Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Bir atmosferik basınç plazma Jet yeni uygulama SH-SY5Y hücrelerin glikoz yoksunluğu kaynaklı yaralanma karşı bir nöro-koruyucu ajan olarak

8.4K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/56323

⸱

9 Ekim 2017

 ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Düşük doz atmosferik basınç plazma glikoz yoksunluğu kaynaklı SH-SY5Y yaralanmalar tedavisine nöroprotektif uygulanması için bir iletişim kuralı.

Özet

Kendi emisyon reaktif nitrojen türler (RNS) ve Reaktif oksijen türlerine (ROS) birden çok türde içerdiğinden atmosferik basınç plazma jet (APPJ) son yıllarda birden fazla disiplinlerden gelen pek çok araştırmacı dikkatini çekti. Bizim önceki çalışma oksidatif stres kaynaklı yaralanmalara karşı APPJ cytoprotective etkisini göstermiştir. Bu da çalışmanın amacı SH-SY5Y hücreleri glikoz yoksunluğu kaynaklı yaralanma helyum APPJs nöroprotektif uygulamalara ilişkin detaylı vitro tedavi protokolü sağlamaktır. SH-SY5Y insan Nöroblastom türetilmiş hücre kültürünü RPMI 1640 orta % 15 fetal buzağı serum ile birlikte devam edildi. Kültür orta sonra glikoz APPJ tedavi öncesi olmadan RPMI 1640 için değiştirildi. Bir hücre kuluçka 1 h kuluçka sonra hücre sayım Kit 8'i kullanarak hücre canlılık kararlıydı. Sonuçları gösterdi ki, glikoz yoksunluğu grubuna göre hücre APPJ ile tedavi önemli ölçüde artmış hücre canlılığı doz bağımlı bir şekilde s/iyi bir optimal doz gözlenen 8 ile sergiledi. Bu arada, helyum akışı glikoz yoksunluğu indüklenen hücre bozukluğu üzerinde bir etkisi vardı. Sonuçlarımız APPJ glikoz yoksunluğu için ilgili merkezi sinir sistemi hastalıkları için bir tedavi yöntemi olarak potansiyel olarak kullanılabileceğini göstermiştir. Bu iletişim kuralı da bir cytoprotective uygulaması olarak farklı Engelli, diğer hücreler için kullanılabilir ama hücre kültürü ve APPJ tedavi koşulları ayarlamalara gidilmesi ve tedavi dozu nispeten düşük olması gerekir.

Giriş

Yetişkin beyin neredeyse sadece glikoz enerji metabolizması normal fizyolojik koşullar altında için bir substrat kullanır. İnsan beyninin vücut ağırlığı sadece % 2'si kabul ettiğiniz anlamına gelir ama toplam glikoz vücut1içinde yaklaşık % 25'i kullanır. İyi belgelenmiş bu glikoz metabolizması bozukluğu önemli patolojik değişiklikler iskemik inme ve Alzheimer hastalığı (Ah), Huntington hastalığı (HD) ve Parkinson hastalığı (PD) de dahil olmak üzere çeşitli nörodejeneratif hastalıklar sırasında biridir 2,3. Glikoz ve bozulmuş glikoz alımı veya oksidatif fosforilasyon eksikliği doğrudan e....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. APPJ aygıt hazırlanması

dikkat: ilgili tüm malzeme güvenlik bilgi formları (MSDS) kullanmadan önce lütfen danışın. Lütfen uygun güvenlik yöntemleri bir duman hood ve kişisel koruyucu ekipman (koruyucu gözlük, koruyucu eldiven, önlük, vb) kullanımı da dahil olmak üzere tüm deneyler yaparken kullanın. Standart hücre işleme teknikleri (sterilizasyon, hücre kurtarma, cep passaging, hücre dondurma, hücre boyama, vb) protokolü gerektirir.

  1. Bir iç çapı 1 mm ile bir kuvars tüp seçin ve bir dış çapı 3 mm. düzgün kesit parlatma folyo kullanarak her iki ucunda.
  2. Nikel paslanmaz çelik iğne 1.0 mm çapı ile yüksek....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Veri en az üç bağımsız deneyler ortalama ± SD ifade edilir. Grup sonuçları için varyansı ANOVA kullanarak analiz edildi. Tüm analizleri p ve istatistiksel analiz yazılımı prizma kullanarak gerçekleştirilen < 0,05 istatistiksel anlamlılık için eşik yapıldı.

Hücre canlılığı CCK-8 kuluçka 4 h sonra ölçüldü. Şekil 3' te gösterildiği gibi glikoz yoksunluğu 44.1 ± kontrol grubuna kıyasla % 2.6 hücrelere SH-SY5Y canlılığı azaltılmış (normalde % 15 içeren RPMI 1640 ort.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

SH-SY5Y hücreleri bir insan Nöroblastom türetilmiş hücre satır ve bir uygun hücre modeli olarak nörotoksisite veya neuroprotection12 vitro araştırmalar yaygın olarak kullanılır. SH-SY5Y hücre kültürünü glikoz yoksunluğu koşulları için hassas. Hücre canlılığı özellikler optimum hücre canlılığı şartı çalışmaları için 1 h glikoz yoksunluğu sonra yaklaşık % 50 azalmıştır. Ayrıca, CCK-8 reaktif yok sitotoksisite hücrelere sahiptir ve hücreleri inkübe CCK-8 reaktif glikoz yoksunluğu koşullarda .......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Hiçbir çıkar çatışmaları bu kağıt ile ilgili olarak ilan edildi.

Teşekkürler

Bu eser Pekin Nöroşirürji Enstitüsü (2014-11), Çin (NOS 11475019 ve 81271286) Ulusal Doğa Bilimleri temeli ve Pekin doğal Bilim Vakfı (No. 7152027) yenilik Fonu tarafından desteklenmiştir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
SH-SY5Y hücre hattıÇin Tip Kültür Toplama Merkezi3111C0001CCC000026
RPMI 1640 ortaThermo Scientific218750914 ° C'de saklanır; C
RPMI 1640 orta glikoz içermezThermo Scientific118790204 ° C'de saklanır; C
fetal buzağı serumuThermo Scientific16000044-20 ° C'de saklanır; C
tripsin-EDTA çözeltisiSolarbioT13004 ° C'de saklanır; C
96 kuyu plakasıcorning3599
Hücre Sayma Kiti-8 (CCK-8)Dojindo LaboratuvarlarıCK044 ° C'de saklanır; C
mikroplaka okuyucuTecanM200 Pro450 nm Yüksek voltajda absorbansı ölçmek için
Güç Amplifikatörü TrekPD06087gücü yükseltmek için
Fonksiyon Sinyal ÜreteciMaZe Elektronik Bilimi ve Belirlisinyali sağlamak içinteknoloji AT30120
Yüksek & Sinyaligörüntülemek için yüksek voltajlıTektronixP6015A
, Dijital Osiloskop Tektronix DPO4104B algılamak için Voltaj Probu

Kaynaklar

  1. Yang, S. H., et al. Alternative mitochondrial electron transfer for the treatment of neurodegenerative diseases and cancers: Methylene blue connects the dots. Prog. Neurobiol. , (2015).
  2. Bhat, A. H., et al.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Hücre Canlılık AnaliziHücre Sayım Kiti 8Helyum Akış HızıYüksek Gerilim AmplifikatörüNöroprotektif TedaviPlazma Tıbbı UygulamasıIn Vitro Protokol