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Article de méthode

Fabrication de dispositifs de réfraction-index-assortie de microfluidique biomédicale

7.2K vues

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DOI :

10.3791/58296

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10 septembre 2018

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Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit la fabrication des dispositifs microfluidiques de MY133-V2000 pour éliminer les artefacts qui se posent souvent en microcanaux en raison des indices de réfraction incompatible entre les structures de microcanaux et une solution aqueuse. Ce protocole utilise un support acrylique pour compresser l’appareil encapsulé, améliorant l’adhérence chimiquement et mécaniquement.

Résumé

L’utilisation de dispositifs microfluidiques a émergé comme un outil déterminant pour des applications biomédicales. Lorsqu’il est combiné avec des techniques de microscopie moderne, ces dispositifs peuvent être implémentées dans le cadre d’une plate-forme robuste capable de prendre des mesures complémentaires simultanées. Le défi principal créé par la combinaison de ces deux techniques est la disparité dans l’indice de réfraction entre les matériaux utilisés traditionnellement pour fabriquer des dispositifs microfluidiques et les solutions aqueuses généralement utilisées en biomédecine. Ce décalage peut créer des artéfacts optiques près des bords de canal ou le périphérique. Une solution consiste à réduire l’indice de réfraction du matériau utilisé pour fabriquer le dispositif à l’aide d’un polymère fluoré tels que MY133-V2000, dont l’indice de réfraction est similaire à celle de l’eau (n = 1,33). Ici, la construction d’un dispositif microfluidique fabriqué à partir de MY133-V2000 en utilisant des techniques de lithographie douce est démontrée, à l’aide de plasma2 O en conjonction avec un support acrylique pour augmenter l’adhérence entre le dispositif de MY133-V2000 fabriqué et la substrat de polydiméthylsiloxane (PDMS). L’appareil est ensuite testé en incubant il rempli de milieux de culture cellulaire pendant 24 heures afin de démontrer la capacité de l’appareil pour maintenir des conditions de culture cellulaire au cours d’une expérience d’imagerie typique. Enfin, la microscopie quantitative phase (QPM) est utilisée pour mesurer la distribution de masse dans les cellules vivantes adhérentes dans le microcanaux. De cette façon, la précision accrue, activée par la fabrication du dispositif d’un polymère de faible indice de réfraction tels que MY133-V2000 en remplacement de matériaux traditionnels Lithographie douce comme le PDMS, est démontrée. Dans l’ensemble, cette approche de fabrication des dispositifs microfluidiques peut être facilement intégrée dans les workflows existants de lithographie douce afin de réduire les artefacts optiques et augmenter la précision de mesure.

Introduction

Le développement d’une technologie microfluidique a permis un large éventail de nouvelles techniques biomédicales qui s’appuient sur la physique unique de flux à l’échelle microscopique1,2. Cela inclut les techniques diagnostiques construites sur des plateformes microfluidiques qui quantifient les biomarqueurs cliniquement pertinents, y compris la cellule rigidité3marqueurs de surface4et5de la croissance. En manipulant les cellules individuelles, Dispositifs microfluidiques permet également de mesurer l’hétérogénéité biomarqueur, par exemp....

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Protocole

1. fabrication du polydiméthylsiloxane négatif

  1. Préparation du polydiméthylsiloxane
    1. Mesure 18 g d’élastomère de silicone PDMS et 1,8 g de réactif au durcissement. Versez le durcissement réactif dans un bateau mesure contenant l’élastomère.
    2. Mélanger l’élastomère et le réactif de polymérisation vigoureusement pendant 1 min et mettre le mélange dans une chambre à vide pendant 30 min.
    3. Retirer les PDMS de l’aspirateur, versez 15 g sur le négatif à l’aide d’un emporte-pièce (rayon = 3,8 cm) pour éviter le PDMS en cours d’exécution sur le côté et couvrir le reste du mélange PDMS.
    4. Mettre le moule contenant ....

