स्टेम सेल उपचारों के बड़े पैमाने पर उत्थान के लिए विधियों और प्रोटोकॉल का सटीक प्रकटीकरण महत्वपूर्ण है। यहां, हम वसा-व्युत्पन्न पुनर्योजी कोशिकाओं को अलग करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं, जिसका उपयोग रेडिकल प्रोस्टेटेक्टोमी (आरपी) के बाद स्तंभन दोष (ईडी) के उपचार के रूप में एकल इंट्राकैवर्नस इंजेक्शन के लिए किया जाता है।
स्टेम कोशिकाओं का उपयोग पुनर्योजी चिकित्सा के भीतर कई शोध क्षेत्रों में किया जाता है क्योंकि ये उपचार रोगसूचक के बजाय उपचारात्मक हो सकते हैं। स्टेम कोशिकाओं को विभिन्न ऊतकों से प्राप्त किया जा सकता है और अलगाव के लिए कई तरीकों का वर्णन किया गया है। वसा-व्युत्पन्न पुनर्योजी कोशिकाओं (एडीआरसी) के अलगाव के लिए प्रस्तुत विधि का उपयोग कई चिकित्सीय क्षेत्रों के भीतर किया जा सकता है क्योंकि विधि एक सामान्य प्रक्रिया है और इसलिए, स्तंभन दोष (ईडी) चिकित्सा तक सीमित नहीं है। ईडी कट्टरपंथी प्रोस्टेटेक्टोमी (आरपी) के लिए एक आम और गंभीर दुष्प्रभाव है क्योंकि ईडी अक्सर पारंपरिक चिकित्सा के साथ अच्छी तरह से इलाज नहीं किया जाता है। ईडी के लिए उपचार के रूप में एडीआरसी का उपयोग करने से कॉर्पोरेट कैवर्नोसम में कोशिकाओं के एक इंजेक्शन के बाद प्रारंभिक सकारात्मक परिणामों के कारण बहुत रुचि आकर्षित हुई है। एडीआरसी के अलगाव के लिए उपयोग की जाने वाली विधि एक सरल, स्वचालित प्रक्रिया है, जो पुनरुत्पादक है और एक समान उत्पाद सुनिश्चित करती है। इसके अलावा, अलग-थलग उत्पाद की बाँझपन सुनिश्चित की जाती है क्योंकि पूरी प्रक्रिया एक बंद प्रणाली में होती है। संदूषण और संक्रमण के जोखिम को कम करना महत्वपूर्ण है क्योंकि स्टेम कोशिकाओं का उपयोग मनुष्यों में इंजेक्शन के लिए किया जाता है। पूरी प्रक्रिया 2.5-3.5 घंटे के भीतर की जा सकती है और एक वर्गीकृत प्रयोगशाला की आवश्यकता नहीं होती है जो ऑफ-साइट पर शिपिंग ऊतक की आवश्यकता को समाप्त करती है। हालांकि, प्रक्रिया में कुछ सीमाएं हैं क्योंकि अलगाव डिवाइस के लिए कार्य करने के लिए सूखा लिपोआस्पायरेट की न्यूनतम मात्रा 100 ग्राम है।
स्टेम कोशिकाओं में विभिन्न सेल प्रकारों में अंतर करने की क्षमता होती है, और वे पैराक्राइन कारकों को स्रावित करते हैं जिन्हें क्षतिग्रस्त ऊतक 1,2,3,4 में उपचार प्रक्रिया को बढ़ावा देने के लिए माना जाता है। इसलिए, वे पुनर्योजी चिकित्सा के क्षेत्र में आकर्षक हैं, क्योंकि वे एक संभावित उपचारात्मक उपचार का प्रतिनिधित्व कर सकते हैं।
रेडिकल प्रोस्टेटेक्टोमी (आरपी) कम / मध्यवर्ती जोखिम वाले स्थानीयकृत प्रोस्टेट कैंसर और 10 साल > जीवन प्रत्याशा वाले रोगियों के लिए सुनहरा उपचारात्मक उपचार है। सर्जरी का उद्देश्य कैंसर का उन्मूलन है, लेकिन इसके कई दुष्प्रभाव हैं। पोस्ट-प्रोस्टेटेक्टोमी असंयम की व्यापकता 2-60% से होती है और स्तंभन दोष (ईडी) 20-90% रोगियों द्वारा अनुभव किया जाता है। तंत्रिका-बख्शने वाली तकनीक कुछ रोगियों में एक विकल्प है (ग्लीसन स्कोर < 7, एक्स्ट्राकैप्सुलर बीमारी का कम जोखिम)5। यह तकनीक उन नसों को बचाती है जो निर्माण के लिए जिम्मेदार हैं, लेकिन भले ही यह संभव है, कई रोगी अभी भी ईडी की रिपोर्ट करते हैं।
