Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Техника минимально инвазивной поперечной аорты сдавливания в мышей для индукции гипертрофия левого желудочка

24.7K просмотров

DOI:

10.3791/56231

25 сентября 2017 г.

В этой статье

Краткое содержание

Целью настоящего Протокола является описание шаг за шагом технику минимально инвазивной поперечной сужение аорты (TAC) мышей. Ликвидация интубации и вентиляции, которые являются обязательными для часто используемых стандартной процедуры миниинвазивная TAC упрощается процедура оперативного и уменьшает нагрузку на животное.

Аннотация

Поперечная сужение аорты (TAC) мышей является одним из наиболее распространенных хирургических методов для экспериментального исследования давление перегрузки индуцированной оставил гипертрофия желудочков (ГЛЖ) и ее прогрессирования сердечной недостаточности. В большинстве сообщенных расследований эта процедура выполняется с интубации и вентиляции животное, которое делает его сложных и трудоемких и добавляет к хирургической бремя для животного. Целью настоящего Протокола является описание упрощенной методики малоинвазивной TAC без интубации и вентиляции мышей. Важнейшие шаги техники подчеркнуты достижения низкой смертности и высокой эффективности в стимулировании ГЛЖ.

Самцов мышей C57BL/6 (10-недельных, 25-30 g, n = 60) были под наркозом с одной внутрибрюшинной инъекции смеси кетамина и ксилазина. В спонтанно дыхание животных после 3-4 мм верхний частичной стернотомия, сегмент 6/0 Шелкового шва резьбой через глаз помощи лигирование был принят под аорты и связали над притупляются 27-иглы. Шам эксплуатируемых животных прошли же хирургической подготовки, но без сужение аорты. Эффективность процедуры в стимулировании ГЛЖ подтверждено значительное увеличение соотношения вес сердца/тела. Этот показатель получен в течение 3, 7, 14 и 28 дней после операции (n = 6-10 в каждой группе и каждый момент времени). Используя нашу технику, ГЛЖ наблюдается по сравнению с фиктивным животных от 7 день через день 28 ТЭК. Оперативное и поздно (более 28 дней) смертности являются весьма низкие на 1,7%.

В заключение наша экономически техника минимально инвазивной TAC в мышах носит очень низкой постановляющей части и послеоперационная смертность и очень эффективна в привлечении ГЛЖ. Это упрощает процедура оперативного и уменьшает нагрузку на животное. Она может быть легко выполнена, следуя критические шаги, описанные в настоящем Протоколе.

Введение

За последние годы, было проведено исследование сердечной недостаточности в жизнеспособных животных модели1. По сравнению с больших животных моделей сердечной недостаточности, малые животные модели имеют многочисленные потенциальные преимущества. Рядом с нижней расходы жилищного строительства и технического обслуживания малые животные модели доступны для больше исследователей из-за менее сложных необходимое2.

Мышь сердечной недостаточности модели предлагают многие из те же преимущества, как крыса модели. В дополнение к сокращению жилья стоит3, мышь модели выгоду от налич....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

мужчины C57BL/6J мышей (10 недель, 25-30 г, n = 60) используются в настоящем Протоколе. Животные получают гуманной помощи в соответствии с руководящими принципами, сформулированными французским министерством сельского хозяйства и высшего образования и научных исследований, и все процедуры выполняются в соответствии с директивой Совета Европейского сообщества от 24 ноября 1986 () 86/609/EEC) и французских законов. Протокол был утвержден " региональный комитет по этике для животных экспериментов CREMEAS " (#2016092816207606).

1. Подготовка к операции

  1. сохранить мышей на одну неделю после прибытия в объекте животных на 12h /....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Оперативное и конце выживания
Постановляющей части выживания был очень высоким, 98,3% (59 из 60) для всей серии (TAC и Шам эксплуатируемых животных). Только смерть наступила в результате кровотечения осложнение в мыши, строганные Шам операции. Послеоперационные выживания в период наблюдения за 28 дней также был отличный, 98,3% (58 из 59). Только в конце послеоперационные смерть произошла в TAC мыши на день (D) 16, возможно, сердечного происхождения.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Цель настоящего Протокола заключается в представлении Пошаговые иллюстрации хирургической техники для малоинвазивных поперечной сужение аорты в мышах. 2,других авторов8сообщила подробное техническое описание поперечной сужение аорты у мышей. Однако, эти следователи выполняют операции после интубации и вентиляции животных. Использование дополнительного шага интубации-вентиляции увеличивает сложность и продолжительность всей процедуры и глобальной стресса животное .......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы имеют никакого конфликта интересов раскрыть.

Благодарности

Эта работа была поддержана Грант (N ° 32016) швейцарского фонда сердечно-сосудистой системы в рт.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Хирургический микроскопOlympusSZX2-TR30
БритваRowentaNomad TN3650FO
<прочный>шов:
Полипропилен 7/0EthiconBV-1X
Полипропилен 6/0BBraunC0862061
Шелк 6/0 лигатура FST18020-60
Полипропилен 4/0Этикон8683
Полипропилен 5/0ЭтиконZ303
<стронг>Лекарства:
кетаминМериалИмалг&эгрейв; ne 1000, LBM154AD
КсилазинБайерРомпун 2%, KP09PPC
БупренорфинЦеваВетергезик, 072013
Инструменты: 
Кусачкидля кости Тонкие хирургические инструменты16101-10
Приспособление для лигированияТонкие хирургические инструменты18062-12
Щипцы для связыванияТонкие хирургические инструменты18026-10
Иглодержатель Crile-WoodТонкие хирургические инструменты12003-15
Микрохирургические щипцы Тонкие хирургические инструменты11003-12
Микрохирургические щипцы Тонкие хирургические инструменты11002-12
Тканевые щипцыТонкие хирургические инструменты11021-12
Иглодержатель для микрохирургииТонкие хирургические инструменты12076-12
Ножницы для микрохирургииТонкие хирургические инструменты91501-09
Ножницы МайоТонкие хирургические инструменты14511-15
Нож с 11 лезвиямиFine Surgical Инструменты10011-00
РНК экстракция и qPCR:
TriReagentEuromedexTR-118-200
Rneasy Mini kitQiagen74704
Qubit Флуориметрический анализ РНКFisher Scientific10034622
RNA 6000 Nano kitAgilent5067-1511
Высокопроизводительный набор кДНКFisher Scientific10400745
Taqman Master MixFisher Scientific10157154
Taqman BNP праймерыFisher ScientificMm01255770_g1
Taqman ANP праймерыFisher ScientificMm01255747_g1 
Праймеры Taqman ACEFisher ScientificMm00802048_m1
Праймеры Taqman Col1a1 Fisher ScientificMm00801666_g1
Taqman TGFb праймерыFisher ScientificMm01178820_m1
Taqman Gapdh праймерыFisher ScientificMm99999915_g1
ABIPrism  ТермоамплификаторApplied Biosystems7000
Программное обеспечение:
GraphPad PrismGraphPad Prism 7
Корм для животных
Полнорационный рацион для взрослых крыс/мышейБезопасныйUB220610R

Ссылки

  1. Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. Animal models of cardiac cachexia. Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).
  2. Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).
  3. Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги