不可逆エレクトロポレーションの効果を研究する同系膵癌マウス モデル

Summary

不可逆エレクトロポレーション (IRE) は、局所進行膵癌の治療に使用される非熱的アブレーション技術です。比較的新しい技術であること、怒りの腫瘍増殖に及ぼす影響はよくわかっていません。膵臓癌に怒りの効果の研究を容易にする同系マウス モデルを開発しました。

Abstract

膵臓癌 (PC)、米国では、約 40,000 の患者は毎年を殺す病気正常に有望な免疫療法戦略を含むいくつかの治療的アプローチを拒み。不可逆エレクトロポレーション (IRE) は、腫瘍血管の近くで実行されるプロシージャを可能に隣接の膠原線維構造物の破壊を伴わない腫瘍細胞死を誘導する非熱的アブレーション手法です。熱アブレーションとは異なり IRE を誘発即時アブレーション壊死とともに、段階的なアポトーシス細胞死における結果、ローカル高度な PC と選択した患者の臨床使用されています。切除非ターゲットの怒りのような特定のプロシージャは無数の腫瘍微小環境における応答を引き起こすことができます。いくつかの研究は、他の種類の腫瘍における腫瘍増殖に及ぼす怒りを対処しているが、どれも PC に焦点を当てています。様々 な縦断研究 post プロシージャを促進する、高度に制御設定で怒りの皮下 (SQ) と同所性同種腫瘍を正常に扱うことができる PC の同系マウス モデルを開発しました。この動物モデルは、怒りと怒りの臨床効果を改善する方法の効果を研究する堅牢なシステムとして提供しています。

Introduction

膵管腺癌 (PC) は 2020年¹のまわりの米国のがんによる死亡の 2 番目の主要な原因になると予想されます。遠隔転移疾患²から PC と診断された患者の大半は死んでしまいます。PC 環境は悪名高い免疫抑制・化学療法耐性。その線維形成性間質 (抗腫瘍) エフェクター T 細胞の希少性と腫瘍関連マクロファージ (Tam) を含む免疫抑制の白血球の卓越性、骨髄性の派生サプレッサー細胞 (MDSCs) を含み、レギュラトリー T 細胞 (Treg)³.これらの根底にある、微小環境のこれらの効果を打ち消すマルチ モーダルの戦略を開発する必要があります。

怒りが腫瘍の非熱的手法として開発されました。熱アブレーションとは異なり怒りは急速凝固壊死は発生しませんが、代わりに段階的なアポトーシス細胞死⁴の結果します。膵臓の腫瘍の重要な怒りが脆弱になり「ヒートシンク」効果と血管⁵のすぐ隣に実行することができます。この技術⁶ FDA から 510 (k) のクリアランスがあり選択したローカル高度なまたは境界性膵癌症例に対する臨床的に使用されている現在。公開シリーズ最多の怒りの PC

Protocol

すべての動物実験は、このプロトコルはそれぞれ機関動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) によって承認される必要があります、次を実行します。ここで説明したすべての手順は、UCSD IACUC によって承認されています。

1. 調達受信者動物

注: LSL Kras の腫瘍から KPC リュック 4580 セルラインを設立^G12D/+;LSL Trp53^R172H/+;PDX1^Cre/+;LSL ROSA26^{リュック/+}マウス (KPC)、C57BL/6 バック グラウンドで PC の組み換えモデルであります。この細胞ラインの利点は、それは恒常ルシフェラーゼの有効化腫瘍監視直交異方性モデルの表現です。ただし、受信者のマウスの遺伝的背景と互換性がある限り、他の細胞が使用も可能性があります。

1. 実験グループとグループごとのペット数を事前に決定します。
2. 年齢 (6 - 10 週古いマウスをお勧めします) を選択し、仮説および細胞ラインに従って使用されている動物のセックスを使用します。

2. 培養細胞

1. 使用ダルベッコ変法イーグル培地 (DMEM): 栄養混合物 F12 (50: 50) メディア 10% 牛胎児血清 (F....

