نقدم هنا، بروتوكولا لإنتاج جزء الأوعية الدموية stromal المستمدة من الأنسجة الدهنية وتطبيقه على تحسين وظائف الركبة بتجديد الأنسجة مثل الغضاريف في مرضى هشاشة العظام البشرية.
هشاشة العظام (الزراعة العضوية) واحدة من الأكثر شيوعاً اضطرابات المنهكة. في الآونة الأخيرة، بذلت محاولات عديدة لتحسين وظائف الركبتين باستخدام أشكال مختلفة من الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs). في كوريا ومركزات نخاع العظام والحبل السري عليها الخلايا الجذعية المشتقة من الدم “الأغذية الكورية” وإدارة المخدرات (مستخلصات) لتجديد الغضاريف. وباﻹضافة إلى ذلك، سمح مستخلصات المستمدة من الأنسجة الدهنية stromal الأوعية الدموية جزء (SVF) لحقن مشتركة في المرضى البشرية. ذاتي المستمدة من الأنسجة الدهنية لصندوق التبرعات الخاص يحتوي على مصفوفة خارج الخلية (ECM) بالإضافة إلى الخلايا الجذعية الوسيطة. إدارة المحتوى في المؤسسة يتغوط السيتوكينات المختلفة، جنبا إلى جنب مع حمض الهيالورونيك (هكتار) والبلازما الغنية بالصفائح الدموية (PRP) تنشيط بواسطة كلوريد الكالسيوم، ويمكن أن تساعد MSCs تجديد الغضاريف، وتحسين وظائف الركبة. في هذه المقالة، قدمنا بروتوكول لتحسين وظائف الركبة بتجديد الأنسجة مثل الغضاريف في المرضى البشرية مع الزراعة العضوية. أولاً ذكرت 2011 متبوعاً بعدد قليل من المنشورات إضافية نتيجة للبروتوكول. ويشمل البروتوكول شفط الدهون للحصول على ليبواسبيراتيس ذاتي مختلطة مع كولاجيناز. ثم يتم قص هذا الخليط ليبواسبيراتيس-كولاجيناز وتجانس لإزالة النسيج الليفي الكبيرة التي قد تسد الإبرة أثناء الحقن. وبعد ذلك، هو المحتضنة الخليط للحصول على التبرعات المستمدة من الأنسجة الدهنية. التبرعات المستمدة من الأنسجة الدهنية الناتجة عن ذلك، تتضمن كل المستمدة من الأنسجة الدهنية MSCs وبقايا من إدارة المحتوى في المؤسسة، يتم حقن في الركبتين للمرضى، جنبا إلى جنب مع ها وكلوريد الكالسيوم المنشط الحزب الثوري. وتشتمل على ثلاث حالات من المرضى الذين عولجوا مع بروتوكول لدينا مما أدى إلى تحسن الأم في الركبة وتورم ونطاق الحركة جنبا إلى جنب مع الأدلة التصوير بالرنين المغناطيسي للأنسجة مثل الغضاريف هيلين.
الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs) من المعروف أن لديها القدرة على تجديد غضروف1،2،3،4،،من56. يمكن الحصول عليها بسهولة من مصادر مختلفة: دم الحبل السري، نخاع العظام والأنسجة الدهنية بين العديد من الآخرين. من بين هذه المصادر، هو الأنسجة الدهنية المصدر الوحيد حيث يمكن الحصول على عدد كاف من MSCs دون أي توسع الثقافة تجديد غضروف في إعدادات السريرية7،8. نخاع العظم ذاتي كسر الأوعية الدموية stromal (SVF) يمكن بسهولة الحصول عليها كذلك. عدد الخلايا الجذعية الواردة في نخاع الموسعة غير الثقافة غير منخفضة جداً7،8. قد يحتوي دم الحبل السري على عدد كاف من MSCs. ومع ذلك، دم الحبل السري ليس مصدرا متاحة بسهولة من صندوق التبرعات الخاص الذاتي.
تتوفر أساليب عديدة لمعالجة الأنسجة الدهنية للحصول على التبرعات للتطبيقات السريرية. ومن بين هذه الطريقة الحصول على MSCs من الأنسجة الدهنية باستخدام كولاجيناز، وضعت وأكده زاك et al. 5 , 6، يتم قبول جيد جداً. لقد تم تعديل هذا الأسلوب لاستخدام كولاجيناز للتطبيقات السريرية في قسم جراحة العظام. لتطبيق إعدادات السريرية، يجب أن يكون النظام نظام مغلق الاحتفاظ العقم مع الحفاظ على الراحة. تعديل معين واحد المعروضة في هذا المقال ينطوي على تجانس ليبواسبيراتيس. يتم هضمها ليبواسبيراتيس صغيرة الحجم نسبيا أسرع من الأكبر حجماً التي تسفر عن انهيار متفاوتاً من الأنسجة الدهنية. وعلاوة على ذلك، قد تنتج هذه ليبواسبيراتيس الحجم الأكبر الأنسجة الليفية التي يمكن أن تسد المحاقن والإبر أثناء إجراء حقن مشتركة9،10. بغية منع هذه القضايا، قد تجانس في ليبواسبيراتيس بالقطع وتنميق ليبواسبيراتيس قبل الحضانة مع كولاجيناز. التبرعات المستمدة من الأنسجة الدهنية الناتجة عن ذلك قد تتضمن المصفوفة خارج الخلية أكثر توحيدا (ECM) بالمقارنة مع ليبواسبيراتيس غير المتجانس11. قد يعمل ECM المعطلة الواردة في صندوق التبرعات الخاص ك سقالة12.
