Linfoma mantellare (MCL) è un difficile da trattare il disordine delle cellule di B ed è altrettanto difficile stabilire in un modello murino di xenotrapianto di MCL primario per studiare e sviluppare terapie. Qui, descriviamo la Costituzione ottimale degli xenotrapianti MCL in topi per aiutare a capire la sua biologia sottostante.
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Articolo metodologico
Attecchimento del tumore in un modello murino di xenotrapianto di umano linfoma a cellule mantellari
In questo articolo
Sommario
Abstract
I linfociti B sono attori chiave nella circolazione delle cellule immuni e hanno principalmente ospite e risiedono negli organi linfoidi. Mentre le cellule B normali proliferano solo quando sono stimolati da linfociti T, cellule di B oncogeniche sopravvivono ed espandono autonomamente in nicchie di organo non definito. Linfoma mantellare (MCL) è un tale disordine delle cellule B, dove il tasso di sopravvivenza mediana dei pazienti è di 4-5 anni. Ciò richiede la necessità di meccanismi efficaci per cui l'homing e l'attecchimento di queste cellule vengono bloccate al fine di aumentare la sopravvivenza e la longevità dei pazienti. Di conseguenza, lo sforzo di sviluppare un modello di xenotrapianto del topo per studiare l'efficacia di terapie MCL bloccando l'homing meccanismo in vivo è della massima importanza. Sviluppo di animali destinatari per lo xenotrapianto cellulare umana per testare farmaci fase precoce lungo sono state perseguite, come modelli di mouse preclinici rilevanti sono cruciali per nuovi agenti terapeutici dello schermo. Questo modello animale è sviluppato per evitare il rigetto dell'organo umano e per stabilire un modello per le malattie umane, e può essere uno strumento estremamente utile per studiare la progressione della malattia di tipi diversi di linfoma ed eseguire test preclinici di candidati farmaci per malignità ematologiche, come MCL. Abbiamo stabilito un modello di topo dello xenotrapianto che servirà come una risorsa eccellente per studiare e sviluppare nuovi approcci terapeutici per MCL.
Introduzione
I linfociti di natura svolgono un ruolo importante nella sorveglianza immunitaria, e traffico dei linfociti è un passo fondamentale nel montaggio dell'antigene specifico immunità1,2. Questo processo include la migrazione dei linfociti T naive al timo nel flusso sanguigno e da lì a organi linfoidi secondari, inclusi i linfonodi, placche di Peyer o milza, dove si incontrano gli antigeni cognati. I linfociti B differenziano nel midollo osseo e la migrazione di cellule naive nei follicoli di organi linfoidi secondari3. Alcune di queste cellule di B legano l'antigene con loro recettore e ven....
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Protocollo
I campioni di sangue umano sono stati utilizzati secondo procedure approvate dalle commissioni di sperimentazione umana dell'ospedale dell'Università di Ginevra ed etica locali.
Procedure degli animali sono state effettuate in conformità con l'istituzionale etico Comitato di cura degli animali in Ginevra, Svizzera e l'ufficio del veterinario cantonale (numero di autorizzazione: 15/26/GE).
1. preparazione delle cellule mononucleari di anima periferica primaria (PBMCs) tramite la separazione di gradienti di densità
Nota: 3-5 mL di sangue periferico è stata ottenuta da pazienti con MCL in u....
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Risultati
Il manoscritto descrive un protocollo ottimizzato per il corretto sviluppo di un modello murino di xenotrapianto per engraftment delle cellule MCL. Preparazione di una popolazione di puro delle cellule (in questo caso cellule MCL), è molto critica per sviluppare il successo degli xenotrapianti MCL. Figura 1 rappresenta la procedura preparativa per l'isolamento di cellule mononucleate da sangue di MCL paziente tramite la separazione di gradienti di densità. Le.......
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Discussione
Studi clinici sono possibili per i farmaci che sono in fase avanzata di sviluppo, ma non possono essere utilizzati per la scoperta di nuovi farmaci. Gli sforzi per sviluppare degli animali destinatari per lo xenotrapianto umano delle cellule al fine di testare farmaci fase precoce lungo sono stati perseguiti. Qui vi presentiamo un modello animale che evita il rigetto del trapianto umano e può stabilire un modello per le malattie umane, quali MCL. Questo è attualmente un modello di xenotrapianto d'avanguardia per studiare.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere nessun concorrenti interessi finanziari.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato dalla Ligue Genevoise contre le Cancer, Fondation Dr. Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 e 2914-02-2012 e Swiss National Science Foundation Grant 31003A_156760 e 310030-153456.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Terreni ficoll-paque | GE Healthcare | 17-1440-02 | per la separazione di cellule mononucleate |
| RPMI Medium 1640 | Tecnologie Gibco-Life | 61870-010 | per la diluizione di campioni di sangue |
| Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | lavaggio di cellule |
| Albumina sierica bovina (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | per la preparazione di PBS con l'1% di BSA utilizzato nel lavaggio delle cellule durante l'isolamento |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | marcatore di cellule pan-B umane |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | marcatore di cellule pan-B umane |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | marcatore di cellule pan-B umane |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | marcatore |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Proteina di superficie cellulare tipicamente assente in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Marker pan-leucocitario |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Proteina di superficie cellulare tipicamente assente nei |
| topi MCL NOD scid gamma (NSG) | River Laboratories | 5557 | utilizzato per sviluppare xenotrapianti di MCL in questo studio |
| Kit per l'arricchimento delle cellule B umane Easy sep | Tecnologie delle cellule staminali | 19054 | utilizzato per arricchire le cellule B per ottenere cellule pure da iniettare nei topi |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | utilizzato per caratterizzare il campione di MCL e per studiare gli organi per l'attecchimento di MCL |
| 1X tampone | tampone di lisi del sangue rosso (NH4Cl 8.024 mg/l; KHCO3 1.001 mg/l; EDTA. Na2· 2H2O 3,722 mg/l ) |
Riferimenti
- Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B. Human chemokines: an update. Annu Rev Immunol. 15, 675-705 (1997).
- Baggiolini, M. Chemokines and leukocyte traffic. Nature. 392, 565-568 (1998).
- Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J.
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Ristampe e permessi
