Method Article

Eine Methode zur Inselversetzung, Omentum in Maus

DOI:

10.3791/57160

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January 7th, 2019

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1Shenzhen Xenotransplantation Medical Engineering Research and Development Center, Institute of Translational Medicine, Shenzhen Second People's Hospital, First Affiliated Hospital of Shenzhen University, Shenzhen University School of Medicine, Shenzhen University Health Science Center, 2Institute for Cellular Therapeutics, Allegheny-Singer Research Institute, 3Xenotransplantation Program/Department of Surgery, The University of Alabama at Birmingham, 4College of Life Science and Oceanography, Shenzhen University, 5School of Pharmcy, Wenzhou Medical College

In This Article

Summary

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Eine Methode für die omentalis Transplantation von Inseln in einer Maus wird eingeführt. Isolierte Inseln sind mit Hydrogel vermischt und das Gemisch wird in den omentalis Beutel einer diabetischen Maus gebracht. Dann, der Blutzucker wird überwacht, und Immuno-histochemische Analyse erfolgt.

Abstract

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Inselversetzung ist vorgeschlagen worden, eine mögliche Behandlung für Typ-1-Diabetes sein. Den letzten überzeugende Hinweise darauf, dass intravaskulären Inselchen Infusion bei weitem nicht Ideal ist und daher das Omentum ist wieder auf dem Vormarsch als potenziell wertvollen Standort für Inselversetzung. Dieses Experiment erfordert die Isolierung von hochwertigen Inselchen und die Implantation von den kleinen Inseln an der diabetischen Empfänger. Transplantation, das Omentum erfordert chirurgische Schritte, die optisch besser nachgewiesen werden können. Hier sind die einzelnen Schritte für dieses Verfahren vorgestellt. Zwei Methoden die isolierte Inseln mit Hydrogel zu mischen, bevor Sie die Mischung in den omentalis Beutel von diabetischen Mäusen platzieren werden hier beschrieben. Verschiedenen Hydrogele werden für die unterschiedlichen Bedingungen verwendet. Blutzuckerspiegel der Diabetiker Maus Empfänger Phänomen Inselchen in der Omentum wurden bis zu 35 Tagen beobachtet. Einige Tiere geopfert wurden nach 14 Tagen, Immuno-histochemische Analyse durchzuführen. Diese prä-klinischen Transplantation Ansatz kann als vorläufige Daten vor der Übersetzung bis zur klinischen Transplantation verwendet werden.

Introduction

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Laut der International Diabetes Federation (IDF) betrifft Diabetes Mellitus derzeit 382 Millionen Menschen mit einer projizierten Anstieg auf 592 Millionen Menschen durch 2035-1. In beiden allogene und xenogene Inselversetzung ist systemischer immunsuppressive Therapie notwendig. Ohne Immunsuppression ist Immunabwehr eine der Hauptursachen des Transplantats Verlust2. Auch gibt es ein erhebliches Problem der transplantierten Inselchen Verlust aufgrund der sofortigen Blut vermittelte entzündliche Reaktion (IBMIR)3,4. Aber auch in Abwesenheit einer Immunantwort z. B....

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Protocol

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Alle Mäuse, die in dieser Studie verwendet wurden von der medizinischen Animal Center der Guangdong Provinz erhalten. Die Verwendung von Tieren wurde von der Ethik Review Committee der Shenzhen zweiten Volks Krankenhaus, nach den Grundsätzen des Tierschutzes genehmigt.

(1) Inselversetzung, das Omentum

Hinweis: Dieses Protokoll erfordert 2 Personen zu erreichen.

  1. Montieren Sie chirurgische Materialien, die in Tabelle 1aufgeführt sind. Bereiten Sie aseptischen Bereich im OP-Bereich mit sterilen Materialien wie Vorhänge und Einwegartikel und erhalten Sie aseptische Bedingungen in der gesamt....

