Fare Oropharyngeal aspirasyon modeli Ventilatör ilişkili ve hastane edinilen bakteriyel pnömoni
Summary
Zatürreeye insan en sık görülen enfeksiyonlar arasında yer alıyor. Hastalığın patogenezinde anlama ve Roman tedavi etkinliğinin sınamak için kritik bir uygun vivo içinde modelidir. Bu fare oropharyngeal aspirasyon pnömoni model ile bir patogenez ve bu ölümcül enfeksiyonlara karşı yeni tedavi inceleyebilirsiniz.
Abstract
Fare enfeksiyon modelleri hastalık patogenezinde anlama ve etken patojenler ile mücadele için tasarlanmış yeni tedavi etkinliğinin sınamak için kritik öneme sahiptir. Zatürreeye klinikte Hastalar tarafından sunulan en sık görülen enfeksiyonlar arasında yer alıyor ve böylece bir uygun vivo içinde modeli garanti eder. Hedef kapalı komplikasyonlar ve sinüzit, gastrit, enterit, fiziksel travma veya aerosol taklit etmek için sis microparticle gibi belirtiler neden akciğer dışında aşırı organizmalar mevduat burunici aşılama tipik pnömoni modelleri kullanmak viral, tüberküloz veya mantar zatürreden daha normal yayıldı. Bu modeller patogenezinde bakteriyel pnömoni tipik topluluk veya sağlık-edinilen doğru bir şekilde yansıtmıyor. Buna ek olarak, bu fare modeli oropharyngeal aspirasyon pnömoni sağlık edinilen pnömoni damlacık rotasında taklit eder. Bakterilerin 50 µL aşı süspansiyon imzalat farelerin mastoidi içine pnömoni sonuçları yansımalı aspirasyon neden olur. Bu model ile bir zatürre neden olan patojen ve bu hastalıklar ile mücadele için yeni tedaviler patogenezinde inceleyebilirsiniz.
Introduction
Alt solunum yolu enfeksiyonu dünyanın en ölümcül bulaşıcı hastalık ve ölüm gelişmekte olan ülkelerde1‘ deki en yaygın nedeni var. Genel olarak, bu enfeksiyonların fazla 3.2 milyon ölüm1için hesap. Buna ek olarak, nozokomiyal pnömoni sağlık edinsel enfeksiyonlar en yaygın ve en ölümcül formları arasında ve en antibiyotik dirençli patojenler2,3tarafından kaynaklanır. Tipik topluluk alınan her ikisi için bakteriyel pnömoni ve nozokomiyal pnömoni edinimi oropharyngeal içeriği aspirasyon alveoller içine yoldur. Bu hastalıklar genellikle eğitim için kullanılan fare modelleri burunici aşı4çok hedef kapalı komplikasyonlar ve hastalığı ile uyumsuz sinüzit ve fiziksel travma, gibi belirtiler neden akciğer dışında bakterilerin yatırmak, kullanın modelleri vardı insan ilerlemesinde taklit etmek için tasarlanmış. Diğer modelleri inhalasyon odalar ve daha doğru viral, tüberküloz ve fungal pnömoni taklit ama doğru bir şekilde tipik bakteriyel pnömoni edinmesinin normal rotanın özetlemek değil micromisting cihazlar kullanabilirsiniz.
