विवो और इन विट्रो प्रयोगों के लिए गुशुकंग (जीएसके) ग्रंथों की तैयारी
Summary
यह लेख पशु अध्ययन और इन इन विट्रो प्रयोगों के लिए सीरम युक्त GSK granule sausukang granules के एक काम समाधान तैयार करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करता है. इस प्रोटोकॉल हर्बल दवाओं के औषधीय जांच के लिए लागू किया जा सकता है के रूप में के रूप में अच्छी तरह से दोनों vivo में और इन विट्रो प्रयोगों के लिए नुस्खे.
Abstract
पारंपरिक चीनी हर्बल दवा कई बीमारियों के इलाज में एक वैकल्पिक विधि के रूप में एक भूमिका निभाता है, जैसे रजोनिवृत्ति के बाद ऑस्टियोपोरोसिस (पीओपी)। गुसुकांग (GSK) granules, चीन में एक विपणन पर्चे, पॉप के इलाज में हड्डी की सुरक्षा त्मक प्रभाव पड़ता है. शरीर के लिए प्रशासन से पहले, एक मानक तैयारी प्रक्रिया आमतौर पर आवश्यक है, जो कच्चे जड़ी बूटियों से सक्रिय घटकों की रिहाई को बढ़ावा देने और औषधीय प्रभाव के रूप में के रूप में अच्छी तरह से चिकित्सीय परिणामों को बढ़ाने के उद्देश्य. इस अध्ययन में वीवो में और इन विट्रो प्रयोगात्मक परख में GSK granules का उपयोग करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का प्रस्ताव है. वजन, भंग, भंडारण, और प्रशासन: लेखकों पहले vivo जांच में के लिए granules के पशु उपयुक्त खुराकों की गणना करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं. दूसरा, यह आलेख माइक्रो-सीटी स्कैनिंग और हड्डी पैरामीटर की माप के लिए प्रोटोकॉल का वर्णन करता है। नमूना तैयारी, माइक्रो-सीटी मशीन चलाने के लिए प्रोटोकॉल और हड्डी मानकों के परिमाणीकरण का मूल्यांकन किया गया। तीसरा, सीरम युक्त जीएसके ग्रेन्युल्स तैयार किए जाते हैं, और दवा युक्त सीरम इन विट्रो ऑस्टियोक्लेस्टोजेनेसिस और ऑस्टियोब्लास्टोजेनेसिस के लिए निकाला जाता है। जीएसके ग्रेन्युल्स को लगातार तीन दिनों तक चूहों को प्रतिदिन दो बार प्रशासित किया जाता था। रक्त तो एकत्र किया गया था, centrifuged, निष्क्रिय, और फ़िल्टर. अंत में, सीरम पतला था और ऑस्टियोक्लेस्टोजेनेसिस और ऑस्टियोब्लास्टोजेनेसिस के प्रदर्शन के लिए इस्तेमाल किया गया था। यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल हर्बल पर्चे दवाओं के औषधीय जांच के लिए एक संदर्भ माना जा सकता है, इस तरह के granules के रूप में.
Introduction
पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) ऑस्टियोपोरोसिस के इलाज के लिए महत्वपूर्ण पूरक और वैकल्पिक तरीकों में से एक है1,2. जल का काढ़ा सूत्र3का मूल और सबसे अधिक उपयोग किया जाने वाला रूप है. हालांकि, कमियां भी मौजूद हैं: बुरा स्वाद, गाड़ी के लिए असुविधा, कम शेल्फ जीवन और असंगत प्रोटोकॉल, उपयोग ों को सीमित करने के साथ ही उपचारात्मक प्रभाव. उपर्युक्त नुकसानों से बचने के साथ-साथ बेहतर प्रभावों को आगे बढ़ाने के लिए, कणिकाओं का विकास किया गया और इसका व्यापक रूप से उपयोग किया गया है4. हालांकि कई अध्ययनों से granules से एक या एक से अधिक प्रभावी घटकों के औषधीय तंत्र का पता लगाया है5,6,7, सटीक तंत्र और अंतर्निहित औषधीय प्रक्रियाओं अभी भी कर रहे हैं की पहचान करने के लिए मुश्किल है. इसका कारण यह है कि एक कण से बहुत अधिक प्रभावी घटक एक साथ समान या विरोधित प्रभाव डाल सकतेहैं 4. इसलिए, एक मानक प्रोटोकॉल के विकास के लिए शरीर को देने से पहले granules तैयार न केवल चिकित्सीय परिणामों पर एक बड़ा प्रभाव पड़ेगा, लेकिन यह भी दोनों में विवो और इन विट्रो परख के लिए आवश्यक है.
