पृथक चूहा दिल से इंटरस्टिशियल ट्रुनाडेट संग्रह के लिए इनवर्टेड हार्ट मॉडल
Summary
यह प्रोटोकॉल अलग-अलग, छिद्रित चूहे के दिल से हृदय संबंधी द्रव्यों को एकत्रित करने के लिए एक विधि का वर्णन करता है। कोरोनरी शिरापरक द्रवपदार्थ से इंटर्स्टिस्टिकल ट्रांसडेट को शारीरिक रूप से अलग करने के लिए, लैंगेंडॉरफ पेरफ्यूज दिल उलटा हुआ है, और कार्डियक सतह पर बनने वाले अंतर (अंतरालीय तरल पदार्थ) नरम लेटेक्स कैप का उपयोग करके एकत्र किया जाता है।
Abstract
वर्तमान प्रोटोकॉल एक अनूठी दृष्टिकोण का वर्णन करता है जो पृथक, खारा-छिद्रित चूहे दिल से कार्डियक ट्रांसयूडेट (सीटी) का संग्रह करने में सक्षम बनाता है Langendorff तकनीक के अनुसार दिल की अलगाव और प्रतिगामी छिड़काव के बाद, दिल को उल्टा स्थिति में उलटा जाता है और यंत्रवत् एक गुब्बारा कैथेटर द्वारा बाएं वेंट्रिकल में डाला जाता है। फिर, एक पतली लेटेक्स टोपी – पहले चूहा दिल के औसत आकार से मिलान करने के लिए डाली – एपिकार्डियल सतह पर रखा गया है। लाटेकैप टोपी का आउटलेट सिलिकॉन टयूबिंग से जुड़ा है, दिल के आधार स्तर से 10 सेमी नीचे का उद्घाटन खोलने से, थोड़ा सक्शन बनाते हैं। आगे के विश्लेषण के लिए एपिकार्डियल सतह पर सीटी का लगातार उत्पादन बर्फ-ठंडा शीशियों में किया जाता है। सीटी के गठन की दर 17 से 147 μL / मिनट (एन = 14) के नियंत्रण और अवरुद्ध हृदय से होती है, जो कोरोनरी शिरापरक प्रवाहयुक्त छिद्र के 0.1-1% का प्रतिनिधित्व करती है। प्रोटीओमिक विश्लेषण और उच्च महत्वआरएमएसीएस तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) ने बताया कि एकत्रित सीटी में प्रोटीन और प्यूरिनर्जिक मेटाबोलाइट्स के एक व्यापक स्पेक्ट्रम होते हैं।
Introduction
दिल की विफलता (एचएफ) दुनिया भर में मनुष्यों में मौत का प्रमुख कारण 1 है । एचएफ अक्सर मायोकार्डिटिस के कारण होता है, मैकेर्डियम के लिए इस्कीमिक अपमान, और बाएं निलय रीमॉडेलिंग, जिससे हृदयात्मक संकेतात्मक कार्य की प्रगतिशील गिरावट और जीवन की रोगियों की गुणवत्ता बढ़ जाती है। हालांकि कार्डियोलॉजी और कार्डियाक सर्जरी की प्रगति में उल्लेखनीय रूप से एचएफ मृत्यु दर कम हो गई है, वे केवल अनिवार्य रूप से प्रगतिशील बीमारी प्रक्रिया के क्षणिक "विलम्ब" के रूप में काम करते हैं, जो कि सिग्नेचर कैंसर रोग का कारण है। इसलिए, प्रभावी उपचार की वर्तमान कमी ने उपन्यास आणविक लक्ष्य की पहचान करने की आवश्यकता को रेखांकित किया है जो एचएफ को रोका जा सकता है या रिवर्स भी कर सकता है। इसमें बाह्य मैट्रिक्स में परिवर्तन, अनियंत्रित कार्डियक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, और कार्डियक और गैर-हृदय कोशिकाओं 2 के बीच बातचीत शामिल है