आरपी के बाद पेनाइल पुनर्वास के लिए उपचार के विकल्पों में मुख्य रूप से पीडीई -5 इनहिबिटर, इंजेक्शन या इंस्टिलेशन थेरेपी और वैक्यूम पंपों के साथ उपचार शामिल है। पेनाइल पुनर्वास के लिए उपयोग की जाने वाली दवाएं औषधीय रूप से भिन्न होती हैं, लेकिन उनकी कार्रवाई के तंत्र में कॉर्पस कैवर्नोसम में चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं की छूट शामिल है। हालांकि, कई रोगी उपचार की विफलता का अनुभव करते हैं और कभी भी उस दवा का प्रभाव प्राप्त नहीं करते हैं जो संभोग6 को सक्षम बनाता है।
आरपी के बाद होने वाले ईडी को संरचनात्मक रूप से अपरिवर्तनीयपरिवर्तनों के कारण माना जाता है। ये परिवर्तन गुफाओं के ऊतकों में होते हैं और इसमें चिकनी मांसपेशियों और एंडोथेलियल कोशिकाओं और फाइब्रोसिस के एपोप्टोसिस शामिल होते हैं। वेनो-ऑक्लुसिव तंत्र जो निर्माण के एक केंद्रीय भाग के लिए जिम्मेदार है, परिवर्तनों से बिगड़ा हुआ है, जिसके परिणामस्वरूप लिंग7 के गरीब भरने और कठोरता होती है।
कई रोगियों की रिपोर्ट है कि ईडी वे अनुभव उनके जीवन की गुणवत्ता पर एक नकारात्मक प्रभावपड़ता है 8. वे सर्जरी के बाद अपनी यौन गतिविधि छोड़ने के लिए तैयार नहीं हैं और इसलिए, ईडी के लिए एक उपचारात्मक चिकित्सा आकर्षक है, जब पेनाइल पुनर्वास के लिए अन्य उपलब्ध उपचार विफल हो जाते हैं।
पिछले परीक्षणों में, मनुष्यों पर पशु और छोटे चरण 1 परीक्षणों सहित, स्टेम कोशिकाओं ने ईडी 2,9,10,11,12 के लिए एक वैकल्पिक उपचार के रूप में आशाजनक परिणाम दिखाए हैं। परिणाम बताते हैं कि एडीआरसी का उपयोग करना सुरक्षित है, और यह कि कार्पोरा कैवर्नोसम 2,9,10,11,12 में एक इंजेक्शन के बाद स्तंभन फ़ंक्शन में काफी सुधार हुआ है। वसा-व्युत्पन्न पुनर्योजी कोशिकाओं (एडीआरसी) को कई हार्मोन, न्यूरोट्रॉफिक- और अन्य विकास कारकों, साइटोकिन्स और संभवतः, माइक्रो-आरएनए13 की मुक्ति के माध्यम से पैराक्राइन तंत्र द्वारा ऊतक पुनर्जनन का समर्थन करने के लिए सोचा जाता है। इसके अलावा, एडीआरसी एंडोथेलियल और संवहनी मांसपेशी कोशिकाओं, उपास्थि कोशिकाओं, ओस्टियोसाइट्स और न्यूरॉन्स14,15 सहित कई परिपक्व सेल-प्रकारों में अंतर करने में सक्षम हैं। ये गुण ईडी के लिए एक स्थायी नया उपचार विकसित करने के लिए स्टेम कोशिकाओं को दिलचस्प बनाते हैं।
