ヒト胎盤生理学の統合研究への4容器サンプリングアプローチ<em>インビボ</em
Summary
我々は、期間中にインビボでヒト胎盤生理学を研究するための詳細な方法を提示する。本方法は、胎盤の母体側および胎児側の入ってくる血管および出る血管から採取した血液採取と、体積血流および胎盤組織サンプリングの超音波測定とを組み合わせる。
Abstract
人間の胎盤はまだ子宮内にある間、研究のために非常にアクセスすることができません。従って、インビボでのヒト胎盤生理学の現在の理解は、胎盤の解剖学的構造、血行力学および妊娠期間における種間の多様性にもかかわらず、主に動物研究に基づいている。ヒト胎盤研究の大部分は、 ex vivo灌流研究またはin vitro栄養膜研究である。 インビトロ研究および動物モデルは必須であるが、in vivoでのヒト胎盤へのそのような研究からの結果の外挿は不確実である。我々は、期間中にヒト胎盤生理学をインビボで研究し、その方法の詳細なプロトコールを提示することを目指した。計画された帝王切開期間中に子宮切開の直前に子宮静脈への腹腔内アクセスを利用して、我々は胎盤の母体および胎児側の入来および出血血管から血液サンプルを収集する。コンを組み合わせるとき血漿中の血中濃度を測定することにより、胎盤および胎児への取り込みおよび放出を定量化することができる。さらに、同じ母親 – 胎児対からの胎盤組織試料は、トランスポーター密度および活性ならびに胎盤機能の他の局面のインビボでの測定を提供することができる。この4容器サンプリング法のこの統合的な使用により、正常妊娠および病理学的妊娠の両方において、インビボでの胎盤栄養素移動および代謝の現在の概念のいくつかを試験することができる。さらに、この方法は、胎盤機能不全のバイオマーカーの探索に重要な貢献であり得る、胎盤によって分泌される物質の母体循環への同定を可能にする。
Introduction
健康、米国の国立研究所によると、胎盤は、人体1、2、3で最もよく理解器官です。進行中の妊娠に非倫理的リスクを課すことなく、インビボでヒト胎盤にアクセスして研究することは困難である。したがって、ヒトにおける胎盤機能の研究は、主に、インビトロおよびエクスビボモデルに基づく。胎盤輸送および代謝のインビボ研究において以前の大部分は、6匹の動物が 4、5で行われています。しかし、胎盤の構造や機能は種間でかなり異なるため、動物からヒトへの結果の外挿は慎重に行わなければなりません。ほんの少しのヒトのインビボ研究で、正常な生理学的条件下での胎盤および胎児の摂取および輸送を調べたら条件、及びどれがいくつかの化合物7、8、9、10、11、12、13の統合された転送を探求してきました。これらの基礎研究は、ヒト胎盤のin vivo研究が実現可能であり、それらがいくつかの目的に役立つことを示している。第1に、主にインビトロ 、 エクスビボおよび動物研究から得られる現在の胎盤機能の概念をヒトの環境で試験し、ヒトの胎盤に対する新規かつより特異的な洞察を提供することができる。第2に、異常な胎児の成長、子癇前症、母体糖尿病、メタボリックシンドロームおよび他の母体の代謝障害に関連する機能不全の胎盤の特性をよりよく特徴付けることができる。第三に、ヒトのインビボ研究は、診断を開発する機会を提供するチック、および胎盤機能の予測ツールである。
この背景で我々は、in vivoでのヒト胎盤機能を調査するための生理学的データの包括的なコレクションを確立することを目指した。計画された帝王切開期間中に、我々は子宮静脈への腹腔内アクセスを利用して、胎盤の母体および胎児側の入来および出血血管から血液サンプルを収集する（4血管サンプリング法）。これらの試料は、栄養素および他の物質の対の動静脈濃度差を計算するために使用される14 。さらに、我々は、超音波によって胎盤の両側のボリューム血流量を測定する。その結果、任意の化合物の胎盤および胎児への取り込みを定量化することができる。また、母体と胎児の循環15、16、17に胎盤によって放出される物質を決定することが可能です。結合するとき胎盤および他の関連組織の分析から、この方法は、同じ母親と胎児の対においてインビボでの胎盤機能の多くの局面を統合する潜在的可能性を有する。
Protocol
Representative Results
Discussion
胎盤4血管サンプリング法は、主に3つの目的に関連する。第1に、特定の物質がどのように母体側の胎盤によって取り込まれ、臍帯血および胎児に移されたかを研究するために使用することができます。第2に、この方法は、プロゲステロンの結果によって示されるように、胎盤によって産生され、母体または胎児の循環系に放出される物質の研究に非常に関連している。第3に、急速な成?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
まず、このプロジェクトに参加した母親に心から感謝します。次に、サンプリング手続き、麻酔科医、看護師麻酔科医、外科看護師を援助し、手助けしたすべての人員を認めます。このプロジェクトは、南・東ノルウェー地方保健局とオスロ大学女性健康局のノルウェー諮問部とオスロ大学病院が提供する地方財政からの資金提供なしでは可能ではなかった。
Materials
| Maternal body composition | |||
| Impedance scale | Tanita | or similar | |