इसके अलावा, क्लिनिक में granules के उपचारात्मक प्रभाव की पुष्टि करने के लिए मुश्किल कर रहे हैं और वास्तव में इन विट्रो या पूर्व vivo अध्ययन में उपयोग की पहचान, जो एक चुनौती पैदा करता है क्योंकि औषधीय तंत्र बहुत जटिल हैं. इसे हल करने के लिए, दवा युक्त सीरम की तैयारी पहली बार 1980 के दशक8में तशीनो द्वारा प्रस्तावित की गई थी। तब से, कई शोधकर्ताओं ने हर्बल दवा के लिए दवा युक्त सीरम लागू किया , जिसमें ग्रेन्युल्स9,10,11शामिल हैं . वर्तमान में, इन विट्रो जांच के लिए दवा युक्त सीरम का चुनाव एक रणनीति के रूप में माना जाता है जो शारीरिक स्थितियों की बारीकी से नकल करता है।
Gusukang (GSK) granules TCM के सिद्धांत के प्रकाश में नैदानिक अभ्यास के आधार पर postmenopausal ऑस्टियोपोरोसिस (पीओपी) के इलाज के लिए विकसित किए गए थे। GSK granules अंडाणु में ovariectomized (OVX) चूहों में हड्डी की हानि को रोकने, ऑस्टियोब्लास्टी हड्डी अवशोषण को बाधित, और ऑस्टियोब्लास्टिक हड्डी गठन को प्रोत्साहित4. नतीजतन, ली एट अल12 ने पाया कि GSK granules हड्डी गठन को प्रोत्साहित करने के लिए कैल्शियम रिसेप्टर की गतिविधियों को बढ़ाने के द्वारा OVX चूहों में हड्डी सुरक्षात्मक प्रभाव है. हड्डी की सुरक्षा के प्रभाव के साथ ही GSK granules के औषधीय प्रभाव की पुष्टि करने के लिए, लेखक यहाँ काम समाधान और दवा (GSK granule) युक्त सीरम की तैयारी के लिए एक विस्तृत प्रक्रिया प्रदान करते हैं. इसके अलावा, यह लेख एक OVX प्रेरित ऑस्टियोपोरोटिक माउस मॉडल और जी एस के कणिका युक्त सीरम में इन विट्रो ऑस्टियोक्लेस्टोजेनेसिस/ऑस्टियोब्लास्टोजेनेसिस में जीएसके ग्रैन्युल्स के आवेदन का वर्णन करता है।
GSK granules कई जड़ी बूटियों से बना रहे हैं13,14 और पूरी तरह से नमकीन में आसानी से भंग किया जा सकता है. इसलिए, नमकीन वाहन के रूप में कार्य करता है. शाम संचालित चूहों (शाम) और OVX चूहों कणिका प्रशासित चूहों के रूप में नमकीन की एक ही मात्रा प्रशासित किया गया. माउस के लिए जीएसके ग्रेन्युल्स की समतुल्य खुराक की गणना मीह-रूबनर समीकरण15के आधार पर की गई थी। इस समीकरण न केवल सुरक्षित खुराकों प्राप्त करने का लाभ है, लेकिन यह भी औषधीय प्रभाव की गारंटी देताहै 15. GSK granules के तीन खुराकों निम्नानुसार उत्पन्न किए गए थे: (1) GSKL: OVX + कम खुराक GSK granules, 2 ग्राम / (2) GSKM: OVX + मध्यम खुराक GSK granules, 4 ग्राम / (3) GSKH: OVX + उच्च खुराक GSK granules, 8 g/ जीएसकेएल, जीएसकेएम और जीएसकेएच समूहों में चूहे को इंट्रागैस्ट्रिक रूप से जीएसके ग्रेन्युल्स प्रशासित किया गया था। कैल्शियम कार्बोनेट (600 mg/tablet) विटामिन डी 3 (125 अंतरराष्ट्रीय इकाई/टेबलेट) के साथ, उदाहरण के लिए, एक परिपक्व और विपणन उत्पाद में (उदाहरण के लिए, ऑस्टियोपोरोसिस के इलाज और रोकथाम के लिए Caltrate [CAL]), एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था।
