पुरानी सिलिकॉन जांच और एक समृद्ध ट्रेडमिल उपकरण में हिप्पोकैम्पस जगह कोशिकाओं की रिकॉर्डिंग के आरोपण
Summary
हम पुरानी सिलिकॉन जांच प्रत्यारोपण और चूहों कि सिर चल रहे है में जगह कोशिकाओं को रिकॉर्ड करने के लिए विविध चरणों का वर्णन-एक क्यू-समृद्ध ट्रेडमिल तंत्र पर तय की ।
Abstract
मस्तिष्क समारोह को समझने के लिए एक महत्वपूर्ण अपेक्षित व्यवहार और कोशिका गतिविधि की पहचान को संबद्ध है । सिलिकॉन जांच न्यूरॉन्स गतिविधि के बड़े पैमाने पर electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए उन्नत इलेक्ट्रोड हैं, लेकिन उनके जीर्ण आरोपण के लिए प्रक्रियाओं अभी भी अविकसित हैं. हिप्पोकैम्पस जगह कोशिकाओं की गतिविधि के लिए पर्यावरण में एक जानवर की स्थिति के साथ सहसंबंधी जाना जाता है, लेकिन अंतर्निहित तंत्र अभी भी अस्पष्ट हैं । जगह कोशिकाओं की जांच करने के लिए, यहां हम तकनीक का एक सेट है जो पुरानी सिलिकॉन जांच प्रत्यारोपण के लिए उपकरणों के निर्माण से एक क्यू-समृद्ध ट्रेडमिल तंत्र में जगह क्षेत्र गतिविधि की निगरानी के लिए सीमा का वर्णन । एक माइक्रो ड्राइव और एक टोपी फिटिंग और एक साथ 3 डी मुद्रित प्लास्टिक भागों बन्धन द्वारा निर्मित कर रहे हैं । एक सिलिकॉन जांच माइक्रो ड्राइव पर मुहिम शुरू की है, साफ है, और डाई के साथ लेपित । एक पहली सर्जरी के लिए एक माउस की खोपड़ी पर टोपी ठीक किया जाता है । छोटे स्थलों गढ़े और एक ट्रेडमिल की बेल्ट से जुड़ी हैं । चूहा ट्रेडमिल पर सिर तय चलाने के लिए प्रशिक्षित किया जाता है । एक दूसरी सर्जरी हिप्पोकैंपस में सिलिकॉन जांच प्रत्यारोपण, जो ब्रॉडबैंड electrophysiological संकेत दर्ज कर रहे है के बाद किया जाता है । अंत में, सिलिकॉन जांच वसूली और पुनः प्रयोग के लिए साफ है । ट्रेडमिल में जगह सेल गतिविधि के विश्लेषण जगह क्षेत्र तंत्र की विविधता का पता चलता है, दृष्टिकोण के लाभ रूपरेखा ।
Introduction
सिलिकॉन जांच electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए कई लाभ मौजूद है, तथ्य यह है कि वे तेजी से ऊतक नुकसान को कम करने के साथ डिजाइन किए है और यह कि वे घनी पैक रिकॉर्डिंग साइटों की एक सटीक लेआउट प्रस्तुत शामिल है1, 2,3,4. वे विभिन्न प्रजातियों में विभिंन प्रणालियों का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है,3,5,6, विविध दृष्टिकोण के साथ1,7। अभी तक, उनके आवर्तक उपयोग अभी भी अपेक्षाकृत क्योंकि उनकी लागत, कमजोरी के सीमित है, और तथ्य यह है कि पुरानी प्रयोगों के लिए सुविधाजनक तरीकों8कमी कर रहे हैं । 3डी प्रिंटिंग तकनीक में हाल ही के अग्रिमों ने इन नाजुक इलेक्ट्रोड के आसान हैंडलिंग की अनुमति देने के लिए माइक्रो-ड्राइव और हेड-प्लेट जैसे उपकरणों की कस्टम डिजाइनिंग को संभव बनाया है । एक पहले कदम में, हम वर्णन कैसे बनाने के लिए और उपकरणों का एक सेट है कि हम पुरानी सिलिकॉन जांच14के आरोपण के लिए विकसित किया है का उपयोग करें ।
जगह कोशिकाओं को आम तौर पर भूलभुलैया में चल रहे स्वतंत्र रूप से चलती जानवरों का उपयोग कर अध्ययन कर रहे हैं, हाल ही में वे भी आभासी वातावरण में जांच की गई15 और ट्रेडमिल apparatii9 (चित्र 1a) में. इन प्रायोगिक तरीकों का लाभ है कि पशुओं सिर रोका जा सकता है की पेशकश, 2-फोटॉन माइक्रोस्कोप15का उपयोग कर, पैच-क्लैंप16, और optrode9,10,11 तकनीक आसान है, पशु व्यवहार और पर्यावरण cues12पर बढ़ाया नियंत्रण प्रदान करने के अलावा । एक दूसरे चरण में, हम चूहों प्रशिक्षण और एक ट्रेडमिल उपकरण में जगह सेल गतिविधि रिकॉर्डिंग के लिए प्रक्रियाओं पेश करेंगे ।
Protocol
वर्णित सभी विधियां कोरिया विज्ञान एवं प्रौद्योगिकी संस्थान की एनिमल केयर एंड फीमेल कमेटी ने अनुमोदित कर दी हैं ।
1. माइक्रो ड्राइव और इलेक्ट्रोड की तैयारी
- माइक्रो-ड्राइव कोडांतरण <…
Representative Results
एक माउस को पहले एक दो मीटर लंबे cues (चित्रा 1C) से रहित बेल्ट पर चलने के लिए प्रशिक्षित किया गया था । इलेक्ट्रोड आरोपण के बाद, एक ही लंबाई के एक नए बेल्ट, लेकिन पेश cues के 3 जोड़े ट्रेडमिल ?…
Discussion
इस तरह के हिप्पोकैम्पस जगह क्षेत्रों के रूप में तंत्रिका प्रक्रियाओं को समझने के लिए महत्वपूर्ण है ंयूरॉन गतिविधि की पुरानी रिकॉर्डिंग । पुरानी सिलिकॉन जांच implantantation प्रदर्शन करने के लिए हमारे दृष्टि?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम कोरिया इंस्टीट्यूट ऑफ साइंस एंड टेक्नोलॉजी इंस्टीट्यूशनल प्रोग्राम (प्रोजेक्ट्स No. 2E26190 और 2E26170) और ह्यूमन फ्रंटियर साइंस प्रोग्राम (RGY0089/2012) द्वारा समर्थित था ।
Materials
| Silicon Probe | Neuronexus | Buzsabi32 | Recording electrode |
| Recording system | Intantech | RHD2132/RHD2000 | |
| 3D printer | Asiga | Pico Plus 27 | High resolution printer for micro-drive |
| 3D printer | Stratasys | Mojo | Lower resolution printer for hat components |
| Stereotaxic apparatus | Kopf | Model 963 | |
| Binocular microscope | Leica | M60 | |
| Treadmill apparatus | We build them |
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