Meni الرسالة sperm seminal jel--dan özgür olmak için gereklidir. Bu çalışma yordamları kadın üreme sistemi sonrası cinsel birleşme sperm toplama ve meni الرسالة Süre ölçümünü sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Meni kadın üreme sistemi ve meni الرسالة farelerde ölçümü sonrası çiftleşme koleksiyonu
Bu makalede
Özet
Özet
Farelerde, boşalmış sperm rahim içinde yatırılır. Boşalma sonra meni değiştirir tutarlılık jel benzeri için sulu, adı verilen işlem الرسالة. Bu çalışmada, kadın üreme sistemi bir fare modeli sonrası ejaculated meni toplamak için nasıl gösterir. İlk, yetişkin dişi fareler içinde estrus sahne bir erkeğin kafeste gecede yer. Ertesi sabah, birleşme vajinal açılışında çiftleşme fiş varlığı tarafından doğrulandı. Çiftleşme tıkacı ile dişi fareler euthanized ve üreme her yolu (vajina, rahim, oviducts, yumurtalık), bir bütün olarak toplanan meni içerecek şekilde kapalı bir sistem sağlamak. Vajina meni tüpün içine serbest bırakmak için kesilmiş ve üreme yolu bir 1.5 mL microcentrifuge tüp yerleştirildi. En fazla sperm cilt analizi için emin olmak için dişsiz forseps vajinal sona kalan meni kovma yumurtalık ucundan boynuzları rahim sıkmak için kullanılmıştır. Tüm üreme yolu sonra atıldı. Meni içeren tüp kısaca aşağı bükülmüş. 25 μL kapiller pipet 180 ° açıyla (tüp duvara paralel) tüp içine yerleştirilmiştir. Kılcal Boru 25 μL hattına doldurmak için kullanılan süreyi kaydedildi. Meni--dan a kanıtlanmış erkek doğurmak genellikle yaklaşık 60-180 s 25 μL kılcal tüp doldurmak için alır. Bu sperm toplama tekniği de sperm görüntüleme ve motilite analizi gibi aşağı akım diğer uygulamalarda kullanılabilir.
Giriş
Kadın üreme yolu alt ve üst yolları oluşur. Üst üreme yolu fallop tüpleri, rahim ve endocerviks içerir. Alt üreme sistem ectocervix ve vajina içerir. İnsanlarda, vajina, ectocervix1' e komşu ön duvara ejaculated meni yatırılır. Farelerde, ancak, sperm rahim içine2çiftleşme sonra dakika içinde süpürüldü.
Sperm boşalma, sperm entrapped neden zarfında katılaşmış ve3immobilize seminal jel içerir. الرسالة immobilize sperm meni bir jel gibi sulu bir tutarlılık değiştirerek serbest bırakır. Sperm motilitesi ve memeli üreme için gerekli bir süreçtir. Meni الرسالة bilgisine nere....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvanlar ve bu çalışmada kullanılan yordamlar Washington State Üniversitesi (WSU) hayvan bakım ve kullanım Komitesi esaslarına göre ve WSU onaylı hayvan iletişim kuralları #4702 ve #4735 uygun olarak ele.
1. fareler
-
Standart C57BL/6J yetişkin erkek fareler veya ilgi diğer suşların kullanın. Hayvanlar altında ad libitum erişim su ve gıda ile sıcaklık ve nem kontrollü bir ortam sağlamak.
- 8 hafta eski 10 aylık arasında değişen erkek doğurmak kullanabilirsiniz. Sadece kanıtlanmış doğurmak deneylerde kullanın.
- Üreme yolu östrojen reseptör α ( Esr1 gen ta....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Meni ile verimli CTRL erkek çiftleşme sonra CTRL ve KO kadın yaklaşık 8 h dan toplanmıştır. 25 μL kılcal tüp meni ile doldurmak için geçen süre tarafından الرسالة (ya da meni viskozite) sayılabilir. CTRL uteri toplanan meni aldı 2.06 ±0.12 min (mean±S.E.M, n = 5) kılcal tüp (şekil 1) doldurmak için. Ancak, KO uteri toplanan meni 60 dk uzun sürdü (60,0 ±0.0, mean±S.E.M, n = 5) deneysel zaman. Bu veriler meni önemli ölçüde daha fazla dizel veya daha az CTRL viskoz KO uteri ka.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Meni ve kadın üreme yolu. salgılar arasındaki fizyolojik etkileşimler eski gösterdiği gibi fare uteri sperm toplama semen analizi vitro avantajları sağlayabilir Bu çalışmada sunulan teknikleri araştırmacılar sperm kalitesi hem de sperm canlılığı ve motilite ideal fizyolojik koşullarda belirlemek için izin verir. Ayrıca, uteri toplanan sperm kullanılarak gerçekleştirilen çeşitli aşağı akım analizleri, örneğin, sperm rahim ve sperm girme gerçek sperm sayısı ayrıca hareketliliği deneyleri için yansıması be.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Bu eser WW veteriner tıp Koleji (WSU) başlangıç fon tarafından desteklenmektedir. Yazarlar Sierra Olsen (WSU) bu el yazması eleştirel okuma için teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Kürdan | Diamond | 750-Düz | Otoklavlanmış steril, körelmiş kürdan kullanın. Nokta uçlu |
| Diseksiyon makası | kullanmayın Fisher | 08-940 | |
| Yaylı makas | Roboz | RS-5600 | |
| İnce forseps | Roboz | RS-5045 | |
| 25-μ L cam kılcal boru | VWR | 53432-761 | |
| Leibovitz ' s L-15 medya | Yaşam | Teknolojileri | 11415064 %1 FBS içeren takviye |
| Fetal sığır serumu (FBS)Gemini | Bio-Products | 100-106 | |
| 1.5 mL mikrosantrifüj tüpü | Axygen | MCT-150-C | |
| 2 mL mikrosantrifüj tüpü | Axygen | MCT-200-A | |
| Dijital kuru blok ısıtıcı | VWR | 13259-052 | Mikrosantrifüj tüpünü ısıtmak için Semen toplamadan önce |
| Minisantrifüj | Corning | LSE 6765 | |
| 35 mm kültür kabı | VWR | 10861-656 | |
| 15 mL polipropilen santrifüj tüpü | VWR | 10025-686 | |
| Su Banyosu | Hassasiyeti | TSGP05 | |
| Isıtmalı sahne stereomikroskobu | Leica Microsystems | MZ10F | Dokuyu sıcak tutmak için semen toplama |
| Brightfield mikroskobu | Leica Microsystems | DMi8 | İsteğe bağlı. Sperm hareketliliğinin video görüntülemesi için |
| Kamera | Leica Microsystems | DMC2900 | Opsiyoneldir. Sperm hareketliliğinin video görüntülemesi için |
| Cam slaytlar | Fisher | 12-552-3 | İsteğe bağlı. Sperm hareketliliğinin video görüntülemesi için |
| Lamel | VWR | 48393-059 | İsteğe bağlı. Sperm motilitesinin video görüntülemesi için |
| Bleach | dH2O ila %10 konsantrasyonda seyreltin |
Kaynaklar
- Suarez, S. S., Pacey, A. A. Sperm transport in the female reproductive tract. Hum Reprod Update. 12 (1), 23-37 (2006).
- Bedford, J. M., Yanagimachi, R. Initiation of sperm motility after mating in the rat and hamster. J Androl. 13 (5), 444-449 (1992).
- Lilja, H.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
