Summary

Um método de nanopartículas prata para atenuar a síndrome de Atresia biliar em ratos

Published: October 13, 2018
doi:

Summary

Este artigo descreve detalhadamente um método baseado em nanopartículas de prata para atenuar a síndrome de atresia biliar em um modelo do rato de atresia biliar experimental. Uma sólida compreensão do processo de preparação de reagente e a técnica de injeção de rato neonatal ajudará a familiarizar os pesquisadores com o método utilizado em estudos de modelo de rato neonatal.

Abstract

Atresia biliar (BA) é um tipo grave de colangite, com alta mortalidade em crianças do que a etiologia é ainda não totalmente compreendida. Infecções virais podem ser uma causa possível. O típico modelo animal para estudar BA é estabelecido por inocular um rato neonatal com um rotavírus rhesus. Nanopartículas de prata foram mostradas para exercer efeitos antibacterianos e antivirais; sua função no modelo do rato de BA é avaliada neste estudo. Atualmente, em experiências com animais BA, os métodos utilizados para melhorar os sintomas dos ratos BA são tratamentos geralmente sintomáticos dada através de alimentos ou outras drogas. O objetivo deste estudo é demonstrar um novo método para atenuar a síndrome de BA em ratos pela injeção intraperitoneal de nanopartículas de prata e para fornecer métodos detalhados para preparar a formulação de gel de nanopartículas de prata. Este método é simples e amplamente aplicável e pode ser usado para pesquisar o mecanismo de BA, bem como em tratamentos clínicos. Baseia-se no modelo do rato de BA, quando os ratos exibem icterícia, o gel de nanopartículas de prata preparado é injetado intraperitonealmente à superfície do fígado inferior. Observa-se o status de sobrevivência, e indicadores bioquímicos e histopatologia hepática são examinados. Este método permite uma compreensão mais intuitiva de ambos o estabelecimento dos novos tratamentos de BA e modelo BA.

Introduction

BA é uma forma de colestase caracterizada por icterícia persistente e tem alta mortalidade na ausência de transplante hepático. Infecções virais estão intimamente associadas com a patogênese da BA. O citomegalovírus, reovírus e rotavírus têm sido sugeridos como patógenos na BA1,2,3. Durante o período neonatal, a resposta do sistema imunológico imaturo para uma infecção viral resulta em alteração no sistema imunológica contra ductos biliares intra e extra, levando à apoptose de células epiteliais biliar, infiltração de células inflamatórias no portal área, obstrução biliar intra-hepática e extra-hepática e finalmente, fibrose hepática,4,5,6.

O modelo animal comumente utilizado para estudos de BA envolve a inoculação de um rato neonatal com o rotavírus rhesus (RRV). O mouse normalmente desenvolve icterícia após 5-6 dias, apresentando um peso de corpo baixo e fezes acholic. O papel da resposta imune no processo de doença é crítico, especialmente para as células killer naturais (NK); o esgotamento dessas células com anticorpo anti-NKG2D reduz dano induzido por BA7. Além disso, outras células, incluindo CD4+ T células CD8+ T células, as células dendríticas e pilhas de T reguladoras, todos foram mostradas para desempenhar funções na doença8,9,10,11. Todos os dados sugerem a natureza indispensável do sistema imunológico, no decurso de BA.

Nanopartículas de prata (AgNPs) tem sido demonstradas para ter efeitos benéficos contra algumas doenças infecciosas, incluindo infecções bacterianas12 e infecções virais13,14,15. No entanto, além de uso dermatológico, poucos estudos têm usado AgNPs em um tratamento clínico, principalmente por causa da sua toxicidade potencial. Em experimentos com animais, os investigadores estudaram-se geralmente a eficácia de AgNPs administrado via oral16 ou intravenosa métodos17. No entanto, não há outros pesquisadores estudaram a eficácia de AgNPs administrado através de uma injeção intraperitoneal (i.p.) em rato neonatal de experiências, que é um método simples e rápido levando a um efeito mais direto sobre o fígado e ductos biliares, enquanto reduzir a toxicidade de outros sistemas, como o sistema imunológico. AgNPs foram mostrados para afetar a atividade de células NK18; Portanto, nós testamos os efeitos terapêuticos da AgNPs administrado através de injeção i.p. no modelo do rato de BA.

Protocol

Todos os protocolos experimentais animais foram aprovados pelo Comitê de uso do Sun Yat-Sen University laboratório Animal Center (#IACUC-DB-16-0602) e institucionais Cuidado Animal. 1. estabelecer o modelo de Mouse de Atresia biliar Manter grávidos camundongos BALB/c em um ambiente livre de patógeno específico sob um ciclo claro/escuro de 12 h a 25 ° C, com acesso a comida esterilizada ad libitum. Para preparar a estirpe RRV MMU 18006, amplificar o vírus nas…

Representative Results

Baseado no modelo estabelecido BA rato, foram administrados os ratos infectados neonatais uma injeção i.p. da mistura preparada de colágeno AgNP 2 x depois exibindo icterícia. Sobrevivência do mouse foi verificada diariamente e efectuaram-se testes de função hepática, patologia hepática e citometria de fluxo. Em comparação com os ratos de BA de controle sem tratamento, os ratos tratados com AgNP mostraram redução da icterícia e mantiveram seu peso normal (<strong class="xfig…

Discussion

AgNPs apresentam propriedades antibacterianas amplo espectro potentes e uma permeabilidade forte22; Além disso, eles são usados para produzir uma gama de produtos médicos antibacteriano23. No entanto, AgNPs pode levar um longo tempo para limpar uma vez que se acumulam em órgãos, e esta persistência pode levar a efeitos tóxicos24,25. Um estudo anterior analisou a toxicidade aguda e genotoxicidade de AgNPs apó…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Os AgNPs usados aqui foi um presente do C. M. Che no departamento de química, Universidade de Hong Kong. Este trabalho foi financiado pela Fundação Nacional de ciências naturais da China (n. º 81600399) e ciência e tecnologia, projeto de Guangzhou (No.201707010014).

Materials

BALB/c mouse Guangdong Medical Experimental Animal Center SYXK2017-0174 Animal experiment
Rhesus rotavirus (RRV) ATCC ATCC VR-1739 Establish biliary atresia mouse model
MA104 cells ATCC ATCC CRL-2378.1 For laboratory use only
DMEM Thermo Fisher 10569010 Mammalian Cell Culture
Fetal Bovine Serum Thermo Fisher 10099141 Mammalian Cell Culture
collagen Type I CORNING 354236 For research use only
PBS buffer OXOID BR0014G For washing
NaOH Sigma 1310-73-2 Adjust the PH value
AgNP Antibacterial
Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong.
Insulin syringe with integrated needle BD 9161635S For medical use
15-mL Centrifuge Tube Corning 430791 For laboratory use only
1.5-mL Microcentrifuge Tube GEB CT0200-B-N For laboratory use only
Microscope Nikon ECLIPSE-Ci For laboratory use
Dissecting/Intravital microscope Nikon SMZ 1000 For laboratory use
anti-Mouse NKp46 FITC eBioscience 11-3351 For research use only
anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5 eBioscience 15-0041 For research use only
Monoclonal Mouse Anti-Human CD4 DAKO 20001673 For research use only
anti-NKG2D RD MAB1547 For research use only
BD FACSCanto Flow Cytometer BD Biosciences FACS Canto Plus For laboratory use only

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Fu, M., Lin, Z., Lin, H., Tong, Y., Wang, H., Chen, H., Chen, Y., Zhang, R. A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice. J. Vis. Exp. (140), e58158, doi:10.3791/58158 (2018).

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