Results

我々 は、手順を実行上記の説明し、5-6 週古い野生型 c57bl/6 マウス接種 50 %1 x 10 の⁶セル平方腫瘍を生成 BMM。腫瘍の大きさが直径 5-6 mm に達したら、マウスのいくつかを安楽死させ、彼らの腫瘍摘出、し受信者 c57bl/6 マウスにがんを移植します。タイムライン図1 に示すように、怒りだったイオン注入後の行われた 10 日間です。怒りは、平方腫瘍を有する残りのマウスで行われました。

SQ の腫瘍、怒りの電圧とパルス持続時間保たれた 1,500 V/cm、100 μ s で一定、それぞれがパルスの数を変化させます。図 2は、150 パルス 75 パルスだけでなくが怒りの後、いくつかのマウスの平方の腫瘍が完全に後退したを示します。合計では、4 のうち 9 マウスは怒りの 150 パルス.......

Discussion

本研究で我々 は、IRE の腫瘍増殖に及ぼす影響を研究するために使用できる PC 用免疫マウスモデルを実証しました。現在、怒りは高い選択ローカル高度な PC の患者に術前療法のヶ月後遠い病気の進行していない非熱的アブレーション技術として使用されています。ローカル高度な PC のほとんどの患者は遠隔転移疾患²⁰成長するのでその使用したがって制限されています。このモデルは、さまざまな治療を拡張パラメーターとの組み合わせを使用して PC 上の怒りの効果を評価する研究のための基礎として機能します。

プロトコルの中に考慮すべき最も重要なことは、怒りを実行する腫瘍のサイズです。マウス モデルの市販のプローブは、電極間隔 (5-10 mm) によって制限されます。したがって、電極の距離よりも大幅に大きい腫瘍、不完全なアブレーションは起こる。平方腫瘍ピンセット trodes 上 2 針アレイ電極の使用ピンセット trodes の電流の流れに抵抗が増加、腫瘍の周囲の皮膚にお勧め。同じ腫瘍で様々 な深さや角度で怒りを実行して 2 針アレイ電極のサイズの制.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
ECM 830 矩形波エレクトロポレーター	ハーバード装置	BTX # 45-0002 ( 58018-004 )
2 ニードルアレイ電極	ハーバード装置	45-0167
安全フットスイッチ	ハーバード装置	45-0211
プラチナピンセット	ハーバード装置	45-0486
DMEM-F12 培地	ThermoFisher Scientific	11320-033
ウシ胎児血清	ThermoFisher Scientific	10437028
Trypsin	ThermoFisher Scientific	25200056
Matrigel	Corning	354230
イソフルラン	Sigma-Aldrich, Inc.
Lacrilube	Fisher Scientific
ブプレノルフィン	・フィッシャー・サイエンティフィック
D-ルシフェリン	パーキン エルマー	122799
IVIS Spectrum In Vivoイメージングシステム	Perkin Elmer	124262
Mouse strain C57BL/6J	The Jackson Laboratory	000664/Black 6
細胞株 (KPC-Luc 4580)	J.J. Yeh Lab at University of North Carolina
BD Precisionglide syringe needles	Sigma-Aldrich, Inc.
アルコールスワブ(70%イソプロピルアルコール)	BD	326895
デジタルノギス	サーモフィッシャーサイエンティフィック	14-648-17
使い捨てメス、滅菌	VWR	21909
綿先端アプリケーター	VWR	89198
縫合針、45 cm、サイズ 6-0	ハーバード装置	72-3308
縫合針、45 cm、サイズ4-0	ド装置	72-3314
ポビドンヨード10%	BD	29900-404
使い捨て保温パッド	ケントサイエンティフィックコーポレーション	TP-3E
マウスバリカン	ケント・サイエンティフィック社	CL8787
外科用ドレープ	ハーバード装置	59-7421
リン酸緩衝生理食塩水	サーモフィッシャーサイエンティフィック	10010023