何人かの患者の妊孕性温存のための唯一のオプションは卵巣組織の凍結保存です。残念ながら、遅延の血行再建術は、濾胞性を損ないます。ここでは、共同生物活性分子の直接パラクリン配信と加速を組み合わせたセル ベースの戦略として利用循環内皮細胞とひと卵巣組織を移植するためのプロトコルを提案する.
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この記事について
サマリー
要約
不妊症は化学療法および/または放射線療法の何人かの患者のための頻繁な副作用、卵子や胚の凍結保存は、オプションではありません。自家の卵巣組織の凍結保存する代わりに、これらの患者数の増加の選択次の回復と赦し。凍結保存した卵巣組織の自動移植を受ける患者の転帰の改善にもかかわらず移植組織の効率的な血行再建術の主要な障害のままです。虚血を軽減し自動移植を受ける患者の転帰を向上させる、卵巣組織の灌流を加速するための血管細胞ベースの戦略を開発しました。マウス異種移植モデルにおける卵巣組織の凍結保存と外因性血管内皮細胞 (幹部) の共同移植法について述べる。私たちは持続的なパラクリン シグナル移植卵巣への入力ができ恒常抗ミュラー管ホルモン (AMH) を表現するために設計されている幹部を採用するこのアプローチを拡張します。幹部と共同移植増加卵胞ボリュームと改良された幽門発育卵胞、AMH を表現する幹部昇格静止原始卵胞の保持。この複合戦略虚血を軽減し、妊孕性温存や大規模で不妊のコンテキストで卵胞活性化を調節することのための便利なツールがあります。
概要
がんは、先進国の死の主要な原因の中ではまだ数十年の研究のほとんどの種類のがん、およびいくつかの場合 2 倍近く生存率1に向けて大きな進展が得られています。残念ながら、化学療法薬が gonadotoxic、多くの場合卵巣内の原始卵胞のリザーブを破壊し、出生率2を削減です。この人口の増加は卵子や胚の凍結保存を含む妊孕性温存のさまざまな方法の恩恵を受けることができます、ただし、がん治療、思春期前の患者の発生を必要とする患者はこれらのオプションの対象ではありません。代わりに、何人かの患者は彼らの治療を着手する前に、回復と赦し、不妊3を復元する自動移植組織に卵巣組織の凍結保存する選択しました。まだ、日には、着と卵胞出力自動移植まま組織虚血と低酸素5,6、7のために主に、比較的低い4。卵巣皮質移植の生存率を改善するために多くの努力にもかかわらず抗酸化物質8,9, プロ新生サイトカイン10、
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プロトコル
動物を対象とするすべての手順は、機関動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) ワイル ・ コーネル医科大学によって承認されています。関連するガイドラインは法令に従い卵巣のティッシュを使用してすべての異種移植実験を行った。ひと卵巣組織は、化学療法や放射線治療がん治療や前骨髄移植予定の患者から採取しました。制度上の審査委員会 (IRB) 委員会のワイル ・ コーネル医科大学組織の潜在的な自己使用と彼らの卵巣組織研究用の 10% までの寄付を行った患者のインフォームド コンセントのコレクションを承認しました。
1. ひと卵巣組織のコレクション
注: リモート施設交通から卵巣組織が運ばれるとき時間を超えない 5 h18,19。
- 卵巣の組織を収集し、溶液を滅菌生理食塩水ですすいでください。
- 滅菌コンテナーに卵巣を配置します。
- 媒体に完全に没頭して、卵巣までリーボビッツの L-15 媒体を注ぐ。
- 閉じ、容器を密封します。
- 氷の上のコンテナーを輸送します。
2. 適応シュミットらから調達した卵巣組織の処理....
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結果
幹部の共同移植が患者の組織にメリットを提供するかどうかを決定するには、解凍卵巣皮質ストリップ サイズの等しい部分に分けられ、免疫妥協された NOD scid ガンマ (NSG) マウスに両側にしみ込んでいます。フィブリン血栓だけで (ない ECs) と含まれている幹部 (図 1 a) に埋め込まれている 1 つの側面で各マウスは独自のコントロールとして提供しています。幹部は、ひと臍帯前述の22,23としてアデノ ウイルス遺伝子のフラグメント、E4 ORF1 とその後の治療からの主な内皮細胞の分離によって得られました。2-5、ひと臍帯静脈 ECs (新生活) の通路内でエンコードの cDNA 発現アデノ ウイルス遺伝子フラグメント E4 ORF1 レンチ ウイルス粒子と扱われました。この治療は生存を強化し、血管内皮細胞の血管新生可能性が22,.......
