Серебряных наночастиц метод для улучшения Билиарной атрезией синдром у мышей
Summary
Эта статья подробно описывает метод, основанный на наночастицы серебра для улучшения Билиарной атрезией синдром в экспериментальной Билиарной атрезией мыши модели. Четкое понимание процесса подготовки реагента и технику инъекций неонатальной мышь поможет ознакомить исследователей с метод, используемый в неонатальной мыши модель исследования.
Abstract
Билиарной атрезией (BA) — это серьезный тип холангит с высокой смертности детей, которые до сих пор не полностью понимается этиологии. Вирусные инфекции могут быть одной из возможных причин. Типичная модель животных, используются для изучения Ба устанавливается путем прививки новорожденным мышь с ротавирусом резус. Было показано, что наночастицы серебра оказывают антибактериальное и противовирусное эффекты; в этом исследовании оценивается их функции в модели мыши ба. В настоящее время в ба экспериментов на животных, методы, используемые для улучшения симптомов Ба мышей, обычно симптоматическое лечение через продовольствия или других наркотиков. Целью данного исследования является продемонстрировать новый метод для улучшения Ба синдром у мышей, внутрибрюшинного введения наночастиц серебра и предоставить подробные методы для подготовки формулировка гель серебряных наночастиц. Этот метод прост и широко применимые и может использоваться для исследования механизма Ба, а также клиническое лечение. На основе Ба мыши модели, когда мышей выставки желтухи, подготовленный серебряных наночастиц Гель вводится внутрибрюшинно на поверхность Нижняя печени. Наблюдается состояние выживания, и изучаются биохимических показателей и гистопатология печени. Этот метод позволяет более интуитивное понимание создание модели Ба и Роман лечения ба.
Introduction
Ба является формой холестаза, характеризуется стойким желтухи и обладает высокой смертности в отсутствие трансплантации печени. Вирусные инфекции тесно связаны с патогенеза ба. Ротавирусной инфекции цитомегаловирус и реовирус предлагались как патогены в ба1,2,3. В неонатальный период ответ незрелой иммунной системы к вирусной инфекции приводит к иммунной регуляции против дополнительных – и внутрипеченочных желчных протоков, ведущих к апоптозу желчных эпителиальных клеток, воспалительных клеток инфильтрата в портале Площадь, внутрипеченочных и внепеченочных желчных протоков препятствие и, наконец, фиброз печени4,5,6.
Часто используемых животных модель BA исследований включает прививки новорожденным мышь с резус Ротавирусная (RRV). Мышь обычно развивается желтуха после 5-6 дней, показывая низкой массой тела и acholic стул. Роль иммунной реакции в процессе заболевания имеет решающее значение, особенно для естественных убийца клеток (НК); истощение этих клеток с антитела анти NKG2D значительно снижает Ба индуцированного повреждения7. Кроме того, другие клетки, включая CD4+ T-клеток, CD8+ T клетки, дендритные клетки и регулирования Т-клеток, все было показано играть роль в болезни8,9,10,11. Все данные свидетельствуют о незаменимый характер иммунной системы в ходе ба.
Наночастиц серебра (AgNPs) были продемонстрированы иметь благотворное влияние против некоторых инфекционных заболеваний, в том числе12 бактериальных инфекций и вирусных инфекций13,14,15. Однако кроме дерматологических использования, несколько исследований использовали AgNPs в клинического лечения, главным образом из-за их потенциальной токсичности. В экспериментов на животных исследователи изучили обычно эффективность AgNPs осуществляется через устные16 или17внутривенные методы. Однако другие исследователи изучили эффективность AgNPs осуществляется через инъекцию внутрибрюшинного (и.п.) у новорожденных мышей экспериментов, что простой и быстрый метод приводит к более прямое воздействие на печени и желчных протоков при снижение токсичности для других систем, таких как иммунной системы. AgNPs было показано, влияют на активность клеток NK18; Таким образом мы протестировали терапевтического эффекта AgNPs осуществляется через и.п. инъекции в мышиной модели ба.
Protocol
Representative Results
Discussion
AgNPs обладают мощными антибактериальными свойствами широкого спектра и сильный проницаемость22; Кроме того они используются для производства целого ряда антибактериальных лекарственных препаратов23. Однако AgNPs может занять много времени, чтобы очистить после ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
AgNPs, здесь были подарок от C. м. Че в Отдел химии, Университет Гонконга. Эта работа финансировалась Фонд национального естественных наук Китая (№ 81600399) и науки и технологии проект Гуанчжоу (No.201707010014).
Materials
| BALB/c mouse | Guangdong Medical Experimental Animal Center | SYXK2017-0174 | Animal experiment |
| Rhesus rotavirus (RRV) | ATCC | ATCC VR-1739 | Establish biliary atresia mouse model |
| MA104 cells | ATCC | ATCC CRL-2378.1 | For laboratory use only |
| DMEM | Thermo Fisher | 10569010 | Mammalian Cell Culture |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher | 10099141 | Mammalian Cell Culture |
| collagen Type I | CORNING | 354236 | For research use only |
| PBS buffer | OXOID | BR0014G | For washing |
| NaOH | Sigma | 1310-73-2 | Adjust the PH value |
| AgNP | Antibacterial Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong. |
||
| Insulin syringe with integrated needle | BD | 9161635S | For medical use |
| 15-mL Centrifuge Tube | Corning | 430791 | For laboratory use only |
| 1.5-mL Microcentrifuge Tube | GEB | CT0200-B-N | For laboratory use only |
| Microscope | Nikon | ECLIPSE-Ci | For laboratory use |
| Dissecting/Intravital microscope | Nikon | SMZ 1000 | For laboratory use |
| anti-Mouse NKp46 FITC | eBioscience | 11-3351 | For research use only |
| anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5 | eBioscience | 15-0041 | For research use only |
| Monoclonal Mouse Anti-Human CD4 | DAKO | 20001673 | For research use only |
| anti-NKG2D | RD | MAB1547 | For research use only |
| BD FACSCanto Flow Cytometer | BD Biosciences | FACS Canto Plus | For laboratory use only |
References
- Szavay, P. O., Leonhardt, J., Czechschmidt, G., Petersen, C. The role of reovirus type 3 infection in an established murine model for biliary atresia. European Journal of Pediatric Surgery. 12 (04), 248-250 (2002).