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Results

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Post-Digestive Zustand der Bauchspeicheldrüse ist in Figur 1Adargestellt. Gereinigte Inselchen sind in Abbildung 1 bdargestellt. Dithizone Färbung und Lebensfähigkeit Prüfung der Inseln sind in Abbildung 2dargestellt. Die wichtigsten Schritte von der Inselversetzung, das Omentum sind in Abbildung 3dargestellt. Die Blutzuckerwerte der Empfänger nach omentalis Transplantat.......

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Discussion

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Inselversetzung in die Leber über die Pfortader ist die am häufigsten verwendete Methode der Inselversetzung beim Menschen, aber es gibt noch Effizienz und Sicherheitsbedenken wie Portalader Thrombosis und Leber Steatose17. Neuere Studien zeigen, dass das Omentum eine geeignete Alternative zu der Leber, aber muss noch mehr Forschung vor der Übersetzung klinischer12,14,18,19

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Disclosures

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Die Autoren berichten keine Interessenkonflikte.

Acknowledgements

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Einige der Autoren dieser Arbeit wurden zum Teil durch Zuschüsse aus nationalen Schlüssel R & D Program of China (2017YFC1103704), Sanming Projekt der Medizin in Shenzhen (SZSM201412020), Fonds für High Level medizinische Disziplin Bau von Shenzhen (2016031638), unterstützt Shenzhen-Stiftung für Wissenschaft und Technologie (JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425110110658), Shenzhen Stiftung Gesundheit und Familienplanung-Kommission (SZXJ2017021).

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Equipment
5 Zoll (12-13 cm) SchereRWD Life Science S12030-11
Feine PinzetteRWD Life ScienceF11010-13
Kleine gewickelte ClipsRWD Life ScienceR33003-01
AcutenaculumRWD Life ScienceF31044-13
2 Paar GewebezangeRWD Life Science F13023-10
4-0 Naht mit NadelChenghe, China17094
200 μ L Pipette und SpitzenGilsonPN11
One Touch ultraeasy Basic Blutzuckermesssystem   Johnson & Johnson33391713
RasierklingePhilipsHC1099/15
Material und Tiere
Pentobarbital SodiumSigmaaldrich.comP3761Für die Anästhesie 
Hydrogel bdbiosciences.com356234
 Baxter.com1501250Komponenten gerinnen beim Mischen
70% EthanolYingniu medical, Anhui, China23170608
IodophorLierkang medical technology, Shangdong, China170521
Normale KochsalzlösungBaxter.com2B1324
CephalosporinLukang medical, Shangdong, China150303
CefazolinBaxter.com2G3508
Gleitmittel AugensalbeMajor Pharmaceuticals203964
StreptozotocinSigmaaldrich.comS0130
Kollagenase Typ VSigmaaldrich.comC9262
CMRL-1066 MediumCelltrans, Wenzhou, ChinaX018D1
histopaqueSigmaaldrich.com10771Dichtegradient
PE50-SchlauchBraintreesci.comPE50 100 FTPolyethylen .023" x .038
Calcein AMSigmaaldrich.comC1359
PropidiumiodidSigmaaldrich.comP4864
Verbindung mit optimaler Schnitttemperatur (OCT)Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL4583Einbettungsmedium
Insulin AntikörperCell Signaling Technology, Danvers, MA 019238138S
Cell Signaling Technology, Danvers, MA 0192314166S
Eosin-FärbemediumBeyotime Biotech, ChinaC0109
DAPIThermo Fisher Scientific Inc. D1306
C57Bl/6 MäuseMedical Animal Center der Provinz Guangdong/
Fötales RinderserumGE Healthcare Life SciencesSH30084
T175 KolbenFalcon353112
1,5 mL Schnappverschluss-RöhrchenAxygenMCT-150-C
Basalmembran-Matrix-Fibrin-Thrombin-Hydrogel Hämatoxylin-Färbemedium

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Guariguata, L., et al. Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035. Diabetes research and clinical practice. 103 (2), 137-149 (2014).
  2. Bellin, M. D., et al.

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Islet TransplantationOmentum TransplantationHydrogel MixingIslet IsolationSurgical ProcedureBlood Glucose MonitoringImmuno histochemical AnalysisDAPI StainingInsulin Antibody StainingH E Staining

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