स्टेम कोशिकाओं को कई समूहों में विभाजित किया जाता है, मूल रूप से वे प्रारंभिक भ्रूण (भ्रूण स्टेम कोशिकाओं) से व्युत्पन्न होते हैं और वयस्क ऊतक (वयस्क स्टेम कोशिकाओं) से प्राप्त होते हैं। वयस्क स्टेम कोशिकाओं में मेसेनकाइमल स्टेम सेल (एमएससी) शामिल हैं जो मल्टीपोटेंट हैं और अस्थि मज्जा, वसा ऊतक, गर्भनाल रक्त, प्लेसेंटा और दंत लुगदी17 में पाए जा सकते हैं।
वसा ऊतक से स्टेम कोशिकाओं को अस्थि मज्जा से व्युत्पन्न स्टेम कोशिकाओं के विपरीत, पहुंच प्राप्त करना आसान होता है। अस्थि मज्जा से स्टेम कोशिकाओं की कटाई लिपोसक्शन की तुलना में एक जोखिम भरा और दर्दनाक प्रक्रिया है। अस्थि मज्जा से फसल के लिए संभव कोशिकाओं की संख्या सीमित होगी, जबकि केवल वसा ऊतक के रोगी के डिपो कोशिकाओं की संख्या के लिए सीमा निर्धारित करते हैं जिन्हें काटा जा सकता है। इसलिए, एक संतोषजनक राशि प्राप्त करने के लिए कोशिकाओं को संस्कृति करने की बाद की आवश्यकता के बिना वसा ऊतक से स्टेम कोशिकाओं की एक बड़ी मात्रा को अलग करना संभव है। वसा-व्युत्पन्न पुनर्योजी कोशिकाएं, जिन्हें अक्सर स्ट्रोमल संवहनी अंश (एसएफवी) के रूप में भी जाना जाता है, एमएससी, एंडोथेलियल कोशिकाओं, पेरिसाइट्स, प्रतिरक्षा कोशिकाओं औरपूर्वजों सहित कई सेल प्रकारों से बना होता है। ये सभी पुनर्योजी प्रक्रिया में एक भूमिका निभा सकते हैं।
वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य आरपी के बाद ईडी पर स्टेम कोशिकाओं के प्रभाव की जांच करना है, जिसमें कार्पोरा कैवर्नोसम में इंजेक्शन के बाद ताजा काटे गए वसा ऊतक से अलग किए गए ऑटोलॉगस एडीआरसी के 4 एमएल का उपयोग किया जाता है।
एडीआरसी को अलग करने के लिए प्रस्तुत प्रक्रिया केवल ईडी थेरेपी के लिए उपयोग किए जाने तक सीमित नहीं है, बल्कि उपचार और प्रयोगों के कई अन्य रूपों में उपयोग की जा सकती है। हमारे परीक्षण से पता चला है कि ऑटोलॉगस, ताजा अलग-थलग एडीआरसी उपयोग करने के लिए सुरक्षित हैं, और उपचार 12 महीने के अनुवर्ती में अच्छी तरह से सहनीय है।
प्रक्रिया का उपयोग करने से पहले कुछ विचार किए जाने हैं। इस प्रक्रिया का एक नुकसान यह है कि रोगी को लिपोसक्शन के दौरान सामान्य संज्ञाहरण के तहत होना चाहिए। लिपोसक्शन स्थानीय संज्ञाहरण के तहत प्रदर्शन करना संभव है, लेकिन पिछले परीक्षण से पता चला है कि स्थानीय एनेस्थेटिक्स और एड्रेनालाईन के संयोजन सेफाइब्रोब्लास्ट्स 20 के सेल विकास पर नकारात्मक प्रभाव पड़ सकता है। सामान्य संज्ञाहरण के तहत होने का जोखिम आमतौर पर कम होता है, लेकिन एक नकारात्मक परिणाम अभी भी देखा जाता है। इस जोखिम को ध्यान में रखा जाना चाहिए जब रोगियों को उपचार के लिए चुना जाता है। लिपोसक्शन एक सर्जिकल प्रक्रिया है और इसलिए, हमेशा जटिलताओं के जोखिम में रहेगी। अन्य सभी सर्जिकल प्रक्रियाओं के साथ, पोस्ट-ऑपरेटिव रक्तस्राव का खतरा होता है जिसके परिणामस्वरूप हेमेटोमा का गठन होता है और संक्रमण का खतरा होता है। हमारे कुछ रोगियों ने पेट की त्वचा की क्षणिक कम संवेदनशीलता की भी रिपोर्ट की थी। लिपोसक्शन के लिए एक तत्काल जटिलता रक्तस्राव है। यह ज्ञात है कि रोगियों को प्रणालीगत जटिलताओं को प्राप्त करने का जोखिम होता है जब बड़ी मात्रा में ऊतक को हटा दिया जाता है। इस प्रक्रिया में लिपोसक्शन अपेक्षाकृत छोटा था और इसलिए इसे जोखिम कारक नहीं माना जाता था।
