Análise quantitativa da composição celular em lesões ateroscleróticas avançadas de ratos de rastreamento de linhagem celular músculo liso

Sidney Mahan; Mingjun Liu; Richard  A. Baylis; Delphine Gomez

doi:10.3791/59139

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Artigo de método

Análise quantitativa da composição celular em lesões ateroscleróticas avançadas de ratos de rastreamento de linhagem celular músculo liso

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DOI:

10.3791/59139

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20 de fevereiro de 2019

Sidney Mahan¹ , Mingjun Liu¹ , Richard A. Baylis²^,³ , Delphine Gomez¹^,⁴

¹Heart, Lung, Blood and Vascular Medicine Institute, University of Pittsburgh, ²Robert M. Berne Cardiovascular Research Center, University of Virginia, ³Department of Biochemistry and Molecular Genetics, University of Virginia, ⁴Division of Cardiology, University of Pittsburgh School of Medicine

Neste artigo

Resumo

Propomos um protocolo padronizado para caracterizar a composição celular do tarde-estágio lesões ateroscleróticas murino, incluindo métodos sistemáticos de dissecação animal, incorporação de tecido, corte, coloração e análise das artérias Braquiocefálica de ratos de rastreamento do linhagem de células de músculo liso atheroprone.

Resumo

Aterosclerose continua a ser a principal causa de morte no mundo e, apesar de inúmeros estudos pré-clínicos descrevendo alvos terapêuticos promissores, intervenções romance permanecem indescritíveis. Isto é provavelmente devido, em parte, para uma dependência de modelos pré-clínicos prevenção investigando os efeitos de manipulações genéticas ou tratamentos farmacológicos sobre o desenvolvimento de aterosclerose em vez da doença estabelecida. Também, os resultados desses estudos são muitas vezes confusão devido a utilização de análises de lesão superficial e uma falta de caracterização de populações de células da lesão. Para ajudar a superar esses obstáculos translacionais, propomos um aumento da dependência em modelos de intervenção que empregam a investigação das alterações na composição celular a um nível de célula única por imunofluorescência coloração e microscopia confocal. Para este fim, descrevemos um protocolo para teste um putativo agente terapêutico em um modelo murino de intervenção, incluindo uma abordagem sistemática para dissecação animal, incorporação, corte, coloração e quantificação das lesões da artéria Braquiocefálica. Além disso, devido à diversidade fenotípica de células dentro de lesões ateroscleróticas do tarde-estágio, descrevemos a importância do uso de sistemas de rato de rastreamento de linhagem celular específica, inducible e como isso pode ser aproveitado para a caracterização imparcial da populações de células da lesão aterosclerótica. Juntos, essas estratégias podem auxiliar biólogos vasculares mais precisamente modelo intervenções terapêuticas e analisar a doença aterosclerótica e Tomara que se traduzirá em uma maior taxa de sucesso em ensaios clínicos.

Introdução

A aterosclerose é a principal causa de morbidade e mortalidade subjacente em todo o mundo a maioria de doença arterial coronariana, doenças das artérias periféricas e derrame. Estágio final de aterosclerose coronariana pode levar a complicações graves, incluindo a contabilização de infração miocárdica de quase 16% da população de mundo a mortalidade¹^,². Devido ao seu impacto devastador sobre a saúde pública, fez esforço substancial para decifrar os mecanismos de progressão da aterosclerose, bem como a conduzir e desenvolver novas estratégias terapêuticas. Ainda, a taxa de probabilidade de aprovação (LOA) de en....