سيكتيونينغ الغدة الثديية يتصاعد كله لتحديد الآفة
Summary
قمنا بتطوير طريقة لإزالة بنجاح، عملية، قسم، وصمة عار، للتقييم الأنسجة، الأنسجة الثديية التي كانت أصلا تم إصلاحها على الشرائح كما يتصاعد كله. هذا الأسلوب قد تعزز جمع وتقييم الغدة الثديية يتصاعد كله في الدراسات الإرشادية الإنجابية والتنموية اختبار.
Abstract
قد يتغير تطور الغدة الثديية العادية عن طريق التعرض للمواد السامة والبيئية، والتعرض المفرط للهرمونات، والتغيرات الجينية. الغدة الثديية يتصاعد كله هي وسيلة غير مكلفة لالتقاط تطور التغيرات المورفولوجية التي قد تنشأ بعد التعرض. ومع ذلك، في الحياة في وقت لاحق، عندما تشوهات أكثر عرضة للتطور، والاعتماد الوحيد على هذه الطريقة واحدة قد لا توفر دائما ما يكفي من المعلومات لإجراء التشخيص المناسب للشذوذ. تاريخيا، في الدراسات التوجيهية اختبار الكيمياء اختبار، يتم إزالة الغدة الثديية واحدة في التشريح وإعدادها على شكل هيماتوكسيلين و يوسين (H & E) -insted القسم. دمج المقابل الثديي بأكمله جبل جمع وتحليل يقلل من احتمال تقييم سلبية كاذبة. تقييم جبل كله يقتصر وجود واحد أو اثنين من الغدد الثديية بأكملها على شريحة، وفي بعض الحالات، فإن تشوهات لوحظ في جبل كله لاt ممثلة بشكل موحد في قسم H & E. وكان الهدف من هذه الدراسة لتطوير بروتوكول لتحويل يتصاعد كامل الثديي كوفيرسليبد إلى أقسام H & E الملون بحيث الآفات التي من شأنها أن تكون قد غاب عن ذلك أو التي يصعب تشخيصها يمكن تحديدها. هنا، ونحن بالتفصيل طريقة لإنتاج عالية الجودة، جزءا لا يتجزأ من البارافين H & E القسم من الغدة الثديية التي تم إعدادها في البداية كما جبل بأكمله. بالمقارنة مع الأنسجة التي أعدت عمدا ل H & E سيكتيونينغ، جبل كله يتطلب إعداد إضافي لإزالة الأنسجة ومعالجتها. ومع ذلك، تعتبر هذه الطريقة غير مكلفة، لأنها تتطلب الكواشف مختبر مشترك وقليل من الوقت الإضافي. ونتيجة لذلك، يمكن أن توفر هذه الطريقة معلومات لا تقدر بثمن حول كيفية التعرض الكيميائية والبيئية تغير تطور الثديية العادية، فضلا عن تغييرات العرض التي تحدث بسبب التعديلات الجينية.
Introduction
الثديية بأكملها مونتيس طريقة مفيدة وغير مكلفة تنفيذها في العديد من الفئران والفأر الدراسات لفهم كل من الطبيعي والمستحثة كيميائيا، والتنمية غير طبيعية. بشكل عام، فإن الغدة الثديية التي تم جمعها في مراحل مختلفة خلال تطوير القوارض ( أي المراهقة، سن البلوغ، منتصف إلى وقت متأخر من الحمل، ومرحلة الانقلاب) تظهر التغيرات المورفولوجية في الأنسجة والهندسة المعمارية الخلوية تتأثر عوامل الغدد الصماء، والغدد الصماء، 1 – في الفئران الشيخوخة، وأجزاء الظهارية والانسجة من الغدة تصبح على نحو متزايد كثيفة، مما يجعل قياس المعلمات المورفولوجية صعبة في جبل بأكمله. وبالتالي، فمن الممارسة الشائعة لجمع غدة للتقييم النسيجي لتحديد التغيرات على مستوى المجهري. كلا العمليتين مفيدة بشكل خاص في الدراسات التي تنطوي على التعرض الكيميائي ( أي البيئية، أو الصيدلانية) أو لدراسة التغيرات المورفولوجية المصحوبة بتعديل وراثيبالجمع.
التقنيات والقدرات لاستخدام الغدة الثديية في تقييم المخاطر تستمر في التطور. في حين أن إعداد كامل جبل هو روتيني وموحدة، والتعديلات على باجتزاء تستمر 2 ، 3 . العديد من المجموعات البحثية من مختلف الخلفيات ( أي الأوساط الأكاديمية والحكومة والصناعة) تكيفت أقسام الاكليلية / الطولية من الأنسجة الثديية كطريقة مفضلة، في حين أن بعض المختبرات لا تزال تستخدم المقاطع عبر قطع من خلال الجلد 4 . هذا الأسلوب الأخير ينتج في تمثيل غير عادي للبشرة (الجلد)، بدلا من الأنسجة من الفائدة: ظهارة الغدة الثديية 2 . أقسام الاكليلية أو الطولية هي أكثر فائدة لتوصيف الأنسجة الطبيعية 5 وتحسين كبير في الكشف عن تشوهات والآفات بسبب زيادة مساحة السطح وعدد من الهياكل الحالية. عموما، وهذا يجعل مو كلهونت طريقة مناسبة للتقييم النسيجي المرضي للغدة الثديية 1 ، 2 . سواء باستخدام الفأرة أو فأر، واسترجاع، والحفاظ على ال 4 و 5 تشرين الغدد الأربية ينصح بشدة للمقارنة بين جبل بأكمله إلى قسم H & E المقابل.
