Этот документ описывает подготовку и оценку сфероидов матрица производные мезенхимальных стволовых клеток пуповины с моделью дефект двусторонних коленного сухожилия в крысу. Эта модель был связан с приемлемым заболеваемости был найден для выявления различий между необработанных и обработанных сухожилий и между двумя процедурами испытания.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Оценка терапии стволовой клетки в модели двустороннего коленного сухожилия травмы в крыс
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Регенеративной медицины обеспечивает Роман альтернатив для условий, которые ставят под угрозу традиционные методы лечения. Распространенность и заболеваемость плеча различных видов, в сочетании с ограниченной целебные свойства этой ткани, запрос поиска для клеточной терапии и самоходные разработка экспериментальных моделей для изучения их эффективности. Матрица производные мезенхимальные стволовые клетки пуповинной (UCM-MSC) являются привлекательными кандидатами, потому что они обильные, легко собирать, обойти этические проблемы и риск формирования тератома, но более тесно напоминающие примитивные стволовые клетки чем Взрослый ткани производные MSCs. значительный интерес была сосредоточена на Хитозан как стратегию для повышения свойств MSCs через сфероида формирования. Этот документ детали методы, чтобы изолировать UCM-MSCs, подготовить сфероидов хитозана фильм и анализировать влияние сфероида формирование на поверхности маркер выражения. Следовательно для имплантации в vivo сфероидов UCM-MSC, сформированные на фильм хитозана описано создание модели двустороннего коленного сухожилия травмы в крыс. Без осложнений было отмечено в исследовании в отношении заболеваемости, подчеркнуть рост эффекты, или ткани инфекции. Общая функциональная оценка оперированных крыс на 7 дней был ниже, чем у нормальных крыс, но вернулся к нормальной в течение 28 дней после операции. Гистологические десятки заживления тканей подтвердили наличие сгусток в лечение дефектов оценивается в 7 дней, отсутствие реакции инородного тела и прогрессирует исцеления в 28 дней. Эта модель дефект двусторонних коленная чашечка сухожилие управляет между индивидуальной вариативности через создание внутреннего контроля в каждом крыса, связанные с приемлемым заболеваемости и позволить выявить различия между необработанной сухожилий и лечения.
Введение
Сухожилия травмы является одним из наиболее распространенных причин значительные боли и мышечные атрофии различных видов1. В ветеринарной медицины сухожилия и связки травмы представляют особый интерес в лошадей, 82% всех травм в гонке лошади включать опорно-двигательного аппарата, а 46% из них влияет на сухожилий и связок,2,3. Формирование рубцовой ткани влияет на биомеханические свойства исцелил сухожилий и объясняет охраняемой прогноз для возвращения спортивная(ый) использования после сгибателей сухожилия травм; Re травм происходит в течение 2 лет в до 67% лошадей консервативному
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все методы, описанные здесь были одобрены институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) Западного университета медицинских наук.
1. изоляция и расширение MSCs от лошадиного пуповины матрица
- Получить через плаценту от взрослых кобылы (беременности) после того, как отмечено, рожает и асептически изолировать пуповины из плаценты. Держите пуповины в фосфатный буфер (PBS) с 1% пенициллин стрептомицином (P/S) при 4 ° C во время передачи до обработки.
- Вымойте пуповины дважды с комнатной температуре PBS с 1% P/S в 50 мл трубки. Раздел пуповины на фрагменты 2-дюймовый длиной 150 мм пластины и мыть в комнатной те....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
В текущем исследовании результаты представлены как означает ± SD (стандартное отклонение). Клетки были изолированы от пуповины 6 кобыл, и процент изолированных клеточных линий, выражая поверхности маркер каждой ячейки под стандарт или Хитозан принадлежности были сопоставлены с тест Фридмана, как непараметрический анализ дисперсии с повторяется меры. Для создания модели дефект сухожилия 8 крыс были использованы для оценки 7 дней после операции и 12 крыс были использованы для оценки 28 дней.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Лошадиный клетки были отобраны для этого проекта потому, что мы в конечном итоге намерены проверить кандидат подходы в управлении природных Тендинопатии лошадей. Сухожилия травм в лошадей действительно привлекательным, как природные модели плеча в человеке за биологическое сходство между лошадей поверхностные цифровой сгибатели и ахиллова сухожилия в людей41. Для Иммунофенотипирование клеток, в соответствии с критериями, рекомендованный международным обществом клеточной терапии42.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы имеют никакого конфликта интересов раскрыть.
