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Artigo de método

Semiautomated Longitudinal baseados em Microcomputed tomografia computadorizada quantitativa análise estrutural de um modelo de fratura Vertebral relacionadas com osteoporose rato Nude

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DOI:

10.3791/55928

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28 de setembro de 2017

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Neste artigo

Resumo

O objetivo do presente protocolo é gerar um modelo de fratura de compressão vertebral osteoporose-relacionados do rato nude que pode ser avaliada no sentido longitudinal na vivo usando uma microcomputed semiautomated baseado em tomografia computadorizada quantitativa análise estrutural.

Resumo

Fraturas por compressão vertebral relacionadas com osteoporose (OVCFs) são uma necessidade comum e clinicamente não satisfeita com o aumento da prevalência, como a população do mundo envelhece. Modelos animais de OVCF são essenciais ao desenvolvimento de estratégias de engenharia de tecido translacional pré-clínicos. Enquanto um número de modelos existe atualmente, este protocolo descreve um método otimizado para induzir defeitos vertebrais altamente reprodutíveis múltiplos em um único rato nude. Uma tomografia computadorizada romance longitudinal semiautomated microcomputed (µCT)-com base quantitativa análise estrutural dos defeitos vertebrais também é detalhado. Brevemente, ratos foram fotografados em vários pontos de tempo no pós-operatório. O exame de dia 1 foi reorientado para uma posição padrão, e um volume padrão de interesse foi definido. Exames subsequentes µCT de cada rato foram registrados automaticamente para a digitalização de dia 1 para que o mesmo volume de interesse foi então analisado para avaliar para formação de osso novo. Esta abordagem versátil pode ser adaptada a uma variedade de outros modelos em análise baseada em imagem longitudinal poderia beneficiar de alinhamento preciso de semiautomated 3D. Tomados em conjunto, este protocolo descreve um sistema facilmente quantificável e facilmente reproduzível para pesquisa de osteoporose e osso. O protocolo sugerido demora 4 meses para induzir a osteoporose em ratos ovariectomizados nus e entre 2,7 e 4 h para gerar, de imagem e analisar dois defeitos vertebrais, dependendo do tamanho do tecido e equipamento.

Introdução

Mais de 200 milhões de pessoas no mundo sofrem de osteoporose1. O patológico subjacente à diminuição de densidade mineral óssea (DMO) e microarquitetura óssea alterada aumentar a fragilidade óssea e, consequentemente, o risco relativo de fratura2. A osteoporose é tão prevalente e prejudiciais à saúde que a OMS definiu uma preocupação de saúde pública. Além disso, como a população do mundo é esperada para a idade, osteoporose deverá tornar-se ainda mais comum.

Fraturas osteoporóticas vertebrais de compressão são as fraturas de fragilidade mais comuns, estimadas em mais de 750.000 por ano nos Es....

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Protocolo

todas as experiências em animais foram realizadas sob um protocolo aprovado pelo Comitê de uso (IACUC) do Cedars-Sinai Medical Center (protocolo # 3609) e institucional Cuidado Animal. A anestesia foi administrada para todos os procedimentos cirúrgicos e de imagem. Todos os animais estavam alojados em conformidade com protocolos aprovados IACUC.

Nota: O desenho experimental do presente protocolo é mostrado na Figura 1. Comprar ratos de seis semanas de idade com seus ovários cirurgicamente removido e alimentá-los um LCD consistindo de fosfato de cálcio e 0,77% de 0,01%. Após um período de 4 meses de um LCD, p....

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Resultados

Usando este protocolo, pode-se imagem e quantificar a regeneração de n = 8 modelados osteoporóticos vertebrais defeitos através de pontos de tempo diferentes. O jogo anatômico obtido pelo processo de registo permite a análise do mesmo VOI em todos os pontos de tempo. Isso resulta em uma análise histomorfométrica 3D longitudinal altamente precisos, mesmo quando as margens do defeito original já não são reconhecíveis. Usamos cinco pontos de tempo (dia 1, semana 2, semana 4, semana 8 e seman.......