यह समझना जरूरी है कि हृदय कोशिकाओं को निचले स्तर से पता चला हैघायल दिल के प्रतिरक्षा और पुनर्योजी प्रतिक्रिया के आकार का आकार अलग-अलग, खारा-छिद्रित हृदय में सीटी हृदय की सतह पर छोटी बूंदों के रूप में उत्पन्न होती है जो इंटिस्टिकल तरल पदार्थ ( यानी, सूक्ष्मवाही) से निकाली जाती हैं, जो कि शारीरिक और पाथोफीसियोलॉजिकल स्थितियों 3 , 4 , 5 के तहत होती हैं। इसलिए, सीटी ( यानी, अंतरालीय तरल पदार्थ) का विश्लेषण हृदय के चयापचय और सिकुड़ाए कार्य 6 को नियंत्रित करने या घायल दिल में प्रवास के बाद प्रतिरक्षा कोशिका कार्यों को प्रभावित करने वाले कारकों को पहचानने में मदद कर सकता है। संभवतः, यह एचएफ के उपचार के लिए उपन्यास चिकित्सीय रणनीतियों के विकास की ओर ले सकता है।
कुरिने दिल से सीटी का संग्रह तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है। नियमित लैंगेंडॉरफ-पेर्फुटेड दिलों में, सीटी का अनन्य संग्रह मुश्किल है क्योंकि सीआर का कोरोनार का मिश्रणवाई श्लेष्म प्रवाह सुगंधित अंतःक्षिप्त अंतरिक्ष से जारी चयापचय / एंजाइमों की किसी भी एकाग्रता को अप्रत्याशित रूप से कम करता है। इस सीमा को दूर करने के लिए एक संभव रणनीति फुफ्फुसीय cannulating और एक साथ फुफ्फुसीय नस 7 ligating द्वारा शिरापरक प्रवाह को बाहर करने के लिए है। हालांकि, इस विधि में फुफ्फुसीय धमनी और शिरा के cannulation और ligation के साथ जुड़े कठिनाइयों का सामना करना पड़ता है, हृदय में transudate में शिरापरक प्रवाह के संभावित रिसाव के कारण। रिवर्स हार्ट मॉडल का इस्तेमाल करने की अवधारणा को पहली बार केम्मेरिएयर के समूह ने पेश किया था, जिसने एक पृथक, छिद्रित दिल को उल्टा स्थिति में उलटा दिया और एपिकार्डियल सतह पर पतली लेटेक्स कैप को निरंतर सीएनटी को शिरापरक प्रवाह के प्रदूषण के बिना रखा। 8 , 9 इस प्रक्रिया का उपयोग करते हुए सीटी को दिल 9 से जारी चयापचयों के एक बहुत ही संवेदनशील उपाय प्रदान करने के लिए दिखाया गया था,फैटी एसिड के केशिका स्थानांतरण 8 , और वायरल कण 10
हाल ही में, पैरासिरीन कारक जो स्थानीय प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को नियंत्रित कर सकते हैं और कार्डियक एंजियोजेनेस 11 बढ़ा सकते हैं, उन्हें दिल की बीमारी के लिए स्टेम सेल-आधारित चिकित्सा के लाभकारी प्रभावों में शामिल किया गया है। उलट दिल में सीटी का विश्लेषण इन व्यक्तिगत पैरासिरेन कारकों को रासायनिक रूप से पहचानने में मदद कर सकता है। इसके अतिरिक्त, सीटी दिल में प्रतिरक्षा कोशिकाओं के विवो सक्रियण में शामिल कारकों की पहचान करने में मदद कर सकता है।
यहां प्रदान की गई हृदय की सतह से सीटी संग्रह का विस्तृत विवरण, संपूर्ण कार्डियक फ़ंक्शन के संबंध में प्रतिरक्षा कोशिकाओं, फाइब्रोब्लैस्ट्स, एंडोथेलियल कोशिकाओं, और कार्डिओमायसाइट्स के परस्पर क्रिया का अध्ययन करने वाले शोधकर्ताओं के लिए प्रयोगात्मक रूप से उपयोगी है। जैसा कि ऊपर उल्लेख किया गया है, मध्यवर्ती द्रव में हृदय से सेल संचार के लिए जानकारी है, जो किसीआईटी के संग्रह से आसानी से मूल्यांकन किया जा सकता है विस्तृत तकनीकी विवरण, उलट दिल से सीटी एकत्र करने का वीडियो प्रोटोकॉल भी शामिल है, इस अनूठी तकनीक के भविष्य के आवेदन को सुविधाजनक बनाने में मदद करनी चाहिए।
Protocol
Representative Results
Discussion