Благодарности
Авторы хотели бы признать доктор Su, PhD, для ее статистического анализа данных. Авторы также поблагодарить доктора Мак-Клур, DVM, доктор DACLAM, за ее советы по анестезии и боль управления протоколы, используемые в исследовании. Этот проект был поддержан грантов от Западного университета медицинских наук канцелярии вице-президента для исследований (12678v) и USDA раздел 1433 фондов (2090).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| PBS 10x | Hyclone | SH30258.01 | Расходуемая |
| коллагеназа типа IA | Worthington | LS004197 | Расходуемая |
| DMEM с низким содержанием глюкозы | Hyclone | SH30021. FS | Расходуемая |
| фетальная бычья сыворотка | Гиклон | SH30910.03 | Расходный |
| пенициллин/стрептомицин 100x | Гиклон | SV30010 | Расходный |
| трипсин 0,25% | Гиклон | SH30042.01 | Расходный |
| материал Аккутаза | Инновационные клеточные технологии | AT104 | Расходный |
| трипан синий | Гиклон | SV30084.01 | Расходные материалы |
| Диметилсульфоксид | Sigma | D2650 | Расходные материалы |
| Хитозан | Sigma | C3646 | Расходные |
| Гидроксид натрия | Sigma | S8045 | Расходные материалы |
| Бычья сыворотка Альбумин | Гиклон | SH30574.01 | Расходные материалы |
| Круглое дно полистирольной трубки | Corning | 149591A | Расходные материалы |
| Мышь против лошадей CD44 (FITC) | AbD серотек | MCA1082F | Расходуемая |
| мышь против крыс CD90 (FITC) | AbD серотека | MCA47FT | Расходная |
| мышь против лошади MHC-II (FITC) | AbD серотек | MCA1085F | Расходная |
| мышь IgG1 (FITC) - Контроль изотипа | AbD серотек | MCA928F | Потребляемая |
| мышь моноклональная [SN6] до CD105 (FITC) | abcam | ab11415 | Расходуемая |
| мышь IgG1 (FITC) - Контроль изотипа | abcam | ab91356 | Расходная |
| мышь античеловеческая CD34 (FITC) | BD | BDB560942 | Расходная |
| мышь IdG1 каппа (FITC) | BD | BDB555748 | Расходная |
| 7-AAD | BD | BDB559925 | Расходная |
| BD Accuri C6 Проточный цитометр | BD | Оборудование | |
| Vacutainer 5 мл | Med Vet International | RED5.0 | Расходный |
| Кислота-цитрат-декстроза | Sigma | C3821 | Расходный |
| Хлорид кальция | Sigma | C5670 | Расходный материал |
| Севофлуран | JD Medical | 60307-320-25 | Расходный |
| Крысы | Чарльз Ривер | Код штамма: 400 | Экспериментальное животное |
| Хирургический набор для крыс | Гарвардский аппарат | 728942 | Оборудование |
| Хирургическое лезвие #15 | MEDLINE | MDS15115 | Расходный материал |
| Rat MD's Baytril (2 мг/таблетка), Rimadyl (2 мг/таблетка) | Bio Serv | F06801 | Расходный |
| полиглактин 910, 5-0 | Ethicon | J436G | Расходный |
| Eosin alchol shandon | Thermo научный | 6766007 | Расходные материалы |
| Harris Hematoxylin | Thermo scientific | 143907 | Расходные материалы |
Ссылки
- Rossdale, P. D., Hopes, R., Digby, N. J., offord, K. Epidemiological study of wastage among racehorses 1982 and 1983. Vet Rec. 116 (3), 66-69 (1982).
- Black, D. A., Tucci, M., Puckett, A., Lawyer, T., Benghuzzi, H. Strength of a new method of achilles tendon repair in the rat - ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
