이 프로토콜 산소 수준 재활용된 버퍼의 작은 볼륨과 침수 급성 hippocampal 조각 활동 종속 시 냅 스가 소성 녹음의 방법 론 적 측면에서의 안정화를 설명 합니다.
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방법 논문
급성 Hippocampal 조각에 작은 볼륨 재활용-, 관류-침수 형 챔버 시스템 유지에 시 냅 스가 소성을 기록
이 논문에서
요약
초록
비록 뇌 조각에 실험 1951 년부터 사용 되었습니다, 문제는 필드 잠재적인 또는 세포내 녹음을 수행할 때 시 냅 시스 전송의 조음의 안정적이 고 성공적인 분석을 달성의 가능성을 감소 시키는 남아 있다. 이 원고는 상용 침수 챔버에 필드 흥분 성의 postsynaptic 잠재력 기록에 대 한 급성 뇌 조각의 유지 보수에 대 한 실험 조건 개선에 도움이 될 수 있는 방법론 기능을 설명 합니다. 와 유출 carbogenation 단위. 유출 carbogenation 약물 실험의 비용 효율성을 향상 시키기 위해 작은 버퍼 저수지의 재활용에 의존 하는 실험에서 산소 수준 안정화에 도움이 됩니다. 또한, 원고는 시 냅 시스 전송의 활동-종속 시 냅 스가 소성에 다른 carbogenation 모드와 자극 패러다임의 효과 검사 하는 대표적인 실험을 선물 한다.
서론
1951 년에 처음 보고 급성 뇌 조각 실험 실시1했다. Piriform 피2,3 , hippocampal 신경 해 마4, 중 septotemporal 축 transversely 상호는 발견에서 성공적인 생체 외에서 녹음 후 1971 년에는 첫 체 외에 녹음 hippocampal 신경 활동의 달성된5이었다. Vivo에서 그리고 생체 외에서 조건 하에서 뉴런의 신경 생리학 또는 neurostructural 매개 변수의 유사성은 여전히6의 일부 토론 주제 하지만 1975 년에, Schwartzkroin7 표시는 기저 뉴런의 속성은 체 외에서 고 hippocampal 형성에 afferents의 그 높은-주파수 자극 (즉, tetanization)의 시 냅 스 전위8오랫동안 촉진 유도. 신경 활동의 기록 electrophysiological
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프로토콜
동물 동물 보호의 설립된 기준 및 뇌 과학 연구소 및 상태 키 실험실의 의학 신경 생물학의 복 단 대학, 상해, 중국의 절차에 따라 유지 되었다.
1. 솔루션 준비
주: 자료의 테이블을 참조 하십시오.
- 조각화 버퍼 (수정된 Gey 솔루션) 준비: 92 m m NaCl, 2.5 m m KCl, 1.25 m m NaH2포4, 30 mM NaHCO3, 25 mM 포도 당, 20 mM HEPES, 3mm 나+-pyruvate, 10mm MgSO4및 0.5 m m CaCl2.
- Carbogenation 없이 1 M NaOH를 사용 하 여 7.6에 pH를 조정 합니다.
- 4 ° c.에 버퍼 저장
참고: 적정 흐린 액체를 명확히. osmolality 305-310 mOsm입니다. Carbogen21 5% 이산화탄소와 95% 산소를 포함합니다. - 실제의 최종 조성 주는 중 탄산염과 포도 당을 포함 하지 않는 실제의 재고 솔루션 x 10를 diluting 하 여 준비: 124 mM NaCl, 2.5 m m KCl, 2.5....
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결과
프로토콜 섹션에서 우리는 조각의 급성 hippocampal hippocampal 형성 (그림 1)의 복 부와 중간 부분에서 남성 C57BL/6 마우스 및 남성 Wistar 쥐 (5-8 주)의 준비를 설명. 슬라이서 플랫폼에 반구의 위치 그들을 안정적으로 유지 하는 데 도움이 하 고 안정화 한 천 또는 agarose의 필요를 제거 합니다. 관류 시스템 자체 운영 하는 액체의 필요한 유량을 주고 높은 회전에 연동 펌프를 기반으로 합니다. 따라서, 펌프 내에서 표준 튜브의 급속 한 노후화 만든 우리 비 실리콘 튜브를 사용 하 여 극복 하는 상당한 문제 (ID: 1.02 m m). 유출에 대 한 부정적인 압력 2.79 m m 내부 직경 두 병렬 연결 된 관에 의해 만들어집니다. 이 두 관 액체(그림 4)의 열망에 대 한 수 있도록 녹음 실에서.......