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Résultats

Ce protocole décrit la fabrication de MY133-V2000, un polymère fluoré avec un faible indice de réfraction correspondant à celle de l’eau. Un élément clé de ce protocole est de savoir comment surmonter le manque d’adhérence qui est caractéristique des polymères fluorés à l’aide de plasma d’oxygène et de fabrication du dispositif dans un support acrylique pour fournir la force mécanique supplémentaire nécessaire pour assurer l’étanchéité du canal contre le substrat PDMS (

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Discussion

MY133-V2000 peut être utilisé comme une alternative aux matériaux de fabrication de la lithographie douce traditionnelle comme le PDMS. Travaux antérieurs ont démontré que les matériaux ayant un indice de réfraction élevé, comme le PDMS, introduisent artefacts importants près des murs du canal en raison de l’indices de réfraction incompatible entre le matériau de fabrication et de la solution aqueuse à l’intérieur du canal 13. MY133-V2000 permet correspondant à l’indice de réfraction du dispositif.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Ce travail a été soutenu par l’Université de l’Utah, Bureau du vice-président pour la recherche, ainsi que par des fonds en collaboration avec grant P30 CA042014, attribué à l’Institut de Cancer de Huntsman et au programme à l’Institut de Cancer de Huntsman CRR.

....

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
MY133-V2000MY PolymèresMY133-V2000
Sylgard 184Ellsworth Adhésifs184 SIL ELAST KIT 0.5KG
Lames de microscope Fisher PremiumFisher Scientific12-544-4.118
"(3.0mm) x 12 » x 12 » Feuille acryliqueUnited States Plastic Corp44290.060
"(1.5mm) x 12 » x 12 » Feuille acryliqueUnited States Plastic Corp44200
SCIGRIP 3 Ciment acrylique à prise très rapideUnited States Plastic Corp45735
Feuille d’aluminium standard (.6 mm d’épaisseur)VWR89107-726
Kim WipesFisher Scientific06-666
Insta-Cure+ Super GlueBob Smith IndustriesBSI-109
1/8" Tube en PVCMcMaster Carr5231K55
McCormick Colorant alimentaireTarget13353207
X-Acto #1 Couteau de précisionX-ActoX3201
X-Acto #18 Lame de ciseau à bois épaisX-ActoX218
VWR Lames de rasoirVWR55411-055
Plats de culture cellulaire traités en surfaceFisher ScientificFBO12922
Fibronectin Plasma HumainSigma-AldritchF0895-1MG
Trypsine-EDTA 10xFisher Scientific15-400-054
Corning Dulbecco’s Phosphate Tamponné SalineFisherScientific MT21030CM
Gibco Pénicilline-StreptomycineFisher Scientific15-140-148
HyClone Acides aminés non essentiels 100xFisher ScientificSH3023801
Sérum fœtal bovinOmega ScientificFB-12
Corning DMEM avec L-glutamine et glucoseFisher ScientificMT10013CV
Trichloro(1H,1H,2H,2H-perfluorooctyl)silaneSigma-Aldritch448931Réagit violemment avec l’eau
Éthanol, 200 proof Decon LabsFisher Scientific04-355-223
AcétoneFisher ScientificA18P-4
Bel-Art 42025 Dessicator en plastiqueCole-ParmerEW-06514-30
Epilog Fusion Laser Cutter, 120 WEpilog LaserEpilog Fusion M2 32 Laser
Isotemp Stir HotplateFisher ScientificSP88850200
Ateco 14111 Découpeur en acier inoxydable de 1,5 pouceAteco14111
Plat de culture cellulaire en verre PyrexFisher Scientific08-747B
Nettoyeur de plasma à radiofréquenceHarrick PlasmaPDC-32GUtilisé avec de l’oxygène gazeux
Black Hole Laboratories DigivacBlack Hole LaboratoriesModèle 215
Four ultraviolet Intelli-RayUvitronUVO338
Compact Spin CoaterMTI CorporationVTC-100A
Fisher Brand Isotemp OvenFisher Scientific15-103-0510convection forcée
P1000Fisher ScientificFD10006G
HeraCell VIOS 160iFisher Scientific13 998 212PM
Pipette à déplacement positif Gilson à

Références

  1. Zare, R. N., Kim, S. Microfluidic platforms for single-cell analysis. Annual Review Biomedical Engineering. 12, 187-201 (2010).
  2. Neuzi, P., Giselbrecht, S., Lange, K., Huang, T. J., Manz, A. Revisiting lab-on-a-chip technology for drug discovery. Nature Reviews Drug Discovery. 11 (8), 620-632 (2012).
  3. Xu, W., et al.

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Réimpressions et autorisations

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