Burada tarif biz Candida albicans intradermal enjeksiyon sonra deri örnekleri histolojik ve moleküler analizi sağlayan bir protokol. Bu iletişim kuralı cilt yapısal bütünlüğünü korur ve doku-ikamet veya yeni alınan bağışıklık hücreleri gibi patojen dağıtım yerelleştirme için sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Derin Dermal enjeksiyon olarak bir Model Candida albicans deri enfeksiyonu histolojik analizler için
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Deri vücudun son derece genişletilmiş bir organdır ve bu geniş yüzeyi nedeniyle sürekli mikroorganizmalar için maruz kalmaktadır. Deri Hasari kolayca da buna karşılık, patojenler yayılması kan dolaşımına yol açabilir dermiste enfeksiyonlara yol açabilir. Anlama nasıl bağışıklık sistemi enfeksiyonları çok erken aşamada savaşır ve nasıl ev sahibi Patojenler ortadan kaldırabilir gelecekteki tedavi müdahaleler temelini ayarlamak için önemli bir adımdır. Burada biz bir model sırasında erken enfeksiyon patojen epitel bariyer yanı sıra bağışıklık yanıtı C. albicans tarafından elde edildi geçti zaman da dahil olmak üzere, meydana süreçleri görselleştirebilirsiniz Candida albicans enfeksiyon tarif işgali. Bu enfeksiyon model deri yanı sıra varlığı ve yerelleştirme patojenin sızmak bağışıklık hücreleri gösteren histolojik analizleri gerçekleştirmek için kullanılır. Enfeksiyon RNA çıkarma için işlenen sonra örnekleri topladı.
Giriş
İnsan vücudu mikroorganizmaların son derece yüksek bir numarası ile kaplıdır. Cilt yüzeyi neredeyse bir milyon bakteri başına santimetre kare1yaşam alanıdır. Bu sayı, ancak, cilt colonizes tam mikroorganizmaların çeşitli yansıtmak zorunda değildir. Bakteri ek olarak, insan vücudu hem mukozal ve cilt düzey2hayatta yapabiliyor C. albicans, dahil olmak üzere birçok mantar türü tarafından kolonize.
Son yıllarda, mantar enfeksiyonları ile tanısı insanların yüzdesi çok artmıştır. Bu çok immün kişi, yani, HIV-pozitif hasta ve kemoterapi ya da immünsupresif ilaçlar ile nakli
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm yordamları kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) altında onaylanmış ve çocuklara hayvan kaynakları bölümü gözetimi altında işletilen hastane (kemer) Boston Çocuk Hastanesi'nde ya da İtalyan tarafından kabul edildi Sağlık Bakanlığı ve kurumsal hayvan bakımı Komitesi Üniversitesi Milano-Bicocca adlı altında gerçekleştirilen.
1. C. albicans hazırlık
- Kültür C. albicans, zorlanma CAF3-113, uridine (50 mg/L) 25 ° C'de ile takıma zengin Orta (Maya özü pepton Dekstroz (YEPD), %1 (w/v) Maya özü, % 2'si (w/v) Bacto pepton, %2 (w/v) glikoz) içeren tüpler Bu koşullar altında C. al....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Doğrudan içinde derin derma patojen sızdırma yoluyla yapısal morfolojisi doku sağlam (Şekil 1A) kalır.
Cilt yapısal bütünlük bakımından bağışıklık hücreleri tespiti ve enfeksiyon yerinde onların yerelleştirme sağlar. Şekil 1B adımında gösterilen yüksek büyütme ortaya koymaktadır apse esas olarak enfeksiyon sitesine onun doğumdan tarafından patojen yayılmasını içeren pol.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada biz bir yöntem C. albicans enfeksiyon mantar derin derma girişte üzerine başlatılan enflamatuar süreç çalışmaya nitelendirdi.
Cilt apse oluşumu üzerine C. albicans enfeksiyon15nispeten nadir bir olay olsa bile, enjeksiyon doğrudan içinde derin derma mantar mantar tahrik apse oluşumu çalışma, hem de belirli bağışıklık analizini sağlar mantar içerecek şekilde katılmak hücreleri yayıldı. Burada açıklanan yöntemle, bağışıklık hücrelerinin yanı sıra .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
FG la Ricerca sul Cancro (IG 2016Id.18842) başına Associazione Italiana, Cariplo Vakfı (Grant 2014-0655) ve Fondazione Regionale la Ricerca Biomedica (Ferroburak) başına tarafından desteklenmektedir.
Iz NIH grant 1R01AI121066-01A1, 1R01DK115217, HDDC P30 DK034854 grant, Harvard Tıp Okulu Milton bulduğunu, CCFA üst düzey Araştırma Ödülü (412708), Eleanor ve mil Shore tarafından desteklenmektedir 50 yıldönümü Bursları ve Cariplo Vakfı ( 2014-0859).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Reaktifler< / güçlü > | |||
| PBS | Euroclone | ECB4053L | 37 ° C'de sıcak; Kullanmadan önce C banyosu |
| H-OCT bileşik | histo-line laboratuvarları | R0030 | |
| Gill's Hematoxilyn | histo-line laboratuvarları | 09-178-2 | |
| Eozin Y solüsyonu, alkolik | histo-line laboratuvarları | 09-209-05 | |
| Etanol mutlak | scharlau | ET00232500 | |
| Citro-HISTOCLEAR | histo-line laboratuvarları | R0050 | |
| Eukitt, montaj ortamı | biyo-optik | ||
| Aseton | sigma-aldrich | 179124 | |
| PAS boyama sistemi | sigma-aldrich | 395B-1KT | |
| Bacto Peptone | BD | 211677 | |
| Bacto Maya Özü | BD | 212750 | |
| D (+) - Moleküler biyoloji | için susuz glikozApplichem PanReac | 50-99-7 | |
| Uridine | Merck Millipore | 8451 | |
| HEPES | Applichem PanReac | A1070,0500 | |
| Safe-Lock tüpleri 2 mL | eppendorf | 30121597 | |
| TRIzol Reaktifi | Yaşam Teknolojileri | 15596018 | Toksik, korozif ve mutajen. Gerekli tüm önlemleri alın |
| Rneasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 | |
| sıvı nitrojen | Göz koruması kullanın | ||
| Instrument | |||
| Coulter Karşı Parçacık Sayımı Beckman | Coulter | ||
| Santrifüj 5415 R | eppendorf | ||
| MC 3000 Mikrotom Kriyostat | histo-line laboratuvarları | ||
| TissueLiser | QIAGEN | ||
| strong>Materials | |||
| 0.3 ml 30G x 8mm iğne ile İnsülin Şırıngası | BD | 324826 | |
| Cerrahi forseps | |||
| Cerrahi makas | |||
| Taban kalıbı tek kullanımlık | histo-line laboratuvarları | 2781 | |
| Pozitif yüklü biyomikroskop slaytları | bio-optica | 09-2000 | |
| Kapak astarları 24 x 50 mm | termo bilimsel | 11911998 |
Kaynaklar
- Belkaid, Y., Segre, J. A. Dialogue between skin microbiota and immunity. Science. 346 (6212), 954-959 (2014).
- Kashem, S. W., Kaplan, D. H. Skin Immunity to Candida albicans. Trends Immunol. 37 (7), 440-450 (2016).
- Havlickova, B., Czaika, V. A., Friedrich, M.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
