切片乳腺全身为病变鉴别
Summary
我们开发了一种成功去除，处理，切片和染色的方法，用于组织病理学评估，原始固定在载玻片上的乳腺组织作为整体。这种方法可以促进生殖发育试验指南研究中乳腺整体的收集和评估。
Abstract
正常的乳腺发育可能因暴露于环境有毒物质和药物产品，过度暴露于激素和遗传改变而改变。乳腺全身是一种廉价的方法来捕获暴露后可能出现的形态变化的进展。然而，在后来的生活中，当异常更容易发展时，仅依靠这一种方法可能不总是提供足够的信息来正确诊断异常。历史上，在化学测试指南研究中，在尸检时除去单个乳腺，并制备为苏木精和伊红（H＆E）染色部分。对侧乳腺整体收集和分析的并入减少了假阴性评估的可能性。整个安装座的评估受到幻灯片上一个或两个整个乳腺的存在的限制，在某些情况下，在整个安装座上观察到的异常不是在H＆E部分统一表示。这项研究的目的是制定一个方案，将覆盖乳房的整体安装转换为H＆E染色部分，以便可以识别否则将被遗漏或难以诊断的病变。在这里，我们详细介绍了一种从最初准备为整体的乳腺产生高品质，石蜡包埋的H＆E切片的方法。与有意为H＆E切片制备的组织相比，整个安装件需要额外的组织去除和加工准备。然而，这种方法被认为是便宜的，因为它需要常见的实验室试剂和少量额外的时间。因此，这种方法可以提供关于化学和环境暴露如何改变正常乳腺发育以及显示由于遗传修饰而发生的变化的宝贵信息。
Introduction
乳腺整体是一种有用和便宜的方法，在许多老鼠和小鼠研究中实现，以了解正常和化学诱导的异常发育。通常，在啮齿动物发育（ 即青春期，青春期，中期至晚期妊娠和退行期）各个阶段收集的乳腺将显示受旁分泌，内分泌和自分泌因素影响的组织和细胞结构的形态学变化1 。在衰老大鼠中，腺体的上皮和间质部分变得越来越致密，这使得测量形态参数在整体上难以测量。因此，通常的做法是收集用于组织学评估的腺体以鉴别微观水平上的变化。这两种方法在涉及化学暴露（ 即环境或药物）的研究中尤其有用，或者检查伴随遗传改变的形态学变化ations。
使用乳腺进行风险评估的技术和能力不断发展。虽然整个贴装制备是常规的和标准的，修改切片继续2,3。来自不同背景（ 即学术界，政府和行业）的许多研究小组已经将乳腺组织的冠状/纵向切片作为首选方法，而一些实验室仍然使用通过皮肤的横切部分4 。后一种方法导致表皮（皮肤）的过分表示，而不是感兴趣的组织：乳腺上皮2 。冠状或纵向切片对于表征正常组织5更有用，并且由于增加的表面积和存在的结构数量而大大改善了异常和损伤的检测。总的来说，这使整个人对于乳腺1，2的比较组织病理学评估UNT的合适方法。强制推荐使用小鼠或大鼠，检索和保存第4和第 5 个腹股沟腺体，以便将整个安全架与对侧H＆E部分进行比较。
当组合使用时，H＆E部分和整个安装座提供了由环境暴露引起的细胞和形态变化的准确描述。在特定的啮齿动物菌株中尤其如此，其中模型对肿瘤形成的敏感性低或肿瘤不是很明显。在某些情况下，使用两种技术（ 即，组织数量不足，资源不足或意外的实验结果）获得所需的组织可能并不总是可能的。在我们的情况下，在乳房整体上观察到异常，而组织病理学对侧H＆E腺的合理发现主要是正常的。对侧腺体之间的压倒性差异导致我们开发了一种经济有效的方法来识别整体的异常。使用改进的加工和嵌入程序，从石蜡包埋的整体安装中制备高质量的H＆E染色切片。我们设想这个协议成为化学暴露效应的强大的检测工具，增强了实验室间的比较。
Protocol
Representative Results
Discussion
乳腺整体是一个强大的工具，可用于说明暴露于化学物质（包括内分泌干扰物）后可能出现和持续的正常乳腺发育和形态学改变。当同一个动物的整个座位和H＆E部分被一起评估时，它们可以提供早期改变的准确视觉快照，这可以进入更多的疾病状态。
获得这种有用信息的能力在于确保在去除组织时要注意保持并不损害腺体形态。虽然啮齿类具有位于两侧沿背壁几个乳腺部位…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者要感谢Pam Ovwigho，Tenette Jones和NIEHS的Natasha Clayton在这个项目中的技术专长和支持。
Materials
| Xylene | Sigma-Aldrich | 214736 | |
| Permount | Thermo Fisher Scientific | SP15-100 | mounting media for coverslipping whole mounts and H&E sections |
| Leica automated processor | Leica Biosystems | Model # ST5020 | |
| HM 355S Automatic Microtome | Thermo Fisher Scientific | 905200 | |
| Paraffin | Leica Biosystems | EM-400 | |
| Superfrost plus microscope slides | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS-001 | electrostatically charged |
| Fisher Finest 24x60x1 | Thermo Fisher Scientific | 12-548-5P | coverslips |
| Varistain Gemini ES Automatic slide stainer | Thermo Fisher Scientific | A78000014 | |
| Sta-On | Leica Biosystems | 3803107 | liquid adhesive; used in water bath at sectioning |
| Modified Harris Hematoxylin 72711 | Richard-Allan Scientific (Part of Thermo Scientific) | 72711 | |
| Eosin | Leica Biosystems | 3801600 | |
| Lithium Carbonate | SkyTech Laboratories | LCQ500 | |
| Glacial Acetic Acid | Thermo Fisher Scientific | A38-500 | needed in Carnoy's fixative |
| Chloroform | Macron Fine Chemicals | 4440-04 | needed in Carnoy's fixative |
| 100% Ethanol | The Warner Graham Company | 6505001050000 | needed in Carnoy's fixative and washing slides |
| 95% Ethanol | The Warner Graham Company | 6505011137320190 | |
| Carmine Alum | Sigma-Aldrich | C1022-25G | |
| Aluminum potassium sulfate dodecahydrate, Sigma Ultra | Sigma-Aldrich | A7210-500G | |
| Automation wash buffer, 20X | Biocare Medical | TWB945 |
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