İç kulak gen teslim yenidoğan Mouse için posterior semisirküler kanal yaklaşım
Summary
Bu çalışmada, iç kulak gen teslim yenidoğan farelerde için güvenilir bir yöntem olarak posterior semisirküler kanal yaklaşım tarif. Gen teslim posterior semisirküler kanal aracılığıyla tüm iç kulakta sıvı mümkün olduğunu göstereceğiz.
Abstract
İç kulak gen tedavisi büyük söz işitme kaybı ve baş dönmesi için potansiyel bir tedavi olarak sunmaktadır. İç kulak gen terapisi başarısı önemli belirleyicileri işitme kaybı en aza indirerek tutarlı iletim verimliliği hedef hücre tiplerinin sonuçları bir teslimat yöntemi bulmak için biridir. Bu çalışmada, iç kulak gen teslim yenidoğan farelerde için uygun bir yöntem olarak posterior semisirküler kanal yaklaşım tarif. Gen teslim posterior semisirküler kanal aracılığıyla tüm iç kulakta sıvı mümkün olduğunu göstereceğiz. Posterior semisirküler kanal kolay anatomik tanımlanması, hem de en az gerekli temporal kemik manipülasyon, iç kulak gen teslim için cazip bir seçenek yapmak bu cerrahi yaklaşım.
Introduction
İç kulak gen terapisi araştırma çalışmaları hızla gelişmekte olan bir alandır. Bu savaş ototoksisite, gürültü travma ve kalıtsal işitme kaybı1çeşitli hayvan modellerinde uygulanmıştır. Birkaç son çalışmalar mutant farelerde iç kulak gen terapisi teslim2,3,4,5,6sonra, işitme ve denge işlevlerini fonksiyonel iyileşme göstermiştir 7. bir anahtar faktörler iç kulak gen terapisi başarı iç kulak erişmek için kullanılan cerrahi yaklaşım olduğunu belirleme. İdeal olarak, cerrahi yaklaşım gerçekleştirmek kolay olurdu, anatomik işaretlerini tutarlı ve kolay tanımlamak olurdu ve hedeflenen hücre tiplerinin elde edilen iletim yüksek olacaktır.
Bir son çalışmada, viral gen terapisi whirler mutant fare (işitme kaybı ve Vestibüler disfonksiyon bir model) posterior semisirküler kanalından enjekte edildiğinde duyusal saç hücrelerinin verimli iletim Vestibüler içinde görülmüş gösterdi organları de olduğu gibi koklea5. Duyusal saç hücre iletim yüksek verimlilik iyileştirme bu mutant farelerde işitsel ve Vestibüler fonksiyonların sonuçlandı.
Bu makalede, Yenidoğan fare iç kulak erişmek için posterior semisirküler kanal yaklaşım biz ayrıntılı olarak tarif.
Protocol
Representative Results
Discussion
Birkaç cerrahi yaklaşım kemirgen iç kulak erişmek için tarif edilmistir. Posterior semisirküler kanal ve endolymphatic kesesi yaklaşımlar genellikle Vestibüler organları1erişmek için kullanılır, ancak Cochleostomy ve yuvarlak pencere yaklaşımlar en sık koklea, erişmek için kullanılır. Bir son çalışmada, o posterior semisirküler kanal enjeksiyonları viral gen tedavisi saç hücre iletim Vestibüler organ veya koklea5yüksek verimliliği sonuçland?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser NIDCD bölümü, Intramural araştırma /NIH (DC000082-02 W.W.C.) yanı sıra DC000081 fonlarından için gelişmiş görüntüleme çekirdek tarafından desteklenmiştir. Bizim hayvanlar için bakım için NIDCD hayvan tesis personel için sana şükrediyoruz.
Materials
| Operating microscope | Zeiss | OPMI Pico ENT microscope. Other dissection microscopes would also work. | |
| Micro-forcepts | Fine Science Tools | 11251-10, 11295-51 | #5 and #55 Dumont |
| Micro-scissors | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Nanoliter2000 microinjector | World Precision Instruments | ||
| Heating pad | Mastex | Model 500/600 | |
| 5-0 vicryl sutures | Ethicon | ||
| AAV8-whirlin | Vector Biolabs | ||
| Glass pipette | Sutter Instruments | B100-75-10 | Borosilicate glass |
References
- Chien, W. W., Monzack, E. L., McDougald, D. S., Cunningham, L. L. Gene therapy for sensorineural hearing loss. Ear Hear. 36, 1-7 (2015).
- Askew, C., et al. Tmc gene therapy restores auditory function in deaf mice. Sci Transl Med. 7, 295 (2015).
- Akil, O., et al. Restoration of hearing in the VGLUT3 knockout mouse using virally mediated gene therapy. Neuron. 75, 283-293 (2012).
- Pan, B., et al. Gene therapy restores auditory and vestibular function in a mouse model of Usher syndrome type 1c. Nat Biotechnol. 35, 264-272 (2017).
- Isgrig, K., et al. Gene Therapy Restores Balance and Auditory Functions in a Mouse Model of Usher Syndrome. Mol Ther. 25, 780-791 (2017).
- Lentz, J. J., et al. Rescue of hearing and vestibular function by antisense oligonucleotides in a mouse model of human deafness. Nat Med. 19, 345-350 (2013).
- Shibata, S. B., et al. RNA Interference Prevents Autosomal-Dominant Hearing Loss. Am J Hum Genet. 98, 1101-1113 (2016).
- Van Sluyters, R. C., Obernier, J. A. Guidelines for the care and use of mammals in neuroscience and behavioral research. Contemp Top Lab Anim. 43, 48 (2004).
- Chien, W. W., et al. Gene Therapy Restores Hair Cell Stereocilia Morphology in Inner Ears of Deaf Whirler Mice. Mol Ther. 24, 17-25 (2016).
- Hirose, K., Hartsock, J. J., Johnson, S., Santi, P., Salt, A. N. Systemic lipopolysaccharide compromises the blood-labyrinth barrier and increases entry of serum fluorescein into the perilymph. J Assoc Res Otolaryngol. 15, 707-719 (2014).
- Okada, H., et al. Gene transfer targeting mouse vestibule using adenovirus and adeno-associated virus vectors. Otol Neurotol. 33, 655-659 (2012).
- Suzuki, J., Hashimoto, K., Xiao, R., Vandenberghe, L. H., Liberman, M. C. Cochlear gene therapy with ancestral AAV in adult mice: complete transduction of inner hair cells without cochlear dysfunction. Sci Rep. 7, 45524 (2017).