| Ultrasound measurements | |||
| Sequoia 512 ultrasound machine | Acuson | equipped with a curved transducer with colour and pulsewave Doppler (frequency bandwidth 2-6 MHz) | |
| Blood samples | |||
| Arerial cannula | BD Medical | 682245 | or similar |
| 20cc Eccentric Luer Tip Syringe without Needle | Termo | SS-20ES | or similar. 3 needed. |
| 10cc Eccentric Luer Tip Syringe without Needle | Termo | SS-10ES | or similar. 9 needed. |
| 5cc 6% Luer Syringe without Needle | Termo | SS-05S1 | or similar. 2 needed. |
| Arterial blood gas syringe | Radiometer Medical | or similar. 4 needed. | |
| Sterile winged needle connected to flexible tubing, 21 gauge | Greiner Bio-One | 450081 | (intended for single use).3 needed. |
| Vacutainer tube 6 mL EDTA | Greiner Bio-One | 456043 | or similar. Label with sample site. 10 needed. |
| Vacutainer tube 5 ml LH Lithium Heparin Separator | Greiner Bio-One | 456305 | or similar. Label with sample site. 5 needed. |
| Vacutainer tube 6 mL Serum Clot Activator | Greiner Bio-One | 456089 | or similar. Label with sample site. 5 needed. |
| Vacutainer tube 3 ml 9NC Coagulation sodium citrate 3,2% | Greiner Bio-One | 454334 | or similar. Label with sample site. 5 needed. |
| Cryogenic vials, 2.0 mL | Corning | 430488 | or similar. Label with sample site, serum/type of plasma and ID. 90 needed. |
| Marked trays to transport the syringes | to transport the blood samples in the operation theatre | ||
| Rocker | for gentle mixing of the samples | ||
| Ice | in styrofoam box | ||
| Liquid nitrogen | in appropriate container | ||
| Placenta samples | |||
| Metal tray | |||
| Ice | in styrofoam box | ||
| Calibrated scale | |||
| Metal ruler | |||
| 1 M Phosphate buffered saline | Sigma | D1408 | or similar. Dilute 10 M to 1M before use |
| RNA stabilization solution | Sigma | R0901-500ML | or similar |
| Optimal Cutting Temperature (O.C.T.) compound | vwr | 361603E | or similar |
| Cryogenic vials, 2.0 mL | Corning | 430488 | or similar. Label with sample site. content and ID. 10 needed. |
| Centrifuge tubes, conical bottom 50 mL | Greiner Bio-One | 227,285 | or similar. Label with "RNA later", sample site and ID. 2 needed. |
| Liquid nitrogen | in appropriate container | ||
| Fetal body composition | |||
| Calibrated scale | |||
| Measuring tape |
References
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