Здесь мы представляем систему надежной и простой двухмерный (2D) coculture для изучения взаимодействия между опухолевых клеток и адипоциты костного мозга, который показывает двойной эффект факторов клеток меланомы на адипоциты костного мозга дифференциация и также представляет классический метод механистический исследования костных метастазов.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Двойное воздействие на дифференциации адипоциты костного факторов клеток меланомы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Перекрестных помех между адипоциты костного мозга и клетки опухоли могут сыграть важную роль в процессе костных метастазов. Разнообразные методы доступны для изучения существенных помех; Однако двумерных transwell системы для coculture остается классический, надежный и простой способ для этого исследования помех. Здесь мы представляем подробный протокол, который показывает coculture адипоциты костного мозга и клетки меланомы. Тем не менее такая система coculture может не только способствовать изучение клеток сигнал transductions раковых клеток, вызванные адипоциты костного мозга, но также в будущее механистический исследования костных метастазов, которая может выявить новых терапевтических целей для костей метастазирование.
Введение
Метастазы в кости широко распространены среди больных раком, но курс лечения по-прежнему недоступна. Помимо специализируется на хранение энергии в виде жира, адипоциты может поддерживать рост опухоли и метастазов в костный мозг и другие органы1,2,3,4,5,6. Кроме того адипоциты играют важную роль в регулировании раковых клеток биологии7,8,9,10 и ме....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Примечание: Все клетки, используемые в настоящем протоколе должна быть выращены для по крайней мере трех поколений после оттаивания из замороженных запасов клеток.
1. урожай факторы клеток меланомы
-
Подготовка
- Получите B16F10 клеток и линии клетки меланомы мыши.
Примечание: Для этого протокола, линия клетки меланомы мышь была получена из стволовых клеток, банк Китайской академии наук. - Сделайте полный средой для B16F10 культуры клеток (100 мл). Используйте Дульбекко изменение орла среднего (DMEM) с 10% плода бычьим сывороточным (ФБС), 50 ед/мл пенициллина и 50 мкг/мл стрептомицина.
- Получите B16F10 клеток и линии клетки меланомы мыши.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
В костном мозге, адипоциты может появиться в опухоли микроокружения1,13,33,,3435 на ранней стадии для поддержки опухолевой прогрессии через растворимых факторов или Активация osteoclastogenesis6,12,36, особенно в контексте ожирения
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Cocultures с вставками широко использовался для изучения взаимодействия к ячейке. 2D coculture система является эффективным способом наблюдать, как две части перекрестных помех в пробирке, в которой мы здесь показали два различных раковых клеток driven воздействия на адипоциты костного мозга. Многие лаборатории использовали этот метод, чтобы исследовать перекрестных помех между адипоциты и раковых клеток6,12,27,
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего объявить.
Благодарности
Мы благодарим дов Zipori (Институт Вейцмана, Реховот, Израиль) любезно за предоставление нам стромальных клеток костного мозга мышиных линия 14F1.1. Это исследование было поддержано грантов от китайского национального фонда естественных наук (№ 81771729) и Yongchuan больница Чунцин медицинского университета (Nos. YJQN201330; YJZQN201527).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen Inc. | ||
| Фетальная сыворотка крупного рогатого скота | Invitrogen Inc. | 16000– 044 | |
| Фосфат буферизованный солевым раствором | Invitrogen Inc. | 14190-144 | |
| Инсулин | Сигма-Олдрич | 91077C | |
| 3-изобутил-1-метил-ксантин | Сигма-Олдрич | I5879 | |
| Дексаметазон | Сигма-Олдрич | D4902 | |
| Масло красное о | Сигма-Олдрич | O0625 | |
| 24-луночная пластина | Corning | CLS3527 | |
| Трансвелл вставка | Миллипор | MCHT24H48 | |
| Пенициллин/Стрептомицин | Инвитроген | 15140-122 | |
| изопропанол | Sigma-Aldrich | I9516 | |
| 0,25% трипсин | Thermo Scientific | 25200056 | |
| гемоцитометр | Bio-Rad | 1450016 | |
| Инкубатор | Thermo Scientific | ||
| 50 мл falcon | Corning | CLS430828 | |
| Clean Bench | Thermo Scientific-Microscopy | ||
| Olympus-200 | |||
| μ L наконечники для пипеток | BeyoGold | FTIP620 | |
| 1 000 мл наконечники для дозаторов | BeyoGold | FTIP628 |
Ссылки
- Wang, J., et al. Adipogenic niches for melanoma cell colonization and growth in bone marrow. Laboratory Investigation. 97 (6), 737-745 (2017).
- Trotter, T. N., et al. Adipocyte-Lineage Cells Support Growth and....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
