Burada, bir çift etkisi melanoma hücre kaynaklı faktörler kemik iliği adiposit ortaya koymaktadır tümör hücreleri ve kemik iliği adipositler, arasındaki etkileşimi çalışmak için güvenilir ve doğru sözlü iki boyutlu (2D) coculture sistemi mevcut farklılaşma ve ayrıca kemik metastaz mekanik incelenmesi için klasik bir yöntem teşkil etmektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Melanoma hücre kaynaklı faktörler çift etkileri kemik iliği adiposit farklılaşması üzerine
Bu makalede
Özet
Özet
Kemik iliği adiposit ve tümör hücreleri arasında çapraz karışma kemik metastaz sürecinde önemli bir rol oynayabilir. Çeşitli yöntemler önemli crosstalk eğitim için kullanılabilir; Ancak, bir iki boyutlu transwell sistemi coculture için bir klasik, güvenilir ve kolay bir şekilde bu çapraz karışma çalışma için kalır. Burada, coculture kemik iliği adiposit ve Melanom hücreleri gösterir ayrıntılı bir iletişim kuralı mevcut. Yine de, böyle bir coculture sistem sadece hücre sinyal transductions kemik iliği adipositler tarafından indüklenen kanser hücrelerinin incelenmesi katkıda ama Ayrıca kemik için yeni tedavi hedefleri ortaya çıkarabilir kemik metastaz, geleceğe mekanik çalışma metastaz.
Giriş
Kemik metastazı ileri kanser hastaları arasında yaygın, ancak bir iyileştirici tedavi hala ulaşılamıyor. Yağ olarak enerji depolama uzmanlaşmış ötesinde, adipositler tümör büyüme ve metastaz kemik iliği ve makarna diğer organları1,2,3,4,5,6' da destekleyebilir. Ayrıca, adipositler kanser hücre biyolojisi7,8,9,10 ve metabolizma4<....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Not: Bu protokol için kullanılan tüm hücre donmuş hisse senedi hücrelerden çözdürme sonra en az üç nesiller için yetişkin olmalıdır.
1. hasat Melanoma hücre kaynaklı faktörler
-
Hazırlıklar
- B16F10 hücreleri ile bir fare melanoma hücre kültürünü edinmek.
Not: Bu iletişim kuralı için bir fare melanoma hücre kültürünü Çin Bilimler Akademisi kök hücre bankadan elde edildi. - B16F10 hücre kültürü (100 mL) için tam bir orta yapmak. Dulbecco'nın modifiye kartal Orta (DMEM) % 10 fetal Sığır serum ile (FBS), 50 U/mL penisilin ve 50 µg/mL streptomisin takıma kullanın.
- B16F10 hücreleri (50 mL)....
- B16F10 hücreleri ile bir fare melanoma hücre kültürünü edinmek.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Kemik iliğinde adiposit tümör microenvironment1,13,33,34,35 erken bir aşamada tümör ilerleme çözünür faktörler ile desteklemek için görünebilir veya osteoclastogenesis6,12,36, özellikle obezite6,
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Cocultures ekler ile hücre hücre etkileşimleri eğitim için yaygın olarak kullanılmaktadır. 2D coculture sistemi nasıl iki parça crosstalk vitro, biz burada iki farklı kanser hücre tahrik etkileri kemik iliği adipositler tarafından ortaya gözlemlemek için etkili bir yoldur. Birçok labs adiposit ve kanser hücreleri6,12,27,39arasında çapraz karışma araştırmak için bu yöntemi kullanılmıştı.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar bildirmek için bir şey yok.
Teşekkürler
Biz Dov Zipori (Weizmann Enstitüsü bilim, Rehovot, İsrail) lütfen bize fare kemik iliği stromal hücre verdiğiniz için teşekkür ederiz 14F1.1 hattı. Bu çalışmada hibe Çin Ulusal Doğal Bilim Vakfı (NOS 81771729) ve Yongchuan hastane Chongqing Tıp Üniversitesi ('ları tarafından desteklenmiştir YJQN201330; YJZQN201527).
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| DMEM | Canlandırıcı A.Ş. | ||
| Fetal Sığır Serumu | Invitrogen Inc. | 16000 inç; 044 | |
| Fosfat Tamponlu Salin | Invitrogen Inc. | 14190-144 | |
| İnsülin | Sigma-Aldrich | 91077C | |
| 3-izobutil-1-metil-ksantin | Sigma-Aldrich | I5879 | |
| Deksametazon | Sigma-Aldrich | D4902 | |
| Yağ Kırmızısı o | Sigma-Aldrich | O0625 | |
| 24 kuyulu plaka | Corning | CLS3527 | |
| Transwell eki | Millipore | MCHT24H48 | |
| Penisilin / Streptomisin | İnvitrojen | 15140-122 | |
| izopropanol | Sigma-Aldrich | I9516 | |
| % 0.25 tripsin | Thermo Scientific | 25200056 | |
| hemositometre | Bio-Rad | 1450016 | |
| Kültürü inkübatörü | Thermo Scientific | ||
| 50 mL falcon | Corning | CLS430828 | |
| Temiz Tezgah | Termo Bilimsel-Mikroskopi | ||
| Olympus-200 | |||
| & mu; L pipet uçları | BeyoGold | FTIP620 | |
| 1.000 mL pipet uçları | BeyoGold | FTIP628 |
Kaynaklar
- Wang, J., et al. Adipogenic niches for melanoma cell colonization and growth in bone marrow. Laboratory Investigation. 97 (6), 737-745 (2017).
- Trotter, T. N., et al. Adipocyte-Lineage Cells Support Growth and....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