कोशिकाओं के इंजेक्शन के लिए जटिलताओं को क्षणिक लालिमा, कोमलता और हेमेटोमा के रूप में सूचित किया जाता है।
एडीआरसी के अलगाव के लिए उपयोग किए जाने वाले डिवाइस को चुना गया था, क्योंकि सिस्टम सीई अनुमोदित है। डेनमार्क में, सीई अनुमोदित उपकरणों का उपयोग करना अनिवार्य है क्योंकि अधिकारी स्टेम कोशिकाओं के साथ उपचार को दवा परीक्षण परीक्षण के रूप में वर्गीकृत करते हैं, जब मनुष्यों में इंजेक्शन के लिए एडीआरसी का उपयोग किया जाता है।
डिवाइस के फायदे हैं जैसे कि पूरी प्रक्रिया को मानकीकृत किया जा रहा है और अत्यधिक वर्गीकृत प्रयोगशाला की आवश्यकता के बिना एक बंद बाँझ वातावरण में प्रदर्शन किया जा रहा है। इसलिए, संदूषण का खतरा कम हो जाता है। यह सुनिश्चित करता है कि प्रक्रिया समान और पुन: प्रस्तुत करने योग्य है, और यह कि अंत-उत्पाद की गुणवत्ता हमेशा हर बार समान होती है (हालांकि, यह इनपुट ऊतक की गुणवत्ता पर भी निर्भर करता है)। डिवाइस पर अलगाव करना आसान है और इसके लिए विशेष रूप से शिक्षित ऑपरेटरों की आवश्यकता नहीं है।
डिवाइस की एक सीमा यह है कि मशीन में न्यूनतम इनपुट 100 ग्राम सूखा लिपोआस्पारेट है। जैसा कि सेल प्रोसेसिंग शुरू होने से पहले लिपोसक्शन पूरी तरह से समाप्त हो गया है (और हमारे मामले में, एक अलग स्थान पर, या में नहीं) हमारे अनुभव में, इसके लिए लिपोआस्पायरेट की मात्रा को 50 एमएल सिरिंज के किसी न किसी उपाय का उपयोग करके कम से कम 125 एमएल होने की आवश्यकता होगी। अन्यथा एक जोखिम है कि मशीन के साथ आगे बढ़ने के लिए पर्याप्त सामग्री नहीं होगी। इसके अलावा, ऊपरी अंत सीमा (अधिकतम इनपुट 425 एमएल है) का उपयोग करने के परिणामस्वरूप एक बहुत लंबी अलगाव प्रक्रिया होगी।
वसा ऊतक और अस्थि मज्जा दोनों से वयस्क स्टेम कोशिकाओं में भ्रूण स्टेम कोशिकाओं की तरह आत्म-नवीकरण और भेदभाव की क्षमता होती है। हीमोपोइटिक स्टेम कोशिकाओं पर एडीआरसी के फायदों में से एक अस्थि मज्जा21,22 की तुलना में प्रति ऊतक मात्रा में 100-500 गुना अधिक उपज है, और इसलिए, एडीआरसी को सुसंस्कृत होने की आवश्यकता नहीं है। इसके अलावा, हेमोपोइटिक स्टेम कोशिकाएं वसा ऊतक की तुलना में रोगी से फसल के लिए अधिक कठिन और अधिक दर्दनाक होती हैं। कई स्थितियों में, वसा ऊतक सर्जरी के बाद सिर्फ एक अपशिष्ट उत्पाद है। एंजियोजेनेसिस के लिए उपयुक्त उच्च उपज देने के लिए स्टेम कोशिकाओं को संस्कृति करना संभव है, हालांकि ताजा अलग-थलग एडीआरसी में सुसंस्कृत23 की तुलना में उच्च एंजियोजेनिक क्षमता हो सकती है।
The authors have nothing to disclose.