في عام 2009، سمح ذاتي من صندوق التبرعات الخاص المستمدة من الأنسجة الدهنية “الأغذية الكورية” وإدارة المخدرات (مستخلصات) عند معالجتها داخل مرفق طبي مع الحد الأدنى من المعالجة بواسطة طبيب13. وبعد ذلك، وقد استخدمت ذاتي المستمدة من الأنسجة الدهنية لصندوق التبرعات الخاص كعامل محتمل لتحسين وظائف الركبة في مرضى هشاشة العظام (الزراعة العضوية) التي يحتمل أن تجديد الأنسجة مثل الغضاريف10،،من1415 , 16 , 17 , 18 .
في عام 2011، أظهرت باك لأول مرة أن الخلايا الجذعية المشتقة من الأنسجة الدهنية (الخزفية) الواردة في صندوق التبرعات الخاص المستمدة من الأنسجة الدهنية يمكن تحسين وظائف الركبة احتمال تجديد الأنسجة مثل الغضاريف في مرضى الزراعة العضوية البشرية عندما حقنت مع الصفيحات الغنية البلازما (PRP) 14. وباﻹضافة إلى ذلك، سجلت باك et al. سلامة البيانات في عام 2013 التي تشمل 91 مريضا. وكان معدل كفاءة يعني ذكرت في سلامة هذه البيانات 67%15. وفي وقت لاحق، أظهرت دراسات إضافية قبل باك et al. الركبة تحسين وظائف يحتمل أن تكون بسبب تجديد الأنسجة مثل الغضاريف في المرضى الذين يعانون غضروف المسيل للدموع وتلين الغضروف10،16،17 ،18. استناداً إلى المواد التي ذكرت، فمن المعروف أن عدد الخلايا الجذعية الموجودة في 100 غرام أنسجة الدهنية لمعالجتها بواسطة البروتوكول الواردة في هذه المادة قد تتراوح من 40000000 1,000,000 تبعاً لخصائص المرضى8، 19 , 20 , 21 , 22 , 23.
نقدم هنا، على بروتوكول سريرية للركبة البشرية الزراعة العضوية باستخدام التبرعات ذاتي المستمدة من الأنسجة الدهنية مع ها والحزب الثوري المنشط مع كلوريد الكالسيوم. النسخة الأولى من هذا البروتوكول السريرية، التي تشمل نظام مغلق، ودليل للحفاظ على العقم، أفيد في 201114. البروتوكول متطابقة الأمثل، الحفاظ على العقم، وأفادت التقارير في عام 2013 و 201610،15. ويرد هنا، البروتوكول الأمثل. ويرد في الشكل 1التخطيطي نظرة عامة على البروتوكول.
رقم 1: نظرة عامة التخطيطي للبروتوكول. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
وفي عام 2001، زاك وآخرون. عزل الخلايا الجذعية من الأنسجة الدهنية عن طريق تحطيم المصفوفة الكولاجين كولاجيناز6. بعد ذلك، أظهر الفريق أنه يمكن تحويل هذه الخلايا الجذعية المعزولة من الأنسجة الدهنية إلى الغضاريف والأنسجة الأخرى من ميسوديرم في الأصل، تثبت أن هذه الخلايا الجذعي?…
The authors have nothing to disclose.
ويسلم مقدم البلاغ الدعم من موظفي “العيادة الطبية ميبرو” وتصميم الشكل بجبيل/ديفيد “لي”. هذا العمل كان يدعمها المنح البحثية من الحيوية وبرنامج تطوير التكنولوجيا الطبية من جبهة الخلاص الوطني تموله مست (رقم 2017M3A9E4078014-جبهة الخلاص الوطني)؛ والوطنية بحوث مؤسسة من كوريا (جبهة الخلاص الوطني) الممولة من وزارة العلوم وتكنولوجيا المعلومات والاتصالات (أرقام 2017R1A2B4002315 جبهة الخلاص الوطني وجبهة الخلاص الوطني-2016R1C1B2010308).
Material | |||
5% Betadine (povidone-iodine) | Firson Co., Ltd. | 657400260 | |
2% Lidocaine | Daehan Pharmaceutical Co. | 670603480 | |
Tumescent solution | Myungmoon Pharm. Co. Ltd. | N01BB01 | The solution was composed of 500 mL normal saline, 40 mL 2% lidocaine, 20 mL 0.5% marcaine, and 0.5 mL epinephrine 1:1000. |
Liberase TL and TM research grade | Roche Applied Science | 5401020001 | |
D5LR | Dahan Pharm. Co., Ltd. | 645101072 | Dextrose 5% in lactated Ringer's solution |
Anticoagulant citrate dextrose solution | Fenwal, Inc. | NDC:0942-0641 | The solution was composed of 0.8% citric acid, 0.22% sodium citrate, and 0.223% dextrose. |
3% (w/v) Calcium chloride | Choongwae Pharmaceutical Co. | 644902101 | |
0.5% (w/v) HA (Hyaluronic acid ) | Dongkwang pharm. Co., Ltd. | 645902030 | |
0.25% Ropivacaine | Huons Co., Ltd. | 670600150 | |
Equipment | |||
3.0 mm Cannula | WOOJU Medical Instruments Co. | ML30200 | |
60-mL Luer-Lock syringe | BD (Becton Dickinson) | 309653 | |
Centrifuge Barrel Kit | CPL Co., Ltd. | 30-0827044 | |
Tissue homogenizer that contains blades | CPL Co., Ltd. | 30-0827045 | |
Rotating incubator mixer | Medikan Co., Ltd | MS02060092 | |
Centrifuge | Hanil Scientific Inc. | CE1133 | |
Magnetic Resonance Imaging | Philips Medical Systems Inc. | 18068 | |
Ultrasound Imaging System | Samsung Medison co., Ltd | CT-LK-V10-ICM-09.05.2007 |