गुब्बारा आधारित चोट के लिए प्रेरित Myointimal हाइपरप्लासिया में माउस पेट महाधमनी
Summary
यह लेख महाधमनी गुब्बारा चोट के बाद myointimal हाइपरप्लासिया (MH) के विकास का अध्ययन करने के लिए एक murine मॉडल प्रदर्शित करता है ।
Abstract
पशु मॉडलों का उपयोग MH, एक प्रकार का रोग के लिए एक प्रमुख कारण की एक बेहतर समझ के लिए आवश्यक है । इस अनुच्छेद में, हम एक murine गुब्बारा अनाच्छादन मॉडल है, जो बड़े पशुओं में स्थापित पोत चोट मॉडलों के साथ तुलनीय है प्रदर्शन करते हैं । गुब्बारा कैथेटर के साथ महाधमनी अनाच्छादन मॉडल नैदानिक सेटिंग नकल करता है और तुलनीय pathobiological और शारीरिक परिवर्तन की ओर जाता है । संक्षेप में, महाधमनी abdominalisमें एक क्षैतिज चीरा प्रदर्शन के बाद, एक गुब्बारे कैथेटर पोत में डाला जाएगा, फुलाया, और प्रतिगामी शुरुआत की । गुब्बारे की मुद्रास्फीति intima चोट और पोत के overdistension के लिए नेतृत्व करेंगे । कैथेटर को हटाने के बाद, महाधमनी चीरा एकल stiches के साथ बंद कर दिया जाएगा । इस लेख में दिखाया मॉडल प्रतिलिपि, प्रदर्शन करने के लिए आसान है, और जल्दी से और मज़बूती से स्थापित किया जा सकता है । यह महंगा प्रयोगात्मक चिकित्सकीय एजेंटों, जो एक किफायती फैशन में लागू किया जा सकता है मूल्यांकन के लिए विशेष रूप से उपयुक्त है । विभिंन नॉकआउट-माउस उपभेदों का उपयोग करके, MH विकास पर विभिंन जीनों के प्रभाव का आकलन किया जा सकता है ।
Introduction
कोरोनरी और परिधीय धमनियों में धमनी का रोग और रोगियों की मृत्यु दर पर एक बड़ा प्रभाव है1। एक अंतर्निहित रोग तंत्र myointima हाइपरप्लासिया (MH) है, जो वृद्धि प्रसार, प्रवास, और संवहनी चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं (एसएमसी)2से extracellular मैट्रिक्स प्रोटीन के संश्लेषण की विशेषता है । एसएमसी पोत की मीडिया परत में स्थित है और लुमेन की सतह को उत्तेजना पर माइग्रेट । Stimulatory संकेतों में वृद्धि कारकों, साइटोकिंस, सेल-सेल संपर्क, लिपिड, extracellular मैट्रिक्स घटकों, और यांत्रिक कतरनी और खिंचाव बलों3,4,5,6शामिल हैं । पोत दीवार की चोटों, रोग या iatrogenic, endothelial कोशिका और चिकनी मांसपेशी कोशिका क्षति का कारण है और भड़काऊ प्रतिक्रियाओं को उत्तेजित, और इस तरह MH7के लिए सीसा ।
विभिन्न पशु मॉडल वर्तमान में धमनी की चोट और myointima हाइपरप्लासिया अध्ययन करने के लिए उपलब्ध हैं । सूअर या कुत्तों की तरह बड़े जानवरों को मनुष्य के साथ एक समान धमनी और कोरोनरी एनाटॉमी साझा करने का लाभ है और एंजियोप्लास्टी तकनीक, प्रक्रिया की जांच अध्ययन के लिए विशेष रूप से उपयुक्त हैं, और उपकरणों8। हालांकि, सुअर मॉडल उच्च thrombogenicity9,10की खामी है, जबकि कुत्तों केवल पोत चोट11के लिए एक हल्के प्रतिक्रिया है । इसके अलावा, सभी बड़े पशु मॉडल विशेष आवास, उपकरण, और कर्मचारियों की आवश्यकता है, जो उच्च लागत के साथ जुड़े रहे है और एक संस्था में हमेशा उपलब्ध नहीं हैं । छोटे पशु मॉडल चूहों और चूहों में शामिल हैं । चूहों की तुलना में, चूहों कम लागत और मॉडल बाहर दस्तक की एक किस्म के अस्तित्व के फायदे हैं. इस वीडियो में वर्णित मॉडल ApoE के साथ जोड़ा जा सकता है-/चूहों को बारीकी से atherosclerotic वाहिकाओं में एंजियोप्लास्टी के नैदानिक सेटिंग की नकल करने के लिए एक पश्चिमी आहार के साथ खिलाया12. पिछले मॉडल तार चोट13, द्रव सुखाना14, वसंत15, या कफ चोट16के माध्यम से संवहनी चोट प्रेरित । चोट की प्रकृति के बाद से बहुत विकास और महाराष्ट्र के संविधान को प्रभावित करेगा, एक गुब्बारे कैथेटर का उपयोग करने के लिए पोत चोट प्रेरित नैदानिक सेटिंग की नकल करने के लिए सबसे अच्छा तरीका है ।
इस लेख में हम एक उपंयास विधि का वर्णन करने के लिए एक चूहे में गुब्बारा कैथेटर के साथ महाराष्ट्र प्रेरित । एक RX-बंदरगाह (चित्र 1a) के साथ एक गुब्बारा कैथेटर (१.२ मिमी x 6 मिमी) का उपयोग intimal परत के परिमार्जन की अनुमति देता है और, एक ही समय में, पोत के एक overdistension की प्रेरण । इन दोनों कारकों में से महाराष्ट्र के विकास के लिए महत्वपूर्ण ट्रिगर हैं । इस मॉडल के लिए प्रेक्षण समय 28 दिन17है ।
Protocol
Representative Results
Discussion
यह आलेख myointimal हाइपरप्लासिया के विकास का अध्ययन करने के लिए एक murine मॉडल को प्रदर्शित करता है और अंतर्निहित रोग प्रक्रियाओं की खोज और नई दवाओं या चिकित्सीय विकल्पों के परीक्षण की अनुमति देता है ।
<p class="jove_content…Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखक उसे तकनीकी सहायता के लिए ईसाई Pahrmann धंयवाद ।
