Biz birincil hücre kültürleri zebra balığı embriyo transfection ve canlı hücre görüntüleme gibi primer hücre--dan yetişkin zebra balığı beyin hazırlamak için bir protokol için hazırlanması için etkili ve kullanımı kolay bir protokol mevcut.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| Balık hatları | |||
| AB (vahşi tip) | Streisinger ve meslektaşları tarafından kurulan, Zebra Balığı Uluslararası Kaynak Merkezi'nden (ZIRC) temin edilebilir | ||
| Tg(ptf1a:eGFP)jh1 | zebrabalığı gen>floresan protein EGFP'nin ekspresyonunu yönlendirdiği kararlı transgenik hat (Parsons et al., 2007) | ||
| Tg(XITubb:DsRed)zf148 | kararlı transgenik çizgi> Xenopus nöral-spesifik beta tubulin promotörünün, floresan protein DsRed 'nin ekspresyonunu yönlendir | ||
| Name | Company | Katalog Numarası | Comments |
| Equipment | |||
| santrifüj | Eppendorf | model 5804 | |
| R ChemiDoc MP görüntüleme sistemi | BioRad | 1 da embriyo konfokal lazer tarama mikroskobu içeren Petri kaplarının siyah-beyaz görüntülerini elde etmek için kullanılan model XRS+ | |
| Leica mikrosistemleri | model SP8, 28 & derece ile donatılmış; C sıcaklık kutusu ve 63X objektif | ||
| epifloresan mikroskop | Leica microsystems | model DM5500B, 28 & derece ile donatılmıştır; C sıcaklık kutusu ve 40X objektif | |
| Gen Pulser Kapasitans genişletici ile Xcell | BioRad | 1652661 | elektroporasyon cihazı |
| Yatay çalkalayıcı | GFL | model 3011 | |
| inkübatör (28 &derece; C) | Memmert | model inkübatör I | |
| embriyolar için inkübatör (28 &° C; C) | Heraeus | tipi B6120 | |
| ışık mikroskobu | Zeiss | model TELAVAL 31 | |
| mikro pipetler | Gilson | ||
| steril çalışma tezgahı | Bio Base | , laminer akışlı ve UV ışıklı | |
| cımbızlı | Dumont | Style 5, Inox | |
| dikey tüp döndürücü | Labinco B.V. | model LD-79 | |
| Name | Company | Katalog Numarası | Comments |
| Software | |||
| Image Lab Yazılımı | BioRad | Enstitüleri'nden ChemiDoc MP görüntüleme sistemi için BioRad | |
| İlgili | ; Rasband, W.S., ImageJ, ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri, Bethesda, Maryland, ABD, https://imagej.nih.gov/ij/. (1997-2016). | ||
| Leica Microsystems'den hem konfokal hem de epifloresan mikroskoplar için | LAS X | Leica Microsystems | |
| Name< | strong>Company | Katalog Numarası | Comments |
| Plasmids | |||
| pCS-DCX-tdTomato | Kö ster Lab | # 1599 | omurga pCS2+ (Rupp et al., 1994) |
| pCS-eGFP | Kö ster Lab | # 7 | omurga pCS2+ (Rupp et al., 1994) |
| pCS-H2B-mseCFP | Kö ster Lab | # 2379 | omurga pCS2+ (Rupp et al., 1994) |
| pCS-mClover | Kö ster Lab | # 3865 | omurga pCS2+ (Rupp et al., 1994) |
| pCS-MitoTag-YFP | Kö ster Lab | # 2199 | omurga pCS2+ (Rupp et al., 1994) |
| pCS-ss-RFP-KDEL | Kö ster Lab | # 4330 | omurga pCS2+ (Rupp et al., 1994) |
| pCS-VAMP1-mCitrine | Kö ster Lab | # 2291 | omurgaya dayalı pCS2+ (Rupp et al., 1994) |
| pSK-UAS:mCherry | Kö ster Lab | # 1062 | , Stratagene Plazmid numaralarının pBluescript omurgasına |
| dayanarak, Kö'un veritabanı girişlerine bakın; ster laboratuvarı. Plazmitler istek üzerine temin edilebilir. | |||
| Name | Company | Katalog Numarası | Comments |
| Plastik ve cam eşya | |||
| BD Falcon Hücre Süzgeci (40 & mikro; m) | FALCON | REF 352340 | , " iniş ağı" Sarısı alınmış embriyoları etanole daldırmak ve bunları hızlı bir şekilde taze hücre kültürü ortamına aktarmak |
| için 1.5 mL reaksiyon tüpleri | Sarstedt | 72690550 | |
| 24 oyuklu plaka | Sarstedt | 83.3922 | |
| 50 mL falkonik tüp | Sarstedt | 62.547.004 | |