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Discussão

A osteoporose é a causa mais prevalente de fraturas de compressão vertebral, causada por um aumento da carga sobre a coluna vertebral e que resultam no colapso do corpo vertebral. No entanto, é praticamente impossível gerar uma lesão em um roedor que autenticamente replica um colapso vertebral semelhante. Em vez disso, os pesquisadores criar um cilíndrico vazio no centro do corpo vertebral para imitar OVCFs16,17,18,

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Divulgações

Esta pesquisa foi apoiada por uma concessão do Instituto da Califórnia para medicina regenerativa (CIRM) (TR2-01780).

Agradecimentos

A pesquisa foi apoiada por uma concessão do Instituto da Califórnia para medicina regenerativa (CIRM) (TR2-01780).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
IsofluranoMWI Saúde Animal, Pasadena, CA501017
BetadineSolutionMWI Saúde Animal, Pasadena, CA4677
Gluconato de clorexidina 2% esfolianteMWI Saúde Animal, Pasadena, CA510083
Álcool isopropílico 70% -quart MWISaúde Animal, Pasadena, CA501044
CarprofenoMWI Saúde Animal, Pasadena, CA26357
Buprenorfina 0,3 mg / mLMWI Saúde Animal, Pasadena, CA56163
Ratos nus atímicos ovariectomizadosHarlan Laboratories, Indianápolis, INHsd: RH-Foxn1 rnu
Alimentos com baixo teor de cálcioNewco Distributors, Inc., CA1814948 (5AV8 AIN-93M com baixo teor de cálcio)
Tamponamento fosfato SalinoLife Technologies Corporation
Dermabond JE J ETHICONDHVM12
Máquina de anestesiaPatterson ScientificTEC 3EX
Câmaras de indução com tampo deslizantePatterson Scientific78917833
ProStation Estação de trabalho aquecidaPatterson Scientific78914731
Campo cirúrgicoHALYARD HEALTH INC89101
Sistema de retração do fixador magnéticoFine Science Tools, Inc., CA18200-50
Tesoura de dissecação, 10 cm, curva, SSWorld Precision Instruments, FL14394
Tesoura de íris, 11,5 cm, 45 ° Ângulo, serrilhado, afiado / afiadoWorld Precision Instruments, FL503225
Forceps, no. 5World Precision Instruments, FL555048FT
Micro Mosquito Hemostatic ForcepsWorld Precision Instruments, FL503360
Gaze de algodão estérilMedtronic, MINNEAPOLIS, MN9024
Lanças de Absorção - Montadas / EstéreisFine Science Ferramentas, CA18105-01
Seringa, 1 mLTERUMO TERUMO MEDSS-01T
Agulha, calibre 25BD MED SYS INJECTION SYS
Capa de fluxo laminarBakerSterilGARD e3-Classe II Tipo A2 Unidade
Cauterização TérmicaWorld Precision Instruments, FL501292
Micro-Broca OmniDrill115/230VWorld Precision Instruments, FL503598
Trefinas para Micro Broca, Ferramentasde Ciência Fina18004-20
3-0 Vicryl não tingido 27" SH coneJ E J ETHICON1663G
4-0 Ethilon preto 18" PC3 corte convencionalJ E J ETHICON1954G
Conebeam in vivo microCT (vivaCT 40)Scanco MedicalvivaCT 40
SCANCO Medical microCT systems suiteScanco MedicalvivaCT 40
Software de análiseBiomedical Imaging, Mayo Clinic, Rochester, MNAnalisar 12Software de análise de imagem
Pomadapara os olhos veterinário
14190250 305127 de de Gabinete de Biossegurança de 2 mm de diâmetro, CA

Referências

  1. Wang, M. L., Massie, J., Perry, A., Garfin, S. R., Kim, C. W. A rat osteoporotic spine model for the evaluation of bioresorbable bone cements. Spine J. 7 (4), 466-474 (2007).
  2. Consensus development conference: prophylaxis and treatment of osteoporosis. Am J Med

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Reimpressões e permissões

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