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ディスカッション
ここに示す幹部の共同移植卵巣組織の生存率および機能のマウス異種移植に大きな利点があります。妊孕性温存の卵巣組織自動移植の臨床応用のための標準セットと最適なパラメーター (サイズ、移植サイト、移植等の期間) されていません。32,33,34卵胞のプールの強化された回復の未定義のまま。自動移植を実行すると、解凍の皮質卵巣組織の無血管である移植が残っている卵巣、卵巣窩または広間35,36など骨盤のサイトを中心に実行されます。端々 吻合が行われるしない、ために、この移植法は虚血性の組織の損失の波と人工血管内に存在する卵胞の早期活性化の結果します。したがって、幹部と共同の移植は、臨床応用には検討されてする前に多くのさらなる精査が必要な増殖性の内皮細胞の配信を伴います、このアプローチ復旧される組織血行を促進することができ、移植卵巣.......
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開示事項
マイケル ・ ギンズバーグは、サンディエゴ, CA, 92130、アメリカ合衆国、分離、E4 ORF 1 の標識を用いて内皮細胞サイエンス株式会社医学の従業員です。
謝辞
イラストのオマール ・ アレクサンダーの男。
L.M. は、コーネル大学臨床からパイロット賞によって支えられた、臨床科学センターと、ASRM 研究助成。
著者は、論文の批判的な読みのジェームズ ・ ラボのメンバーに感謝したいと思います。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| リーボヴィッツ's L-15 中 | Gibco | 11415064 | |
| 抗生物質-抗真菌薬 | Gibco | 15240062 | Anti-Anti X100 |
| スクロース | Sigma | S 1888 | |
| フィブリノーゲン | Sigma F 8630 | ウシ血漿 | |
| Thrombin | Sigma | T 1063 | ヒト血漿 |
| DMSO | ΣD | 2650 | |
| DMEM | Gibco | 12491015 | |
| Enzyme Cell Detachment Medium | Invitrogen | 00-4555-56 | Accutase |
| プラスチックパラフィンフィルム | Bemis NA | Parafilm M | |
| サージカルペーパーテープ 2.5 cm | 3M | 1530-1 | マイクロポア |
| サージカルペーパーテープ 1.25 cm | 3M | 1530-0 | ミクロポア |
| 穴あきプラスチック サージカルテープ 1.25 cm | 3M | 1527-0 | トランスポア |
| モノフィラメント吸収性縫合 | Covidien | UM-203 | Biosyn |
| 編組吸収性縫合 | Covidien | GL-889 | ポリソルブ |
| ポビドンヨード 溶液 USP 10% | Purdue 製品 | 67618-153-01 | ベタジン溶液 スワブ スティック |
| Cryoviales | Nunc | 377267 | CryoTube |
| 滅菌眼球潤滑剤 | Dechra | 17033-211-38 | Puralube |
| 1.7 ml マイクロ遠心チューブ | デンビル | C-2172 | エッペンドルフ |
| アナストサイアシステム | VetEquip | V-1 テーブルトップシステム | |
| 内皮細胞 | Angiocrine Biosciences, Inc., San Diego, CA, USA | E4-ORF-1 とトランスフェクトされ、内皮細胞 | |
| を標識 トリクローム染色 | Sigma | HT15-1kt | Trichrome Stain (Masson) Kit |
| Isolectin | Invitrogen | I32450 | Isolectin GS-IB4 From Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor™ 647 コンジュゲート |
参考文献
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer Statistics, 2017. CA Cancer J Clin. 67 (1), 7-30 (2017).
- Magelssen, H., Melve, K. K., Skjaerven, R., Fossa, S. D. Parenthood probability and pregnancy outcome in patients with a cancer diagnosis during adolescence and young adulthood. Hum Reprod. 23 (1), 1....
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