इस काम की स्थापना Odense University Hospital (11/31936), The Danish Centre for Regenerative Medicine (14/50427) और डेनिश कैंसर सोसाइटी द्वारा की गई है।
Liposuction | |||
Abdominal Binder | Dale | Size depent of the patient | |
Adhessive OP-towel | Mölnlycke Health Care | 906677 | 90×75 cm |
Adrenalin 1 mg/ml | Amgros I/s | 74 44 23 | 1 ml |
Basic OP supplies | Mölnlycke Health Care | 97010873-07 | |
Carbon Steel blade 11 | Swann-Morton | ||
Chlorhixidine Ethanol | Faarborg Pharma | 5% colored | |
Disposable set Lipocollector 3 | Human Med | 670200 | |
Extension hoses | Extrudan | 5.8/8.3 mm, Ch 25, 3,5 M long | |
Gaze Rags | Barrier | 175201 | 30×45 cm |
Jelonet | Smith and Nephew Medical Ltd | 90509225 | 10 x 10 cm |
Marcaine 5 mg/ml + Adrenaline 5 micrigram | Astra Zeneca | 20 mL | |
Mesorb Bandage | Mölnlycke Health Care | 677001 | 10×13 cm |
Microlance | Becton Dickinson | 304622 | 18 G + 23 G |
Monocryl suture | Ethicon | 04:00 | |
Ringer-lactat | Fresinus Kabi | ||
Sterile gloves | Gammex | 330052065 | |
Surgical Gown | Mölnlycke Health Care | 690103-01 | |
Surgical Marker | Richard-Allan | ||
Surgical Mask | 3M | ||
Syringe | Codan Medical | 6,28,402 | 50/60 ml cath tip |
Syringe | Becton Dickinson | 700016181 | 1 ml |
WAL- Applikator for cannulae 25/30 cm | Human Med | REF 500001 | |
Isolation of ADRC's | |||
1 ml Syringe | Becton Dickinson | REF 303172 | |
3 way stopcock | One Med | REF 10554-01 | |
Adhesive OP-towel | Mölnlycke Health Care AB | REF 906677 | 90×75 cm |
Cytori Celution 800IV device | Cytori | ||
Desinfection swaps | Mediq Danmark | 3340010 | |
Microlance | Becton Dickinson | 25G (0,5*25 mm) | |
Nitril Gloves | Abena | Powder free | |
OR drape Sheet, 2 layers | Lohmann & Rauscher | REF 33005 | |
Ringers Lactate | Fresinus Kabi | 06756 (DK) | |
Sterile gloves | |||
Sterile gown | |||
Supplemental kit for Cytori Celution 800IV devise | Cytori | ||
Termometer | Thomas Scientific | traceable | |
Injection of ADRC's | |||
Aperture drape | One Med | REF1565-01 | 75*90 cm |
Desinfection swap | Mediq Danmark | 3340010 | |
Pean | Leibinger | 32-01257 | |
Silicone Vessel Loop | Purple Surgical | REF PS3203 | |
Sterile gloves | Sempermed | Or Use your favorite |