عندما تستخدم في تركيبة، وقسم H & E وكل جبل يوفر حساب دقيق للتغيرات الخلوية والمورفولوجية الناجمة عن التعرض البيئي. وهذا صحيح بشكل خاص في بعض سلالات القوارض التي يكون النموذج فيها قابلية منخفضة لتشكيل الورم أو ورم ليس مرئيا بشكل واضح. في بعض الظروف، الحصول على الأنسجة المطلوبة قد لا يكون ممكنا دائما باستخدام كل من التقنيات ( أي عدم كفاية كمية الأنسجة، والموارد، أو نتائج تجريبية غير متوقعة). في حالتنا، لوحظت تشوهات في جبل كامل الثديية، في حين هيستوباثوالنتائج المنطقية في المقابل H & E الغدة كانت في الغالب طبيعية. أدى الاختلاف الساحق بين الغدد المقابل لنا لتطوير إجراءات اقتصادية وفعالة لتحديد تشوهات في يتصاعد كله. باستخدام إجراء المعالجة والتضمين المعدلة، تم إعداد أجزاء عالية الجودة H & E الملون من يتصاعد كامل جزءا لا يتجزأ من البارافين. ونحن نتصور هذا البروتوكول تصبح أداة قوية للكشف عن آثار التعرض الكيميائية، وتعزيز المقارنات بين المختبرات.
Protocol
Representative Results
Discussion
الغدة الثديية كله جبل هو أداة قوية التي يمكن استخدامها لتوضيح التطور الثديي الطبيعي والتغيرات المورفولوجية التي قد تنشأ وتستمر بعد التعرض للمواد الكيميائية، بما في ذلك اضطرابات الغدد الصماء. عندما يتم تقييم جبل كامل وقسم H & E من نفس الحيوان معا، فإنها يمكن أن توفر …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ويود المؤلفون أن يعترفوا بام باموفويغو، وتينيت جونز، وناتاشا كلايتون، نيهس، بخبرتهم الفنية ودعمهم لهذا المشروع.
Materials
| Xylene | Sigma-Aldrich | 214736 | |
| Permount | Thermo Fisher Scientific | SP15-100 | mounting media for coverslipping whole mounts and H&E sections |
| Leica automated processor | Leica Biosystems | Model # ST5020 | |
| HM 355S Automatic Microtome | Thermo Fisher Scientific | 905200 | |
| Paraffin | Leica Biosystems | EM-400 | |
| Superfrost plus microscope slides | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS-001 | electrostatically charged |
| Fisher Finest 24x60x1 | Thermo Fisher Scientific | 12-548-5P | coverslips |
| Varistain Gemini ES Automatic slide stainer | Thermo Fisher Scientific | A78000014 | |
| Sta-On | Leica Biosystems | 3803107 | liquid adhesive; used in water bath at sectioning |
| Modified Harris Hematoxylin 72711 | Richard-Allan Scientific (Part of Thermo Scientific) | 72711 | |
| Eosin | Leica Biosystems | 3801600 | |
| Lithium Carbonate | SkyTech Laboratories | LCQ500 | |
| Glacial Acetic Acid | Thermo Fisher Scientific | A38-500 | needed in Carnoy's fixative |
| Chloroform | Macron Fine Chemicals | 4440-04 | needed in Carnoy's fixative |
| 100% Ethanol | The Warner Graham Company | 6505001050000 | needed in Carnoy's fixative and washing slides |
| 95% Ethanol | The Warner Graham Company | 6505011137320190 | |
| Carmine Alum | Sigma-Aldrich | C1022-25G | |
| Aluminum potassium sulfate dodecahydrate, Sigma Ultra | Sigma-Aldrich | A7210-500G | |
| Automation wash buffer, 20X | Biocare Medical | TWB945 |
References
- Rudel, R. A., Fenton, S. E., Ackerman, J. M., Euling, S. Y., Makris, S. L. Environmental exposures and mammary gland development: State of the science, public health, implications, and research recommendations. Environ Health Perspect. 119 (8), 1053-1061 (2011).
- Keenan, K. P., Wallig, M. A., Hascheck, W. M. Nature via Nurture: Effect of Diet on Health, Obesity, and Safety Assessment. Toxicol Pathol. 41 (2), 190-209 (2013).
- Stanko, J. P., Fenton, S. E. Quantifying branching density in rat mammary gland whole mounts using the Sholl analysis method. J Vis Exp. , (2017).
- Filgo, A. J., et al. Mammary gland evaluation in juvenile toxicity studies: Temporal developmental patterns in the male and female Harlan Sprague Dawley Rat. Toxicol Pathol. 44 (7), 1034-1058 (2016).
- Tucker, D. K., Foley, J. K., Bouknight, S. A., Fenton, S. E. Preparation of high-quality hematoxylin and eosin-stained sections from rodent mammary gland whole mounts for histopathologic review. Toxicol Pathol. 44 (7), 1059-1064 (2016).
- Hvid, H., Thorup, O., Oleksiewicz, M. B., Sjogren, I., Jensen, H. E. An alternative method for preparation of tissue sections from the rat mammary gland. Exp Toxicol Path. 63 (4), 317-324 (2011).
- Munoz-de-Toro, M., et al. Perinatal exposure to bisphenol-A alters peripubertal mammary gland development in mice. Endocrinology. 146 (9), 4138-4147 (2005).
- Padilla-Banks, E., Jefferson, W. N., Newbold, R. Neonatal exposure to the phytoestrogen genistein alters mammary gland growth and developmental programming of hormone receptor levels. Endocrinology. 147 (10), 4871-4882 (2006).
- Nikaido, Y., et al. Effects of maternal xenotestrogen exposure on development of the reproductive tract and mammary gland in female CD-1 mouse offspring. Reprod Toxicol. 18 (6), 803-811 (2004).