| 96 oyuklu plaka | Sarstedt | 83.3924.005 | |
| EasyStrainer (40 &mikro; m) | Greiner Bio-One | 542 040 | havalandırma yuvaları ile; kollajenaz aracılı ayrışma elektroporasyon küvetinden sonra hücreleri filtrelemek için kullanılır |
| küvet (0,4 cm) | Kisker | 4905022 | |
| cam lameller | Heinz Herenz Medizinalbedarf GmbH | 1051201 | |
| Mikroskop slaytları | Thermo Fisher Scientific (Menzel Glä ser) | 631-0845 | |
| Neubauer odası | Henneberg-Sander GmbH | 9020-01 | |
| Pasteur pipetleri (plastik; 3 mL) | A. Hartenstein | PP05 | |
| Petri kapları (plastik; çap 10 cm) | balığı embriyoları için | Sarstedt | 821473 |
| pipet uçları | Sarstedt | Blue (1000 & mikro; l): 70762; Sarı (200 & mikro; l): 70760002; Beyaz (10 & mikro; L): 701116 | |
| steril hücre kültürü kapları (plastik; çap 3 cm) | TPP Techno Plastic Products AG | 93040 | |
| steril hücre kültürü kapları (plastik; çap 6 cm) | Sarstedt | 72690550 | |
| steril Petri kapları (plastik; çap 10 cm) | Beyin diseksiyonu için | Sarstedt | 83.3902 |
| İsim | Company | Katalog Numarası | Comments |
| Kimyasallar ve Reaktifler | |||
| sodyum klorür | Roth | 0601.1 | |
| 1x PBS'de %4 paraformaldehit | Sigma-Aldrich | 16005 | |
| 4 ',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | |
| kalsiyum nitrat tetrahidrat | Sigma-Aldrich | C1396 | |
| etanol pa %100 | Sigma-Aldrich | 46139 | |
| keçi ve alfa;-fare IgG (Fc'ye özel) FITC konjuge | Thermo Fisher Scientific | 31547 | |
| HEPES | Roth | 9105.4 | |
| yüksek vakumlu gres | DOW CORNING | 3826-50 | kendi kendine yapılan cam alt yemekler için kullanılan silikon gres |
| magnezyum sülfat heptahidrat | Merck | 105886 | |
| metilen mavisi | Serva | 29198.01 | |
| Monoklonal Anti-Tubulin, Asetillenmiş antikor | Sigma-Aldrich | T6793 | |
| Aqua-Poly/Mount (montaj ortamı) | Polyscience | 18606 | |
| poli-L-lizin | Biochrom | L 7240 | |
| potasyum klorür | Merck | 104938 | |
| Yağsız süt | Roth | 68514-61-4 | |
| Texas Red-X Phalloidin | Thermo Fisher Scientific | T7471 | |
| Trikain | Sigma-Aldrich | E10521 | Eşanlamlı: Etil 3-aminobenzoat metansülfonat |
| Triton X-100 | BioRad | 1610407 | |
| Trypan Blue | Gibco by Life Technologies | 15250061 | |
| Name | Company | Katalog Numarası | Comments |
| Enzymes | |||
| collagenase (Tip 2) | Thermo Fisher Scientific | 17101015 | tozu hücre kültürü ortamında (8 mg / mL) çözün ve çözeltiyi steril süzün, alikotları -20 ° C'de saklayın; C |
| pronaz (Streptomyces griseus'tan) | Roche | 11459643001 | Sigma-Aldrich tarafından dağıtılır,% 30 Danieau (10 mg / mL) içinde çözülür ve alikotları -20 ° C'de saklar; C |
| Name | Company | Katalog Numarası | Comments |
| Hücre kültürü için ortam ve çözümler | |||
| 1x PBS (Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salini) | Gibco, Life Technologies | 14190-169 | Thermo Fisher Scientific tarafından dağıtıldı |
| CO2 bağımsız ortam | Gibco by Life Technologies | 18045054 | Thermo Fisher tarafından dağıtılmaktadır Scientific |
| filtrelenmiş sığır serumu (FBS) | PAN-Biotech | bireysel toplu | |
| glutamin 100x | Gibco by Life Technologies | 25030081 | Thermo Fisher Scientific tarafından dağıtılan |
| Leibovitz'in L-15 ortamı | Gibco Life tarafından dağıtılmaktadır. Thermo | Fisher Scientific | tarafından dağıtılan teknolojiler 11415049 |
| PenStrep (10.000 U/mL) | Gibco by Life Technologies | 15140148 | Thermo Fisher Scientific tarafından dağıtılmaktadır |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission