इस अध्ययन में, हम neurodegenerative स्थितियों के तहत रक्त मस्तिष्क बाधा के विघटन के मूल्यांकन के लिए एक आसान और कुशल प्रक्रिया प्रस्तुत करते हैं । हमारे उद्देश्य को प्राप्त करने के लिए, हम उच्च आणविक वजन fluorescein isothiocyanate बला (FITC) संचार-माउस jugular नस में एल्ब्युमिन और पैरेन्काइमा माइक्रोस्कोपी द्वारा मस्तिष्क प्रतिदीप्ति में अपने रिसाव का मूल्यांकन किया ।
रक्त मस्तिष्क बाधा (BBB) अखंडता के विघटन अलग स्नायविक और neurodegenerative रोगों के लिए एक आम सुविधा है । हालांकि परेशान BBB homeostasis और मस्तिष्क विकारों के रोगजनन के बीच पुनरावृत्ति आगे की जांच की जरूरत है, विकास और एक विश्वसनीय प्रक्रिया के सत्यापन के लिए सही BBB परिवर्तन का पता लगाने के लिए महत्वपूर्ण हो सकता है और एक उपयोगी उपकरण का प्रतिनिधित्व संभावित रोग प्रगति की भविष्यवाणी और लक्षित चिकित्सकीय रणनीतियों के विकास के लिए ।
यहाँ, हम एक neurodegenerative हालत में BBB रिसाव का मूल्यांकन करने के लिए एक आसान और कुशल प्रक्रिया वर्तमान हटिंगटन रोग के एक नैदानिक माउस मॉडल में होने वाली है, जिसमें BBB की पारगम्यता में दोषों स्पष्ट रूप से पता लगाने में precociously हैं रोग । विशेष रूप से, उच्च आणविक भार fluorescein isothiocyanate बला (FITC)-एल्ब्युमिन, जो BBB को केवल जब बाद में ख़राब कर रहा है पार करने में सक्षम है, तीव्रता से एक माउस jugular नस और संवहनी या parenchymal जिलों में इसके वितरण में संचार है तो प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा निर्धारित किया जाता है ।
ग्रीन फ्लोरोसेंट के संचय-मस्तिष्क पैरेन्काइमा कार्यों में एल्ब्युमिन ंयायपालिका BBB पारगम्यता के एक सूचकांक के रूप में और, जब छवि जंमू प्रसंस्करण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके quantitated, ग्रीन प्रतिदीप्ति तीव्रता के रूप में सूचित किया है ।
केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के भीतर Homeostasis (सीएनएस) उचित संचार और न्यूरॉन कोशिकाओं के समारोह के लिए एक शर्त है. सीएनएस पैरेन्काइमा कसकर endothelial रक्त मस्तिष्क बाधा (BBB) है, जो परिधीय खून और मस्तिष्क के बीच इंटरफेस का प्रतिनिधित्व करता है और इन दो जिलों के बीच पार बात में एक निर्णायक भूमिका निभाता है द्वारा परिधि से बंद है1 ,2. BBB एक जटिल और गतिशील तीन आयामी संरचना मुख्य रूप से विशेष सूक्ष्म पोत endothelial कोशिकाओं (ईसीएस) के माध्यम से एक दूसरे से जुड़े से बना है सेलुलर जंक्शन परिसरों तंग जंक्शनों (TJs)-और pericytes से घिरा हुआ, ंयूरॉन अंत और astrocyte पैर प्रक्रियाओं1,2.
