Eine Silber Nanopartikel-Methode für bessernde biliären Atresie-Syndrom bei Mäusen
Summary
Dieser Artikel beschreibt ausführlich eine Methode basierend auf Silber-Nanopartikel für bessernde biliären Atresie-Syndrom in einem Mausmodell der experimentellen biliären Atresie. Ein solides Verständnis der Vorbereitungsprozess Reagenz und die Neugeborenen Maus Injektionstechnik hilft Forschern mit der Methode in Studien an Neugeborenen Mäusen Modell vertraut zu machen.
Abstract
Biliären Atresie (BA) ist eine schwere Form der Cholangitis mit einer hohen Mortalität bei Kindern, von denen die Ätiologie noch nicht vollständig verstanden wird. Virale Infektionen können eine mögliche Ursache sein. Die typische Tiermodell verwendet für das Studium BA wird von einer Neugeborenen Maus mit einem Rhesus-Rotaviren impfen gegründet. Silber-Nanopartikel sind gezeigt worden, um antibakterielle und antivirale Wirkung auszuüben; Ihre Funktion in der BA-Maus-Modell wird in dieser Studie ausgewertet. Derzeit im Tierversuch BA die Methoden verwendet, um die Symptome von BA Mäusen zu verbessern in der Regel symptomatische Behandlungen über Lebensmittel oder andere Medikamente gegeben. Das Ziel dieser Studie ist eine neue Methode zur bessernde BA-Syndrom bei Mäusen durch die intraperitoneale Injektion von Silber-Nanopartikeln zu demonstrieren und detaillierte Verfahren zur Herstellung von Silber-Nanopartikel Gel-Formulierung zur Verfügung zu stellen. Diese Methode ist einfach und vielseitig einsetzbar und kann verwendet werden, um den Mechanismus der BA sowie in klinischen Behandlungen zu erforschen. Basierend auf der BA-Maus-Modell, wenn die Mäuse Gelbsucht aufweisen, wird das vorbereitete Silber Nanopartikel Gel intraperitoneal an die Oberfläche der unteren Leber gespritzt. Der Überlebens-Status wird beobachtet, und biochemische Indikatoren und Leber Histopathologie geprüft. Diese Methode ermöglicht ein intuitiveres Verständnis für die Einrichtung das BA-Modell und die neue BA-Behandlungen.
Introduction
BA ist eine Form der Cholestase gekennzeichnet durch anhaltende Gelbsucht und hat hohe Sterblichkeitsrate in Ermangelung einer Lebertransplantation. Virale Infektionen sind eng verbunden mit der Pathogenese der BA. Das Zytomegalievirus wirtseigenen und Rotaviren sind alle als Krankheitserreger in BA1,2,3vorgeschlagen worden. In der Neugeborenenperiode ergibt sich die Antwort des unreifen Immunsystems auf eine virale Infektion immun Dysregulation gegen extra- und intrahepatischen Gallenwege, führt zur biliären Epithelzelle Apoptose, entzündliche Zelle eindringen in das portal Bereich, intrahepatischen und extrahepatische Gallenwege Obstruktion, und zu guter Letzt Leberfibrose4,5,6.
Die häufigsten verwendete Tiermodell für BA Studium beinhaltet die Impfung von Neugeborenen Maus mit Rhesus-Rotaviren (RRV). Die Maus entwickelt in der Regel Gelbsucht nach 5-6 Tagen zeigt ein niedriges Körpergewicht und acholic Hocker. Die Rolle der Immunantwort im Krankheitsprozess ist kritisch, vor allem für natürliche killer (NK)-Zellen; der Abbau dieser Zellen mit Anti-NKG2D Antikörper reduziert BA-induzierten Schäden7. Darüber hinaus andere Zellen, einschließlich CD4+ T-Zellen, CD8+ T Zellen, Dendritische Zellen und regulatorische T-Zellen wurden alle Rollen in der Krankheit8,9,10,11spielen gezeigt. Alle Daten deuten darauf hin das unverzichtbare Natur des Immunsystems im Zuge der BA.
Silber-Nanopartikel (AgNPs) wurden nachgewiesen, um wohltuende Wirkung gegen einige Infektionskrankheiten, einschließlich bakterieller Infektionen12 und Virusinfektionen13,14,15zu haben. Jedoch haben außer dermatologischen Nutzung nur wenige Studien AgNPs in eine klinische Behandlung, vor allem wegen ihrer potenziellen Toxizität verwendet. Im Tierversuch untersuchten Forscher in der Regel die Wirksamkeit von AgNPs verwaltet über mündliche16 oder intravenöse Methoden17. Jedoch haben keine andere Forscher untersuchten die Wirksamkeit der AgNPs verwaltet über eine intraperitoneale (i.p.) Injektion bei Neugeborenen Maus experimentiert, die eine einfache und schnelle Methode um eine direktere Wirkung auf die Leber und Gallenwege während führt reduziert die Toxizität zu anderen Systemen, wie das Immunsystem. AgNPs haben gezeigt, dass NK Zelle Aktivität18beeinflussen; Daher haben wir die therapeutische Wirkung von AgNPs verwaltet über i.p.-Injektion in den BA-Maus-Modell getestet.
Protocol
Representative Results
Discussion
AgNPs zeigen starke Breitspektrum antibakterielle Eigenschaften und eine starke Durchlässigkeit22; Darüber hinaus dienen sie verschiedenste antibakterielle medizinische Produkte23zu produzieren. Jedoch kann AgNPs dauern eine lange Zeit zu löschen, sobald sie reichern sich in den Organen, und diese Beharrlichkeit zu toxischen Wirkungen24,25führen kann. Eine frühere Studie untersuchte die akute Toxizität und Gen…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die hier verwendeten AgNPs waren ein Geschenk von C. M. Che im Department of Chemistry, University of Hong Kong. Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (Nr. 81600399) und der Wissenschaft und Technologie-Projekt von Guangzhou (No.201707010014) finanziert.
Materials
| BALB/c mouse | Guangdong Medical Experimental Animal Center | SYXK2017-0174 | Animal experiment |
| Rhesus rotavirus (RRV) | ATCC | ATCC VR-1739 | Establish biliary atresia mouse model |
| MA104 cells | ATCC | ATCC CRL-2378.1 | For laboratory use only |
| DMEM | Thermo Fisher | 10569010 | Mammalian Cell Culture |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher | 10099141 | Mammalian Cell Culture |
| collagen Type I | CORNING | 354236 | For research use only |
| PBS buffer | OXOID | BR0014G | For washing |
| NaOH | Sigma | 1310-73-2 | Adjust the PH value |
| AgNP | Antibacterial Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong. |
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| Insulin syringe with integrated needle | BD | 9161635S | For medical use |
| 15-mL Centrifuge Tube | Corning | 430791 | For laboratory use only |
| 1.5-mL Microcentrifuge Tube | GEB | CT0200-B-N | For laboratory use only |
| Microscope | Nikon | ECLIPSE-Ci | For laboratory use |
| Dissecting/Intravital microscope | Nikon | SMZ 1000 | For laboratory use |
| anti-Mouse NKp46 FITC | eBioscience | 11-3351 | For research use only |
| anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5 | eBioscience | 15-0041 | For research use only |
| Monoclonal Mouse Anti-Human CD4 | DAKO | 20001673 | For research use only |
| anti-NKG2D | RD | MAB1547 | For research use only |
| BD FACSCanto Flow Cytometer | BD Biosciences | FACS Canto Plus | For laboratory use only |
References
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