Questo manoscritto descrive un protocollo per l'imaging in vivo della retina di topo con tomografia a coerenza ottica ad alta risoluzione spettrale dominio (SD-OCT). Si concentra sulle cellule retiniche del ganglio (RGC) nella regione peripapillare, con diverse analisi e quantificazione approcci descritti.
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Articolo metodologico
Tomografia a coerenza ottica: Imaging Mouse ganglionari cellule In Vivo
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Cambiamenti strutturali nella retina sono manifestazioni comuni di malattie oftalmiche. Tomografia a coerenza ottica (OCT) consente la loro identificazione in vivo— rapidamente, in modo ripetitivo e ad alta risoluzione. Questo protocollo descrive la formazione immagine OCT nella retina di topo come un potente strumento per studiare i neuropathies ottici (OPN). Il sistema OCT è un'alternativa non invasivi, basati su interferometria a comuni post-mortem analisi istologica. Esso fornisce una valutazione rapida e accurata di spessore retinico, consentendo la possibilità di tenere traccia delle modifiche, come assottigliamento retinico o ispessimento. Vi presentiamo il processo di imaging e l'analisi con l'esempio della riga del mousedelTTAG Opa1. Sono proposti tre tipi di scansioni, con due metodi di quantificazione: pinze standard e fatti in casa. Quest'ultima è la migliore per uso sulla retina peripapillary durante le scansioni radiali; essere più precisi, è preferibile per l'analisi di strutture più sottili. Tutti gli approcci descritti qui sono progettati per le cellule retiniche del ganglio (RGC) ma sono facilmente adattabili ad altre popolazioni cellulari. In conclusione, l'OCT è efficiente in phenotyping modello del mouse e ha il potenziale per essere utilizzato per la valutazione affidabile degli interventi terapeutici.
Introduzione
L'OCT è uno strumento diagnostico che facilita l'esame delle strutture retiniche1, tra cui la testa del nervo ottico (ONH). Nel corso degli anni è diventato un indicatore affidabile della progressione di malattia in esseri umani2,3, così come in roditori4,5. Utilizza interferometria per creare immagini a sezione trasversale degli strati retinici ad una risoluzione assiale di 2 µm. Lo strato più interno è il livello fibre nervose retiniche (RNFL), contenente assoni RGC, cui fa seguito lo strato di cellule del ganglio (GCL), conte....
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Protocollo
il protocollo sperimentale è stato approvato dall'Institut national de la santé et de la recherche médicale (Inserm; Montpellier, Francia), è coerente con le direttive europee e l'istruzione di ARVO è conforme per l'uso di animali nella ricerca oftalmica. È stato effettuato nell'ambito dell'accordo del Languedoc Roussillon Comity etico nella sperimentazione animale (CEEALR; nuCEEA-LR-12123).
1. installazione dell'apparecchiatura e la preparazione pre-formazione immagine
Nota: qui, l'OCT è stata eseguita su retine del mouse utilizzando il sistema di imaging oftalmica dominio spettrale (SD) ( ....
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Risultati
La tecnologia SD-OCT consente immaginando retinica, analisi di spessore che sono paragonabile alla istologia, ma sono più veloce e più dettagliata (Figura 3). Come presentato con wildtype topi C57Bl/6, anche se la qualità di un'acquisizione di SD-OCT (Figura 3A, destra) non è così buona come quella di un'immagine di una sezione trasversale della retina (Figura 3A, sinistra), Visualizza più strati (
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Discussione
Il sistema di OCT, un non-invasiva in vivo imaging metodo, fornisce scansioni simil-cross-sezione della retina ad alta risoluzione. Così, il suo principale vantaggio è il suo potenziale per un'analisi dettagliata, con la meravigliosa opportunità di recepire i protocolli ordinariamente applicati agli esseri umani di modelli murini.
Nell'esempio di Opa1delTTAG topi mutanti, SD-OCT risultati hanno mostrato un aumento di spessore di strato complesso RNFL e GC, che ha c.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato da Inserm, Université Montpellier, Francia di Retina, Union National des Aveugles et Déficients Visuels (UNADEV), associazione sindrome de Wolfram, la Fondation pour la Recherche Médicale, Fondation de France e il laboratorio di eccellenza Programma di EpiGenMed.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Mice | |||
| Opa1delTTAG mouse | Institute for Neurosciences in Montpellier, INSERM UMR 1051, | France-Opa1 knock-in topi che trasportano Mutazione OPA1 c.2708_2711delTTAG su C57Bl6/J background | |
| Name | Company | Numero di catalogo | Comments |
| Equipment | |||
| EnVisu R2200 SD-OCT Imaging System | Bioptigen, Leica Microsystems, Germania | - | Sistema di tomografia a coerenza ottica nel dominio spettrale |
| EnVisu R2200 SD-OCT Software del sistema | di imaging Bioptigen, Leica Microsystems, Germania-Software | per l'acquisizione e l'analisi OCT | |
| ImageJ 1.48v | Wayne Rasband, National Institutes of Health, USA-Software | per l'analisi, richiede il download e l'installazione di due macro fatte in casa: http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Retina_Tool | |
| Piastra riscaldante autoregolante | Bioseb, Francia | BIO-062 | Protezione contro l'ipotermia |
| Name | Company | Numero di catalogo | Comments |
| Supplies | |||
| Fascia nasale | - | - | Fascia elastica |
| Garze pad 3" x 3" | Curad, USA | Protezione contro l'ipotermia | |
| Applicatore di punta in cotone a doppia estremità | Essence of Beauty, CVS Health Corporation, USA-Applicazione | di gel | |
| Torsioni di cotone | CentraVet, Francia | T.7979C.CS | Posizionamento del mouse |
| Name | Company | Numero di catalogo | Comments |
| Reagenti e farmaci | |||
| Né osyné phrine Faure 10% | Laboratoires Europhtha, | Monaco-Dilatazione | dell'occhio |
| Mydriaticum 0,5% | Laboratoires Thé a, Francia | 3397908 | Dilatazione oculare |
| Cebesina 0,4% | Laboratoire Chauvin, Bausch& Lomb, Francia | 3192342 | Anestesia locale |
| Imalgene 1000 | Merial, Francia/CentraVet, Francia | IMA004 | Anestesia generale |
| Rompun | Bayer Healthcare, Germania/CentraVet, Francia | ROM001 | Anestesia generale, analgesia, rilassamento muscolare |
| NaCl 0,9% | Laboratoire Osalia, Francia | 103697114 | Siero fisiologico |
| Systene Ultra | Alcon, Novartis, USA-Idratazione | degli occhi | |
| GenTeal'Alcon | , Novartis, USA-Gel | oftalmico per minimizzare la rifrazione della luce e le opacità | |
| Aniospray Surf 29 | Laboratoires Anios, France | 59844 | Desinfectant |
Riferimenti
- Drexler, W., Fujimoto, J. G. State-of-the-art retinal optical coherence tomography. Prog Retin Eye Res. 27 (1), 45-88 (2008).
- Grenier, J., et al. WFS1 in Optic Neuropathies: Mutation Findings in Nonsyndromic Optic Atrophy and Assessmen....
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Ristampe e permessi
