प्राथमिक मानव कोशिकाओं में Zika विषाणु के एंटीबॉडी-आश्रित संवर्धन की ठहराव
Summary
हम मानव सीरम, प्राथमिक मानव कोशिकाओं का उपयोग करके Zika वायरस के संक्रमण पर डेंगू वायरस के खिलाफ पूर्व मौजूदा उन्मुक्ति के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए एक विधि का वर्णन है, और मात्रात्मक वास्तविक समय पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया द्वारा संक्रमण ठहराव.
Abstract
flavivirus Zika और स्नायविक जटिलताओं के हाल ही में उद्भव, जैसे Guillain-Barré सिंड्रोम और शिशुओं में microcephaly, गंभीर सार्वजनिक सुरक्षा चिंताओं लाया है । जोखिम वाले कारकों में, एंटीबॉडी-निर्भर वृद्धि (ADE) सबसे महत्वपूर्ण खतरा बन गया है, के रूप में हाल ही में पुनः Zika वायरस के उद्भव (ZIKV) मुख्य रूप से क्षेत्रों में जहां जनसंख्या उजागर किया गया है और पूर्व के एक राज्य में है प्रतिरक्षा अंय बारीकी से संबंधित flaviviruses, खासकर डेंगू वायरस (देंव) । यहां, हम प्राथमिक मानव कोशिकाओं या सेल लाइनों में ZIKV संक्रमण पर देंव के खिलाफ मानव सीरम एंटीबॉडी के प्रभाव को बढ़ाता है के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन ।
Introduction
मच्छरों जनित वायरल रोगों के बीच, Zika संक्रमण सबसे नैदानिक महत्वपूर्ण1में से एक है । संक्रमण flavivirus ZIKV के कारण होता है, जो ज्यादातर मामलों में, एडीज aegypti का प्राथमिक वेक्टर1,2के रूप में उपयोग करता है । हालांकि, वहां अध्ययन है कि कुछ ZIKV प्रकोपों में एक प्राथमिक सदिश के रूप में एडीज albopictus की सूचना दी है3। हालांकि संक्रमण कई मामलों में स्पर्शोन्मुख है, सबसे आम लक्षण बुखार, सिरदर्द, और मांसपेशियों में दर्द2हैं । वहां कोई इलाज या ZIKV संक्रमण के लिए उपलब्ध वैक्सीन और उपचार उपलब्ध है ज्यादातर सहायक है । दक्षिण अमेरिका में ZIKV के हाल के प्रकोप रोग के गंभीर मामलों के लिए नेतृत्व किया और एक लगभग 20 microcephaly2नाम भ्रूण में neurodevelopmental विकार में वृद्धि गुना । के रूप में दक्षिण अमेरिका के एक ऐसे देंव और पश्चिम नील नदी वायरस के रूप में कई arboviruses के लिए स्थानिकमारी वाले क्षेत्र है, यह जांचना महत्वपूर्ण है कि पहले अंय flavivirus (es) के लिए प्रतिरक्षा ZIKV संक्रमण और रोग की गंभीरता में एक भूमिका निभाता है ।
उम्र के दौरान, वायरस मेजबान सेल मशीनरी पर लेने के लिए और एंटीवायरल प्रतिक्रिया को दबाने के क्रम में infectivity के अपने मौका बढ़ाने के लिए विभिन्न रणनीतियों विकसित किया है. सभी का सबसे आकर्षक में से एक की मेजबानी पूर्व वायरस द्वारा प्रतिरक्षा एंटीबॉडी का उपयोग करने के लिए घटना ADE4के साथ उनकी प्रतिकृति बढ़ाने है । देंव के सभी चार serotypes भर ADE अच्छी तरह से अध्ययन किया गया है और वायरल titers और रोग के परिणाम को बढ़ाने के लिए प्रदर्शन5,6,7. में एक पिछले इन विट्रो अध्ययन में, हम ZIKV प्रतिकृति प्राथमिक मानव प्रतिरक्षा कोशिकाओं8में पूर्व मौजूदा देंव उन्मुक्ति की वजह से महत्वपूर्ण वृद्धि दिखाई है । हम भी प्रदर्शन में एक प्रासंगिक इन विट्रो विधि प्राथमिक कोशिकाओं में ZIKV प्रतिकृति को बढ़ाने के लिए देंव पूर्व मौजूदा एंटीबॉडी की क्षमता यों तो ।
प्रोटोकॉल है कि हम विकसित किया है मानव सीरम नमूने है कि TCID में देंव बेअसर के लिए परीक्षण कर रहे है का उपयोग करता है-५० या पट्टिका कमी बेअसर परीक्षण (PRNT) परख, जैविक रूप से प्रासंगिक कोशिकाओं या कोशिकाओं है कि ZIKV संक्रमित कर सकते है ऊतकों से व्युत्पंन में ZIKV के साथ ।
Protocol
Representative Results
Discussion
पार देंव एंटीबॉडी के अंय देंव serotypes के ADE के लिए अग्रणी की जेट एक प्रभावी वैक्सीन11के विकास में बाधा है । ZIKV एक ही परिवार के अंतर्गत आता है, Flaviviridae, और अंय flaviviruses के साथ एक काफी समरूपता है, विशेष रूप से<sup class="x…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम उदारता से 1R21AI129881-01 (T.M.C.), शुरू से धन राष्ट्रीय उभरते संक्रामक रोगों प्रयोगशालाओं, और बोस्टन चिकित्सा विश्वविद्यालय के स्कूल द्वारा समर्थित किया गया ।
Materials
| Fetal Bovine Serum | GEMINI | 100-106 | |
| iCycler | BioRad | 785BR02188 | Model No. CFX96 Optics Module |
| Microfuge 18 Centrifuge | Beckman Coulter | 367160 | |
| Nanodrop-1000 | Thermoscientific | 1072 | |
| Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit | Qiagen | 204154 | Used for 1 step RT-qPCR |
| RNeasy RNA Isolation Kit | Qiagen | 74106 | Used for RNA extraction |
| RPMI-medium | Gibco | 11875093 |
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