Fare oropharyngeal aspirasyon pnömoni modeli doğal yol ve patogenezinde bakteriyel pnömoni benzetimi yapmak için yararlı. Aşı tarafından 50 µL imzalat fareler bir pipet kullanarak mastoidi içine bakteriyel süspansiyon yansımalı aspirasyon ensues, hangi içinde zatürreeye sonuçlanır. Bu modeli kullanarak, bir zatürre neden olan patojen ve daha yüksek sadakat manken insanda gözlenen aspirasyon pnömoni enfeksiyonlara daha benzer bu hastalıklarla mücadele için yeni tedaviler patogenezinde inceleyebilirsiniz. Ayrıca, ağız boşluğu5,6ile enfekte benzer modelleri farklı olarak tam inoculum nerede bu off-site inflamasyon ve gastrit gibi enfeksiyonlara neden olabilir bağırsak yerine akciğerlere ulaşır bu model sağlar ve enterit. Son olarak, Laringoskop gerektirir ve trakea7ile inoculates başka bir yayımlanmış modeli, aksine bu model hava yolu bir sonda ile besleme iğneyle engel değil ve enjeksiyon inoculum teslim edilmek üzere gerektirmez. Yerine, aşı üzerinde fare doğal aspirasyon refleks dayanır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Emin olmak için fare minyatür insanlar değildir. Fare modellerden elde edilen sonuçlar bağlamda kabul ve daha sonra insanlar, iki tür6arasındaki farklılıklar ve benzerlikler dayalı uygulanabilirliği için yorumlanır. Uygun fare zorlanma olarak seçmek önemlidir bazı diğerlerinden daha; bazı enfeksiyonlara daha yatkındır aynı seçim16patojen zorlanma için geçerlidir.
Enfeksiyonlar titiz ve son derece tekrarlanabilir biçimde g…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser Ulusal Enstitüsü, alerji ve enfeksiyon hastalıkları Ulusal Sağlık Enstitüleri [Grant numaraları R01 AI117211, R01 AI130060, R21 AI127954 ve R42 AI106375 BS için] ve ABD Gıda ve İlaç İdaresi [sözleşme tarafından desteklenmiştir HHSF223201710199C BML için].
Materials
| Agar | BD | 214530 | Combine with TSB to make TSA |
| Beads, Borosilicate Glass | Kimble | 135003 | Sterilize by baking or autoclaving before each use |
| Beaker, 250 mL | Pyrex | 1003 | Used during precise aliquoting of concentrated bacterial inocula |
| Centrifuge | Sorvall | ST 40R | Capable of 4,000×g at 4°C |
| Chamber for Anesthesia | Kent Scientific Corporation | VetFlo-0720 | Accommodates up to 5 mice |
| Cryomold, Intermediate Size | Sakura Tissue-Tek | 4566 | Disposable vinyl specimen molds, 15×15×5 mm |
| Dental Floss | Oral-B | 37000469537 | Tie to stable post approx. 6" above table height |
| Forceps | VWR | 82027-440 | Used to gently pull tongue out of mouse's mouth |
| Homogenizer for Lung Tissue | Omni International | TM125-115 | Autoclave before first use; rinse between samples |
| Isoflurane for Anesthesia | Abbott | 10015516 | Alternative drug can be used; modify procedure accordingly |
| iSTAT Cartridge | Abbott | 03P79-25 | Various cartridges are available to suit your needs |
| Ketamine, 100 mg/mL | Western Medical Supply | 4165 | Dilute 1:10 in PBS to 1 mg/mL and combine with Xylazine at 1 mg/mL |
| Ointment for Eyes | Akorn | Tears Renewed | Avoid touching eye with tip of dispenser |
| Optimal Cutting Temperature (O.C.T.) Compound | Fisher Scientific | 23-730-571 | Used to freeze lung samples at -80 °C to prepare for pathology sectioning |
| Petri Dish | VWR | 25384-302 | Polystyrene, disposable, sterilized, 100×15 mm |
| Phosphate-Buffered Saline (PBS) | Corning | 21-031-CM | Dulbecco's PBS without calcium and magnesium |
| Pipette Tips, 200-μL | VWR | 10017-044 | Autoclave before use |
| Pipetter, 200-μL | Gilson | Pipetman P200 | Autoclave and calibrate before use |
| Spreader, Bacterial Cell | Bel-Art | F377360006 | Sterilize by baking or autoclaving before each use |
| Stir Bar, Magnetic, 7.9 mm Diameter × 38.1 mm Length | VWR | 58948-150 | Used for stiring concentrated bacterial inocula during aliquoting |
| Stir Plate, Magnetic | Corning | PC-620D | Used for stiring concentrated bacterial inocula during aliquoting |
| Tryptic Soy Broth (TSB) | BD | 211822 | Combine with Agar to make TSA |
| Vial, Conical, Sterile, 50 mL | Corning | 431720 | Used for preparing bacterial inocula |
| Vial, Conical, Sterile, 500 mL | Corning | 431123 | Used to concentrate inocula for preparing frozen inocula |
| Vial, Cryogenic, 2.0 mL | Corning | 430659 | Used for cryogenic storage of concentrated bacterial inocula |
| Xylazine, 20 mg/mL | Akorn | AnaSed Injection | Dilute 1:20 in PBS to 1 mg/mL and combine with Ketamine at 1 mg/mL |
References
- Spellberg, B., Talbot, G. H. Recommended Design Features of Future Clinical Trials of Antibacterial Agents for Hospital-Acquired Bacterial Pneumonia and Ventilator-Associated Bacterial Pneumonia. Clinical Infectious Diseases. 51 (S1), S150-S170 (2010).