dw अधिकतम कदे फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था । T.D. और kröner स्नेहन (2012_EKES. 04) और ड्यूश Forschungsgemeinschaft (DE2133/2 -1 _ से अनुदान प्राप्त किया । एस. एस. ड्यूश Forschungsgemeinschaft से अनुसंधान अनुदान प्राप्त (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/
Materials
| 10-0 Ethilon suture | Ethicon | 2814G | |
| 3 mL Syringe | BD Medical | 309658 | |
| 37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| 5-0 prolene suture | Ethicon | EH7229H | |
| 6-0 prolene suture | Ethicon | 8706H | |
| Acid Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Trichrome staining |
| Antigen retrieval solution | Dako | S1699 | |
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Trichrome staining |
| Bepanthen Eye and Nose ointment | Bayer | 1578675 | Eye ointment |
| Betadine Solution | Betadine Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
| C57BL/6J | Charles River | Stock number 000664 | |
| Clamp applicator | Fine Science Tools | 18056-14 | |
| Collagen 3 | abcam | ab7778 | Antibody |
| DAPI | Thermo Fischer | D1306 | |
| Donkey anti-Goat IgG AF555 | Invitrogen | A21432 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A21206 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A11055 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF555 | Invitrogen | A31572 | Secondary antibody |
| Ethanol 70% | Th. Geyer | 2270 | |
| Ethanol 96% | Th. Geyer | 2295 | |
| Ethanol absolute | Th. Geyer | 2246 | |
| FAP | abcam | ab28246 | Antibody |
| Forceps fine | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Forceps standard | Fine Science Tools | 11023-10 | |
| Glacial Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| Hair clipper | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Heparin | Rotexmedica | PZN 3862340 | 25.000 I.E./mL |
| High temperature cautery kit | Bovie | 18010-00 | |
| Image-iT FX Signal Enhancer | Invitrogen | I36933 | Blocking solution |
| Light Green SF | Waldeck | 1B-211 | Trichrome staining |
| Microsurgical clamp | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine – 4mm |
| MINI TREK Coronary Dilatation Catheter 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange | Abbott | 1012268-06U | |
| Molybdatophosphoric acid hydrate | Merck | 1.00532.0100 | Trichrome staining |
| NaCl 0,9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | |
| Needle holder | Fine Science Tools | 12075-14 | |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
| Orange G | Waldeck | 1B-221 | Trichrome staining |
| Paraffin | Leica biosystems | REF 39602004 | |
| PBS pH 7,4 | Gibco | 10010023 | |
| PFA 4% | Electron Microscopy Sciences | #157135S | |
| Ponceau S solution | Serva Electrophoresis | 33427 | Trichrome staining |
| Primary antibody diluent | Dako | S3022 | |
| Prolong Gold Mounting solution | Thermo Fischer | P36930 | Mounting solution for immunofluorescence stained slides |
| Replaceable Fine Tip | Bovie | H101 | |
| Resorcin-Fuchsin Weigert | Waldeck | 2E-30 | Trichrome staining |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofen |
| Scissors | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| Scissors Vannas-style | Fine Science Tools | 15000-03 | |
| Secondary antibody diluent | Dako | S0809 | |
| Fast acting Adhesive MINIS 3x1g | UHU | 45370 | Cyanoacrylate |
| Slide Rack | Ted Pella | 21057 | |
| SM22 | abcam | ab10135 | Antibody |
| SMA | abcam | ab21027 | Antibody |
| Staining dish | Ted Pella | 21075 | |
| Surgical microscope | Leica | M651 | |
| Tabotamp fibrillar | Ethicon | 431962 | Absorbable hemostat |
| Transpore Surgical Tape | 3M | 1527-1 | |
| U-100 Insulin syringe | BD Medical | 324825 | |
| Vessel Dilator | Fine Science Tools | 18603-14 | |
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Weigerts iron hematoxylin Kit | Merck | 1.15973.0002 | Trichrome staining |
| Xylene | Th. Geyer | 3410 |
References
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