995).
- Albert, M. J., et al. Large epidemic of cholera-like disease in Bangladesh caused by Vibrio cholerae O139 synonym Bengal. Lancet. 342 (8868), 387 (1993).
- Barua, D., Barua, D., Greenough III, W. B. History of Cholera. Cholera. , 1-36 (1992).
- Morales, R., Delgado, G., Cravioto, A., Faruque, S. M., Nair, G. B. Population Genetics of Vibrio cholerae. Vibrio cholerae-Genomics and Molecular Biology. , 29-47 (2008).
- Samadi, A. R., Chowdhury, M. K., Huq, M. K., Khan, M. U. Seasonality of classical and El Tor cholera in Dhaka, Bangladesh: 17-year trends. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 77 (6), 853-856 (1983).
- Son, M. S., Megli, C. J., Kovacikova, G., Qadri, F., Taylor, R. K. Characterization of Vibrio cholerae O1 El Tor biotype variant clinical isolates from Bangladesh and Haiti, including a molecular genetic analysis of virulence genes. J. Clin. Microbiol. 49 (11), 3739-3749 (2011).
- Ghosh-Banerjee, J., et al. Cholera toxin production by the El Tor variant of Vibrio cholerae O1 compared to prototype El Tor and classical biotypes. J. Clin. Microbiol. 48 (11), 4283-4286 (2010).
- Ansaruzzaman, M., et al. Cholera in Mozambique, variant of Vibrio cholerae. Emerg. Infect. Dis. 10 (11), 2057-2059 (2004).
- Ansaruzzaman, M., et al. Genetic diversity of El Tor strains of Vibrio cholerae O1 with hybrid traits isolated from Bangladesh and Mozambique. Int. J. Med. Microbiol. 297 (6), 443-449 (2007).
- Lan, R., Reeves, P. R. Pandemic spread of cholera: genetic diversity and relationships within the seventh pandemic clone of Vibrio cholerae determined by amplified fragment length polymorphism. J. Clin. Microbiol. 40 (1), 172-181 (2002).
- Nair, G. B., Faruque, S. M., Bhuiyan, N. A., Kamruzzaman, M., Siddique, A. K., Sack, D. A. New variants of Vibrio cholerae O1 biotype El Tor with attributes of the classical biotype from hospitalized patients with acute diarrhea in Bangladesh. J. Clin. Microbiol. 40 (9), 3296-3299 (2002).
- Nair, G. B., et al. Isolation of Vibrio cholerae O1 strains similar to pre-seventh pandemic El Tor strains during an outbreak of gastrointestinal disease in an island resort in Fiji. J. Med. Microbiol. 55 (11), 1559-1562 (2006).
- Nair, G. B., Mukhopadhyay, A. K., Safa, A., Takeda, Y., Faruque, S. M., Nair, G. B. Emerging hybrid variants of Vibrio cholerae O1. Vibrio cholerae—Genomics and Molecular Biology. , 179-190 (2008).
- Safa, A., et al. Genetic characteristics of Matlab variants of Vibrio cholerae O1 that are hybrids between classical and El Tor biotypes. J. Med. Microbiol. 55 (11), 1563-1569 (2006).
- Nusrin, S., et al. Diverse CTX phages among toxigenic Vibrio cholerae O1 and O139 strains isolated between 1994 and 2002 in an area where cholera is endemic. J. Clin. Microbiol. 42 (12), 5854-5856 (2004).
- Carignan, B. M., Brumfield, K. D., Son, M. S. Single nucleotide polymorphisms in regulator-encoding genes have an additive effect on virulence gene expression in a Vibrio cholerae clinical isolate. mSphere. 1 (5), e00253 (2016).
- Iwanaga, M., Yamamoto, K., Higa, N., Ichinose, Y., Nakasone, N., Tanabe, M. Culture conditions for stimulating cholera toxin production by Vibrio cholerae O1 El Tor. Microbiol. Immunol. 30 (11), 1075-1083 (1986).
- DiRita, V. J., Claude, P., Georg, J., Mekalanos, J. J. Regulatory cascade controls virulence in Vibrio cholerae. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88 (12), 5403-5407 (1991).
- Kovacikova, G., Lin, W., Skorupski, K. Duel regulation of genes involved in acetoin biosynthesis and motility/biofilm formation by the virulence activator AphA and the acetate-responsive Lys-R type regulator AlsR in Vibrio cholerae. Mol. Microbiol. 57 (2), 420-433 (2005).
- Vogel, H. J., Bonner, D. M. Acetylornithinase of Escherechia coli: partial purification and some properties. J. Biol. Chem. 218 (1), 97-106 (1956).
- Son, M. S., Taylor, R. K. Genetic screens and biochemical assays to characterize Vibrio cholerae O1 biotypes: classical and El Tor. Curr. Protoc. Microbiol. , 6A.2.1-6A.2.17 (2011).
- Kovacikova, G., Skorupski, K. Regulation of virulence gene expression in Vibrio cholerae by quorum sensing: HapR functions at the aphA promoter. Mol. Microbiol. 46 (4), 1135-1147 (2002).
- Wang, Y., et al. The prevalence of functional quorum-sensing systems in recently emerged Vibrio cholerae toxigenic strains. Environ. Microbiol. Rep. 3 (2), 218-222 (2011).
- Sanders, E. R. Aseptic laboratory techniques. J. Vis. Exp. (63), e3064 (2012).
- Martinez, R. M., Megli, C. J., Taylor, R. K. Growth and laboratory maintenance of Vibrio cholerae. Curr. Protoc. , 6A.1.1-6A.1.6 (2010).