शारीरिक स्थितियों के तहत, बरकरार BBB के अत्यंत कम पारगम्यता पोषक तत्वों और अन्य अणुओं के परिवहन के सख्त विनियमन मस्तिष्क के अंदर और बाहर सुनिश्चित करता है, और में होने वाले परिवर्तनों से एक अद्वितीय संरक्षण के साथ सीएनएस प्रदान रक्त है कि तंत्रिका गतिविधि और संभावित परिधीय अपमान के खिलाफ प्रभावित हो सकता है की संरचना1,2,3।
BBB अखंडता के विघटन और इसकी बढ़ी पारगम्यता लंबे समय से कई स्नायविक और neurodegenerative विकारों के लिए एक प्रमुख विशेषता का गठन करने के लिए जाना जाता है हटिंगटन रोग सहित4 (एचडी)5,6, तथापि , क्या इस तरह के एक रोग एक प्रेरणात्मक घटना या बीमारी के दौरान एक प्रचारक घटना है अभी भी अस्पष्ट है । BBB टूटने के समय भी मायावी रहता है, तथापि, हमारे समूह और दूसरों द्वारा उभरते सबूत इंगित करता है कि बाधित BBB अखंडता रोग प्रगति में एक देर घटना का प्रतिनिधित्व नहीं करता है, बल्कि एक प्रारंभिक चरण6,7 , 8, जो दीर्घकालिक परिणाम हो सकते हैं ।
इस के साथ मन में, यह neurodegeneration में BBB टूटने प्रकट precociously महत्वपूर्ण है ताकि रोग की प्रगति और मस्तिष्क क्षति की भविष्यवाणी के लिए उपयोगी रणनीतियों को विकसित करने के लिए और वैकल्पिक और अधिक लक्षित उपायों को सफलतापूर्वक विकसित करने में सक्षम ऐसे व्यवधान के नैदानिक परिणामों को कम करना. BBB हानि की विश्वसनीय इमेजिंग है, इसलिए, दोनों प्रयोगात्मक अनुसंधान और मस्तिष्क रोगों के नैदानिक प्रबंधन में प्रमुख महत्व का है ।
इस पत्र में, हम उच्च आणविक भार fluorescein isothiocyanate बला-एल्ब्युमिन (FITC-एल्ब्युमिन) का उपयोग करके एक HD माउस मॉडल में BBB पारगम्यता के मूल्यांकन के लिए एक सफल और सरल प्रक्रिया का वर्णन. Extravasation FITC-एल्ब्युमिन, जो आम तौर पर बाधा पार नहीं कर सकते, मस्तिष्क पैरेन्काइमा में BBB रिसाव के एक सूचकांक के रूप में मापा गया था । इस तकनीक को आसानी से चूहों के लिए अनुकूलनीय है और अंय रोग की स्थिति cerebrovasculature हानि9,10द्वारा विशेषता ।
जानवरों पर सभी प्रक्रियाओं को IRCCS नेऊरोमेद एनिमल केयर रिव्यू बोर्ड द्वारा अनुमोदित किया गया और by & #34; Istituto िे डि Sanit & #224; & #34; (परमिट नंबर: 1163/2015-पीआर) और यूरोपीय संघ के निर्देश के अनुसार थे २०१० पशु प्रयोगों के लि?…
तकनीक का वर्णन हम यहां मस्तिष्क रोग की स्थिति के तहत BBB रिसाव का पता लगाने के लिए मुख्य रूप से उपयोगी है । BBB शिथिलता विविध neurologic विकारों के एक आम सुविधा के रूप में ध्यान प्राप्त कर रहा है4. हम पहले इस…
The authors have nothing to disclose.
यह काम “Fondazione नेऊरोमेद” द्वारा समर्थित किया गया था और इतालवी स्वास्थ्य मंत्रालय द्वारा वित्त पोषित “Ricerca Corrente” V.M. करने के लिए
Albumin-fluorescin isothiocyanate conjiugate | SIGMA | A9771-100MG | |
pAb anti-Laminin | Novus Biologicals | NB300-144 | |
CY3 anti-rabbit made in goat | MILLIPORE | AP132 | |
SUPERFROST PLUS | Thermo Scientific | J1800AMNZ | |
Cover Slips 24 X 50 mm | Thermo Scientific (DIAPATH) | 61050 | |
Kilik Optimal Cutting Temperature (OCT) compound | Bio Optica | 05-9801 | |
VECTASHIELD Mounting Media | VECTOR | H-1500 | Mounting media with DAPI |
iNSu/Light Insulin Disposible Syringe | RAYS Health &Safety | INS1ML26G13 | |
30G 1/2" | BD Microlance | 304000 | Needle for Insulin disposible Syringe |
Scalpel Handle | F.S.T. | 91003-12 | |
#22 Disposable Scalpel blads | F.S.T. | 10022-00 | |
Fine Iris scissors 10.5 cm | F.S.T. | 14094-11 | |
Dumont Forceps #5745 45° 0.10 x 0.06 mm | F.S.T. | 11251-35 | |
Graefe Forceps 10 cm | F.S.T. | 11051-10 | |
Dumont Forceps #5 0.1 X 0.06 mm | F.S.T. | 11251-20 | |
Medical patch | Medicalis | 34788 | |
Sterile disposable towel drape | Dispotech | TVO50VE | |
Stereoscopic Microscope | NIKON | SMZ 745 T | |
Optic Illuminator LED light (C-FLED2) | NIKON | 1003167 | Optic Illuminator for Stereoscopic Micrscope |
Eclipse Ni-U Microscope | Nikon | 932162 | Epifluorescence Microscope |
Microscope digital Camera | Nikon | DS-Ri2 | Microscope camera |
Intenslight | Nikon | C-HGFI | Microscope lamp |
NIS-Elements 64 bit | Nikon | AR 4.40.00 | Analysis Software |
Electric Razor | Gemei | GM-3007 |