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토론
인터페이스 슬라이스 챔버 더 강력한 시 냅 스 응답25,26,,2728전시, 침수 챔버 패치 클램프 기록 및 형광에 대 한 추가 편의 제공 이미지입니다. 따라서, 우리 신경17,18, 형광 프로브의 이미지를 쉽게 확장할 수 있는 상업 잠수 슬라이스 챔버를 사용 하 여 급성 hippocampal 조각에서 필드 잠재적인 녹음의 여러 측면을 설명 했습니다. 19. 조각 준비25, 외 많은 시간 후에 녹음 실에서 지속적인 carbogen 레벨의 유지 보수 장애물의 하나를 나타냅니다. Carbogen .......
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공개 사항
저자는 연구 잠재적인 상충으로 해석 될 수 있는 어떤 상업적 또는 금융 관계의 부재에서 실시 되었다 선언 합니다.
감사의 글
트 면 실시, 분석, 실험을 설계 하 고 원고를 썼다. D.X. 및 C.P. 그림 준비에서 원조 하 고 실험을 실시. 이 작품은 NSFC (31320103906)에 의해 지원 되었다 결핵을 111 프로젝트 (B16013)
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| < 강력 > 시약 필요 < / strong> | |||
| NaCl | Sinopharm 화학 시약, 중국 | 10019318 | |
| KCl | Sinopharm 화학 시약, 중국 | 10016318 | |
| KH 2 < / sub>PO 4 < / sub> | Sinopharm 화학 시약, 중국 | 10017618 | |
| MgCl2< / sub> &미드닷; 6H < 이하> 2 < / 하>O | 시노팜 화학 시약, 중국 | 10012818 | |
| CaCl2< / sub> | Sinopharm 화학 시약, 중국 | 10005861 | |
| NaHCO 3< / sub> | Sinopharm 화학 시약, 중국 | 10018960 | |
| 포도당 | 시노팜 화학 시약, 중국 | 10010518 | |
| NaH 2< / sub> PO4 | Sinopharm 화학 시약, 중국 | 20040718 | |
| HEPES | 시그마 | H3375 | |
| 피루브산 나트륨 | 시그마 | A4043 | |
| MgSO4 | Sinopharm 화학 시약, 중국 | 20025118 | |
| NaOH | Sinopharm 화학 시약, 중국 | 10019718 | |
| 해부 | |||
| Decapitators | Harvard 장치 | 55-0012 | 쥐 참수용 |
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| LED 광원 | Lumen Dynamics Group, 캐나다 | X-cite 120LED | |
| 마이크로 피펫 | 하버드 장치 | GC150TF | 세포 외 기록 |
| 붕규산 마이크로 피펫 | Sutter, 미국 | BF150-86 | 패치 클램프 |
| 텅스텐 전극 | AM 시스템, 미국 | 575500 | |
| 연동 펌프 | 긴, 연동 | 중국 BT00-300T | |
| 튜브 | ISMATEC, Wertheim, 독일 | SC0309 | 1x 유입, ID: 연동 펌프용 1.02mm |
| 튜브 | ISMATEC, Wertheim, 독일 | SC0319 | 유출용 2x 튜브, ID: 2.79mm |
| CCD 카메라 | PCO, 독일 | pco.edge sCMOS | |
| 렌즈 청소지 | Kodak | ||
| 50mL 원추형 원심 분리기 튜브 | Thermo scientific | 339652 | |
| Prechamber | Warner Instruments | BSC-PC | |
| 인라인 히터 | Warner Instruments | SF-28 | |
| 온도 컨트롤러 | Warner Instruments | TC-324B |
참고문헌
- McIlwain, H. Metabolic response in vitro to electrical stimulation of sections of mammalian brain. Biochem J. 48 (4), (1951).
- McIlwain, H., Richards, C. D., Somerville, A. R. Responses in vitro from the piriform cortex of the rat....
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재인쇄 및 허가
