चिप आधारित तीन आयामी perfused लघु बायोरिएक्टर में सेल संस्कृति
Summary
हम सूक्ष्म बायोरिएक्टर में तीन आयामी कोशिकाओं की खेती के लिए चिप आधारित एक मंच का वर्णन. एक चिप ऊपर 10 Mio के लिए घर कर सकते हैं. कोशिकाओं है कि एक बाँझ, बंद संचलन पाश में द्रव का प्रवाह है, ऑक्सीजन तनाव आदि के संबंध के साथ ठीक से परिभाषित शर्तों के तहत खेती की जा सकती.
Abstract
हम तीन आयामी कोशिकाओं की खेती के लिए चिप आधारित एक सेल संस्कृति प्रणाली विकसित की है. चिप आम तौर पर गैर biodegradable polymers, उदाहरण के लिए, polycarbonate या सूक्ष्म इंजेक्शन मोल्डिंग द्वारा polymethyl methacrylate, माइक्रो गर्म embossing या thermoforming सूक्ष्म से निर्मित है. लेकिन, यह भी जैव degradable पॉलिमर से निर्मित किया जा सकता है. इसका समग्र आयामों एक 0.7 x 20 x 20 x 0.7 1 मिमी (hxwxl). इस्तेमाल किया चिप्स के मुख्य सुविधाओं या तो की एक 1156 घन सूक्ष्म कंटेनर (cf चिप) ग्रिड 120-300 के आकार प्रत्येक x 300 x 300 (hxwxl) μ या 300 μ के diameters के साथ दौर recesses और गहराई के 300 μ (r चिप). पाड़ 10 Mio घर कर सकते हैं. एक तीन आयामी विन्यास में कोशिकाओं. एक इष्टतम पोषक तत्व और गैस की आपूर्ति के लिए, चिप एक bioreactor आवास में डाला जाता है. bioreactor एक बंद steril परिसंचरण पाश है कि, सरल विन्यास में, additionaly एक रोलर पंप और गैस की आपूर्ति के साथ एक मध्यम जलाशय शामिल है का हिस्सा है. bioreactor छिड़काव, superfusion, या यहाँ तक कि एक मिश्रित ऑपरेशन मोड में चलाया जा सकता है. हम सफलतापूर्वक कई सप्ताह की अवधि में प्राथमिक कोशिकाओं सेल लाइनों के रूप में के रूप में अच्छी तरह से खेती. चूहे प्राथमिक यकृत कोशिकाओं के लिए हम अधिक से अधिक 2 सप्ताह के लिए organotypic कार्यों के संरक्षण दिखा सकता है. Hepatocellular कार्सिनोमा सेल लाइनों के लिए हम जिगर केवल थोड़ा मानक monolayer संस्कृति में व्यक्त नहीं या विशिष्ट जीन की प्रेरण दिखा सकता है. इस प्रणाली को भी उपयोगी हो सकता है के रूप में स्टेम सेल लाइनों के साथ पहली भेदभाव प्रयोगों के बाद से एक स्टेम सेल की खेती प्रणाली का वादा कर रहे थे हो सकता है.
Protocol
Discussion
हम सक्रिय रूप से perfused सूक्ष्म बायोरिएक्टर में तीन आयामी कोशिकाओं की खेती के लिए चिप आधारित एक मंच विकसित किया है. चिप्स से गैर biodegradable के रूप में अच्छी तरह से biodegradable polymers सूक्ष्म इंजेक्शन मोल्डिंग, गर्म embossing के रूप में <…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम Mechthild Herschbach और Anke Dech उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए धन्यवाद देना चाहूंगा.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cells | Other | ATCC | HB-8065 | |
| Collagen I from rat tail | Reagent | Roche Diagnostics | 11 179 179 001 | |
| PARIS kit | Reagent | Ambion Inc. | AM1921 | |
| Syto16 | Reagent | Invitrogen | S7578 | |
| anti cytokeratin 18 | Antibody | Abcam plc | ab668 | Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/100 in PBS |
| Anti E-cadherin | Antibody | Abcam plc | ab1416 | Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/50 in PBS. |
| Goat anti-albumin | Reagent | Bethyl Laboratories | E80-129 | Primary Ab, goat anti-human Albumin, used 1/200 in PBS |
| Rabbit anti-mouse IgG1 | Antibody | Invitrogen | A11059 | Secondary Ab, Alexa Flour 488 conjugated, used 1/100 in PBS + 0.5 % BSA |
| Cy3 anti-goat IgG | Reagent | Jackson ImmunoResearch Lab | 705-165-003 | Cy3 AffiniPure donkey a-goat IgG Ab, used 1/700 in PBS + 0.5% BSA |
References
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