उलटा हुआ दिल मॉडल अच्छी तरह से स्थापित लैंगेंडॉरफ दिल की छिड़काव तकनीक 12 पर आधारित है और यह हृदय को उल्टा पोजीशन में घुसने और एक कठोर इंट्रा-वेंट्रिकुलर बैलून कैथेटर का उपयोग करके इस स्थिति को…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस अध्ययन को एनएसएफसी 81570244, फोको 23/2013, और एसएफबी 1116 / बी 001 और कार्डियोवास्कुलर रिसर्च इंस्टिट्यूट डसेलडोर्फ (कैरिड) द्वारा वित्त पोषित किया गया था।
Materials
| Latex Solution | ProChemie | Z-Latex LA-TZ | http://kautschukgesellschaft.de/%E2%80%A8z-latexla-tz%E2%80%A8 |
| Aluminum Mold | Home made | – | Reverse heart model |
| Universal Ovens | Memmert | UNB 400 | Reverse heart model |
| Latex Balloon | Hugo Sachs | Size 4 | Reverse heart model |
| Milling Machine | Proxxon | MF70 | Reverse heart model |
| Sodium Chloride | Sigma | SZBD0810V | Chemicals |
| Sodium Hydrogen Carbonate | Roth | 68852 | Chemicals |
| Potassium Chloride | Merck | 49361 | Chemicals |
| Magnesium Sulphate Heptahydrate | Merck | 58861 | Chemicals |
| Potassium Dihydrogen Phosphate | Merck | 48731 | Chemicals |
| D(+)-Glucose Anhydrous | Merck | 83371 | Chemicals |
| Calcium Chloride Dihydrate | Fluka | 21097 | Chemicals |
| Balance | VWR | SE 1202 | Weighing chemicals |
| Double Distilled Water | Millpore | – | Disolving chemicals |
| Medical Pressure Transducer | Gold | – | Langendorff apparatus |
| Medical Flow Probe | Transonic | 3PXN | Langendorff apparatus |
| Heating Circulating Bath | Haake | B3 ; DC1 | Langendorff apparatus |
| Laboratory and Vaccum Tubing | Tygon | R-3603 | Langendorff apparatus |
| Animal Research Flowmeters | Transonic | T206 | Langendorff apparatus |
| PowerLab Data Acquisition Device | AD Instruments | Chart 7.1 | Langendorff apparatus |
| LabChart Data Acquisition Software | AD Instruments | Chart 7.1 | Langendorff apparatus |
| Peristaltic Pump | Glison | MINIPULS 3 | Langendorff apparatus |
| Glass Water Column | home made | – | Langendorff apparatus |
| Water Bath Protective Agent | VWR | 462-7000 | Langendorff apparatus |
| Sterile Disposable Filters (0.2µm) | Thermo Scientific | 595-4520 | Langendorff apparatus |
| Blood gas analyzers | Radiometer | ABL90 FLEX PLUS | Gas analyzer |
| 70% ethanol | VWR | UN1170 | Cleaning tubings |
| 100% ethanol | Merck | 64-17-5 | Cleaning tubings |
| Wistar Rats | Janvier | – | Animals |
| Stainless Scissors | AESCULAP | BC702R | Surgical Instruments |
| Stainless Scissors | AESCULAP | BC257R | Surgical Instruments |
| Big Forceps | AESCULAP | – | Surgical Instruments |
| 8m/m Stainless Forceps | F.S.T | 11052-10 | Surgical Instruments |
| superfine (10/0) emery paper | 3M | 051111-11694 | Reverse heart model |
References
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