- Coots, A., et al. Rotavirus infection of human cholangiocytes parallels the murine model of biliary atresia. Journal of Surgical Research. 177 (2), 275-281 (2012).
- Shanmugam, N. P., Jayanthi, V. Biliary atresia with cytomegalovirus. Indian Pediatrics. 49 (2), 157 (2012).
- Mack, C. L., Feldman, A. G., Sokol, R. J. Clues to the Etiology of Bile Duct Injuryin Biliary Atresia. Seminars in Liver Disease. 32, 307-316 (2012).
- Muraji, T., Suskind, D. L., Irie, N. Biliary atresia: a new immunological insight into etiopathogenesis. Expert Review of Gastroenterology & Hepatology. 3 (6), 599-606 (2009).
- Sokol, R. J., Mack, C. Etiopathogenesis of Biliary Artesia. Seminars in Liver Disease. 21, 517-524 (2001).
- Shivakumar, P., Sabla, G. E., Whitington, P., Chougnet, C. A., Bezerra, J. A. Neonatal NK cells target the mouse duct epithelium via Nkg2d and drive tissue-specific injury in experimental biliary atresia. Journal of Clinical Investigation. 119 (8), 2281-2290 (2009).
- Mack, C. L., et al. Oligoclonal expansions of CD4+ and CD8+ T-cells in the target organ of patients with biliary atresia. Gastroenterology. 133 (1), 278-287 (2007).
- Shivakumar, P., et al. Effector Role of Neonatal Hepatic CD8 + Lymphocytes in Epithelial Injury and Autoimmunity in Experimental Biliary Atresia. Gastroenterology. 133 (1), 268-277 (2007).
- Saxena, V., et al. Dendritic Cells Regulate Natural Killer Cell Activation and Epithelial Injury in Experimental Biliary Atresia. Science Translational Medicine. 3 (102), (2011).
- Miethke, A. G., et al. Post-natal paucity of regulatory T cells and control of NK cell activation in experimental biliary atresia. Journal of Hepatology. 52 (5), 718-726 (2010).
- Tian, J., et al. Topical delivery of silver nanoparticles promotes wound healing. ChemMedChem. 2 (1), 129-136 (2010).
- Lu, L., et al. Silver nanoparticles inhibit hepatitis B virus replication. Antiviral Therapy. 13 (2), 253-262 (2008).
- Xiang, D., et al. Inhibition of A/Human/Hubei/3/2005 (H3N2) influenza virus infection by silver nanoparticles in vitro and in vivo. International Journal of Nanomedicine. 8 (Issue 1), 4103-4114 (2013).
- Elechiguerra, J. L., et al. Interaction of silver nanoparticles with HIV-1. Journal of Nanobiotechnology. 3 (1), 1-10 (2005).
- Nallanthighal, S., et al. Differential effects of silver nanoparticles on DNA damage and DNA repair gene expression in Ogg1-deficient and wild type mice. Nanotoxicology. 11 (8), 1-16 (2017).
- Wen, H., et al. Acute toxicity and genotoxicity of silver nanoparticle in rats. PLoS One. 12 (9), e0185554 (2017).
- Zhang, R., et al. Silver nanoparticle treatment ameliorates biliary atresia syndrome in rhesus rotavirus inoculated mice. Nanomedicine. 13 (3), 1041-1050 (2017).
- Arnold, M., Patton, J. T., McDonald, S. M. Culturing, Storage, and Quantification of Rotaviruses. Current Protocols in Microbiology. , (2009).
- Liu, X., et al. Silver nanoparticles mediate differential responses in keratinocytes and fibroblasts during skin wound healing. ChemMedChem. 5 (3), 468-475 (2010).
- Zhang, R., et al. Silver nanoparticles promote osteogenesis of mesenchymal stem cells and improve bone fracture healing in osteogenesis mechanism mouse model. Nanomedicine. 11 (8), 1949-1959 (2015).
- Wu, J., Hou, S., Ren, D., Mather, P. T. Antimicrobial properties of nanostructured hydrogel webs containing silver. Biomacromolecules. 10 (9), 2686-2693 (2009).
- Xu, L. Genotoxicity and molecular response of silver nanoparticle (NP)-based hydrogel. Journal of Nanobiotechnology. 10 (1), 16 (2012).
- Dobrzyńska, M. M., et al. Genotoxicity of silver and titanium dioxide nanoparticles in bone marrow cells of rats in vivo. Toxicology. 315 (1), 86-91 (2014).
- Mohamed, H. R. H. Estimation of TiO 2 nanoparticle-induced genotoxicity persistence and possible chronic gastritis-induction in mice. Food & Chemical Toxicology. 83 (9), 76-83 (2015).