- Kalil, A. C., et al. Management of Adults With Hospital-acquired and Ventilator-associated Pneumonia: 2016 Clinical Practice Guidelines by the Infectious Diseases Society of America and the American Thoracic Society. Clinical Infectious Diseases. 63 (5), e61-e111 (2016).
- Medina, E. Murine model of pneumococcal pneumonia. Methods in Molecular Biology. , 405-410 (2010).
- Azoulay-Dupuis, E., et al. In vivo efficacy of a new fluoroquinolone, sparfloxacin, against penicillin-susceptible and -resistant and multiresistant strains of Streptococcus pneumoniae in a mouse model of pneumonia. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 36 (12), 2698-2703 (1992).
- Mizgerd, J. P., Skerrett, S. J. Animal models of human pneumonia. American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 294 (3), L387-L398 (2008).
- Rayamajhi, M., et al. Non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry. Journal of Visualized Experiments. (51), (2011).
- Nielsen, T. B., Bruhn, K. W., Pantapalangkoor, P., Junus, J. L., Spellberg, B. Cryopreservation of virulent Acinetobacter baumannii to reduce variability of in vivo studies. BMC Microbiology. 15, 252 (2015).
- Trammell, R. A., Toth, L. A. Markers for predicting death as an outcome for mice used in infectious disease research. Comparative Medicine. 61 (6), 492-498 (2011).
- Bast, D. J., et al. Novel murine model of pneumococcal pneumonia: use of temperature as a measure of disease severity to compare the efficacies of moxifloxacin and levofloxacin. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 48 (9), 3343-3348 (2004).
- Hankenson, F. C., et al. Weight loss and reduced body temperature determine humane endpoints in a mouse model of ocular herpesvirus infection. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 52 (3), 277-285 (2013).
- Adamson, T. W., Diaz-Arevalo, D., Gonzalez, T. M., Liu, X., Kalkum, M. Hypothermic endpoint for an intranasal invasive pulmonary aspergillosis mouse model. Comparative Medicine. 63 (6), 477-481 (2013).
- Nielsen, T. B., et al. Diabetes Exacerbates Infection via Hyperinflammation by Signaling through TLR4 and RAGE. mBio. 8 (4), (2017).
- Nielsen, T. B., et al. Monoclonal Antibody Protects Against Acinetobacter baumannii Infection by Enhancing Bacterial Clearance and Evading Sepsis. Journal of Infectious Diseases. 216 (4), 489-501 (2017).
- Cheng, B. L., et al. Evaluation of serotypes 5 and 8 capsular polysaccharides in protection against Staphylococcus aureus in murine models of infection. Human Vaccine Immunotherapy. 13 (7), 1609-1614 (2017).
- Wong, D., et al. Clinical and Pathophysiological Overview of Acinetobacter Infections: a Century of Challenges. Clinical Microbiology Reviews. 30 (1), 409-447 (2017).