Protocol
Representative Results
Discussion
TCM एजेंटों के Granules योगों या नुस्खे के लिए आम विकल्पों में से एक बन गए हैं. GSK granules नैदानिक अनुभवों या TCM सिद्धांत के आधार पर कई हर्बल दवाओं से बना रहे हैं, और वे कम साइड इफेक्ट के साथ बेहतर उपचारात्मक प्रभाव लाग?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस अध्ययन चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (81804116, 81673991, 81770107, 81603643, और 81330085) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था, अभिनव टीम के लिए कार्यक्रम, विज्ञान और प्रौद्योगिकी मंत्रालय चीन के (2015RA4002 WYJ), कार्यक्रम के लिए अभिनव टीम, चीन के शिक्षा मंत्रालय (IRT1270 WYJ करने के लिए), शंघाई TCM जीर्ण रोग के चिकित्सा केंद्र (2017-01010 WYJ करने के लिए), तीन साल की कार्रवाई पारंपरिक चीनी चिकित्सा योजना के विकास में तेजी लाने के लिए (YY(2018-2020)-CCCX-3003 WYJ करने के लिए, और राष्ट्रीय प्रमुख अनुसंधान विकास परियोजनाएं (2018YFC1704302)।
Materials
| α-MEM | Hyclone laboratories |
SH30265.018 | For cell culture |
| β-Glycerophosphate | Sigma | G5422 | Osteoblastogenesis |
| Caltrate (CAL) | Wyeth | L96625 | Animal interventation |
| C57BL/6 mice | SLAC Laboratory Animal Co. Ltd. |
Random | Ainimal preparation |
| Dexamethsome | Sigma | D4902 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2438 | Cell frozen |
| Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA) | Sangon Biotech | 60-00-4 | Samples treatmnet |
| Fetal bovine serum | Gibco | FL-24562 | For cell culture |
| Gushukang granules | kangcheng companyin china | Z20003255 | Herbal prescription |
| Light microscope | Olympus BX50 | Olympus BX50 | Images for osteoclastogenesis |
| L-Ascorbic acid 2-phosphate sequinagneium slat hyclrate | Sigma | A8960-5G | Osteoblastogenesis |
| Microscope | Leica | DMI300B | Osteocast and osteoblast imagine |
| M-CSF | Peprotech | AF-300-25-10 | Osteoclastogenesis |
| Μicro-CT | Scanco Medical AG |
μCT80 radiograph microtomograph | Bone Structural analsysis |
| RANKL | Peprotech | 11682-HNCHF | Osteoclastogenesis |
| Sprague Dawley | SLAC Laboratory Animal Co. Ltd. |
Random | Blood serum collection |
| Tartrate-Resistant Acid Phosphate (TRAP) Kit | Sigma-Aldrich | 387A-1KT | TRAP staining |
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