Évaluation des propriétés anticoagulantes et anti-inflammatoires de cellules endothéliales à l’aide de la Culture cellulaire 3D et sang total Non-anticoagulant

Riccardo Sfriso; Anjan Bongoni; Yara Banz; Nikolai Klymiuk; Eckhard Wolf; Robert Rieben

doi:10.3791/56227

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Article de méthode

Évaluation des propriétés anticoagulantes et anti-inflammatoires de cellules endothéliales à l’aide de la Culture cellulaire 3D et sang total Non-anticoagulant

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DOI :

10.3791/56227

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5 septembre 2017

Riccardo Sfriso¹^,² , Anjan Bongoni³ , Yara Banz⁴ , Nikolai Klymiuk⁵ , Eckhard Wolf⁵ , Robert Rieben¹

¹Department of Clinical Research, University of Bern, ²Graduate School for Cellular and Biomedical Sciences, University of Bern, ³Immunology Research Centre, St. Vincent's Hospital Melbourne, ⁴Institute of Pathology, University of Bern, ⁵Institute of Molecular Animal Breeding and Biotechnology, Ludwig-Maximilian University

Dans cet article

Résumé

Nous présentons un modèle in vitro qui permet l’étude et l’analyse de la coagulation dans le sang entier, de non anticoagulé. Anticoagulation dans le système dépend de l’effet anticoagulant naturel des cellules endothéliales saines et activation des cellules endothéliales se traduira par la coagulation.

Résumé

In vivo, les cellules endothéliales sont primordiales pour l’anticoagulation naturelle du sang circulant. Par conséquent, activation des cellules endothéliales entraîne la coagulation du sang. Ce phénomène est observé dans de nombreuses situations cliniques, comme la transplantation d’organes en présence d’anticorps d’anti-donneurs préformés, y compris la xénotransplantation, ainsi que dans la lésion d’ischémie/reperfusion. Afin de réduire l’expérimentation animale selon les 3R normes (remplacement, réduction et raffinement), in vitro modèles pour étudier l’effet des cellules endothéliales activation sur la coagulation du sang serait hautement souhaitable. Cependant, des systèmes de culture de cellules endothéliales à plat communs fournissent un rapport surface-volume 1-5 cm² de l’endothélium par millilitre de sang, ce qui n’est pas suffisant pour traitement anticoagulant naturel, endothéliale induite. Mise en culture des cellules endothéliales avec des microporteurs perles peut accroître le ratio de surface-volume de 40 à 160 cm2/ml. Cet augmentation du rapport est suffisant pour assurer l’anticoagulation « naturelle » de sang, afin que l’utilisation des anticoagulants peut être évitée. Ici un in vitro avec des microporteurs système est décrit pour étudier les effets de la modification génétique de cellules endothéliales porcines sur la coagulation du sang entier, non anticoagulé. Dans l’essai décrit, principales cellules endothéliales aortiques porcines, soit type sauvage (WT) ou transgéniques pour humain CD46 thrombomoduline et ont été cultivées avec des microporteurs perles puis exposés au sang humain non-anticoagulé fraîchement tiré. Ce modèle permet la mesure et la quantification des cytokines comme activation marqueurs de complément et de la coagulation dans le plasma sanguin. En outre, l’imagerie de cellules endothéliales activées et des dépôts d’immunoglobulines, complément - et la coagulation des protéines sur les perles d’endothelialized ont été réalisées par microscopie confocale. Ce test permet également de tester des médicaments qui sont censés pour prévenir la coagulation et, par conséquent, activation des cellules endothéliales. Sur le dessus de son potentiel de réduire le nombre d’animaux utilisés pour de telles enquêtes, l’essai décrit est facile à réaliser et toujours reproductible.

Introduction

L’endothélium vasculaire est constitué d’une monocouche de cellules endothéliales (EC) qui bordent la lumière des vaisseaux sanguins. Dans un état physiologique, ce repos sont chargés de l’entretien d’un environnement anti-inflammatoire et un anticoagulant. ¹ c’est médiée par l’expression d’anticoagulant et protéines anti-inflammatoires sur la surface de l’EC. Par exemple, activation de EC causée par l’ischémie/reperfusion blessures ou rejet vasculaire de (xeno-) transplantés entraîne une modification de la surface endothéliale d’un anticoagulant et anti-inflammatoires état pro-inflammatoire et Pro-coagulant organes État. ¹