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Articolo metodologico

Tomografia a coerenza ottica 3D automatizzata per chiarire la morfogenesi del biofilm su grandi scale spaziali

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DOI:

10.3791/59356

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21 agosto 2019

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In questo articolo

Sommario

I biofilm microbici formano architetture complesse a interfasi e si sviluppano in modelli spaziali altamente dipendenti dalla scala. Qui, introduciamo un sistema sperimentale (hard e software) per l'acquisizione automatizzata di set di dati di tomografia a coerenza ottica 3D (OCT). Questo set di strumenti consente la caratterizzazione non invasiva e multiscala della morfogenesi dei biofilm nello spazio e nel tempo.

Abstract

I biofilm sono uno stile di vita microbico di maggior successo e prevalgono in una moltitudine di ambienti ambientali e ingegnerizzati. Comprendere la morfogenesi dei biofilm, cioè la diversificazione strutturale dei biofilm durante l'assemblaggio della comunità, rappresenta una sfida notevole su scale spaziali e temporali. Qui presentiamo un sistema automatizzato di imaging di biofilm basato sulla tomografia a coerenza ottica (OCT). L'OCT è una tecnica di imaging emergente nella ricerca sui biofilm. Tuttavia, la quantità di dati che attualmente possono essere acquisiti ed elaborati ostacola l'inferenza statistica di modelli su larga scala nella morfologia dei biofilm. Il sistema di imaging automatizzato dello OCT consente di coprire ampie scale temporali spaziali ed estese della crescita dei biofilm. Combina un sistema OCT disponibile in commercio con una piattaforma di posizionamento robotico e una suite di soluzioni software per controllare il posizionamento della sonda di scansione dello Strumento di personalizzazione di Office, nonché l'acquisizione e l'elaborazione di set di dati di imaging di biofilm 3D. Questa configurazione consente il monitoraggio automatizzato in situ e non invasivo dello sviluppo di biofilm e può essere ulteriormente sviluppata per associare l'imaging dello OCT a macrofotografia e alla profilatura dei microsensori.

Introduzione

I biofilm sono un adattamento di stile di vita microbico di grande successo e queste comunità di microrganismi associate a matrici associate a matrici e associate a matrici dominano la vita microbica in ambienti naturali e industriali1,2. Lì, i biofilm formano architetture complesse, comegli streamer allungati 3, le increspature4 o i tappi simili a funghi5 con importanti conseguenze per la crescita del biofilm, la stabilità strutturale e la resistenza allo stress6. Mentre molto sulla differenziazione strutturale dei....

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Protocollo

1. Configurazione del dispositivo di posizionamento

  1. Collegare il dispositivo di posizionamento a una scheda microcontrollore, seguendo le istruzioni in https://github.com/grbl/grbl/wiki/Connecting-Grbl.
  2. Collegare il microcontrollore a un computer a scheda singola con connessione internet tramite un cavo USB e installare il server GRBL come descritto nel https://gitlab.com/FlumeAutomation/GRBL_Server.git. Ora il dispositivo di posizionamento dovrebbe essere navigabile da una pagina web ospitata in http://IP:5020/. In alternativa, è possibile navigare nel dispositivo di posizionamento con uno script Python, come illustrato nella prima parte ....

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Risultati

Dimostriamo la funzionalità del sistema automatico di imaging OCT utilizzando un esperimento di flume progettato per studiare la morfogenesi spatio-temporale dei biofilm fototrofici. Una geometria gradualmente restringimento dei flumi indusse gradienti in velocità di flusso lungo il centro del flume (vedi riferimento17).  Lo sviluppo temporale e la differenziazione strutturale del biofilm sono stati monitorati per 18 giorni con l'obiettivo di comprendere meglio gli effetti delle condizioni idrodinam.......

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Discussione

L'imaging dello OCT è adatto per risolvere le strutture nella gamma dei micrometri con un FOV di diversi millimetri quadrati. È quindi un potente strumento per la ricerca sui biofilm10,18. Tuttavia, lo OCT è attualmente limitato a un'area discansione massima di 100 - 256 mm 2, mentre i modelli strutturali dei biofilm spesso superano questa scala spaziale19, soprattutto quando la differenziazione morfologica è guidata da gradient.......

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Dichiarazioni

La sediglia è stata impiegata presso Thorlabs Inc.

Ringraziamenti

Ringraziamo Mauricio Aguirre Morales per il suo contributo allo sviluppo di questo sistema.  Il sostegno finanziario è stato fornito dalla Fondazione nazionale svizzera per la scienza a T.J.B.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Sonda OCTThorlabsGAN210C1dispositivo di imaging OCT
Lente di scansione OCTThorlabsOCT-LK3-BB
Adattatore ad immersioneThorlabs OCT-IMM3-SP1
Stepcraft 840 CKSTEPCRAFTNAdispositivo di posizionamento
microcontrolloreArduino Uno R3NA
Fotocamera a scheda singolaRaspberry PINA
fotocamera Canon EOS 7D Mark IINA
obiettivo della fotocameraCanon MACRO EFS 35 mmNA

Riferimenti

  1. Flemming, H. C., Wingender, J. The biofilm matrix. Nature reviews. Microbiology. 8, 623-633 (2010).
  2. Flemming, H. -C., et al. Biofilms: an emergent form of bacterial life. Nature reviews. Microbiology. 14, 563(2016).
  3. Stoodley, P., Lewandowski, Z., Boyle, J. D., Lappin-Scott....

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Ristampe e permessi

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