Les effets trans et multigénérationnels des produits chimiques persistants sont essentiels pour juger de leurs conséquences à long terme sur l'environnement et sur la santé humaine. Nous fournissons de nouvelles méthodes détaillées pour étudier les effets trans et multigénérationnels en utilisant le nématode caenorhabditis elegans.
Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.
Article de méthode
Utilisation de Caenorhabditis elegans pour étudier les effets trans et multigénérationnels des substances toxiques
Dans cet article
Résumé
Résumé
L'information sur les toxicités des produits chimiques est essentielle à leur application et à la gestion des déchets. Pour les produits chimiques à faibles concentrations, les effets à long terme sont très importants pour juger de leurs conséquences sur l'environnement et sur la santé humaine. En démontrant des influences à long terme, les effets des produits chimiques au fil des générations dans des études récentes fournissent de nouvelles perspectives. Ici, nous décrivons des protocoles pour étudier des effets des produits chimiques sur plusieurs générations utilisant le nématode libre Caenorhabditis elegans. Deux aspects sont présentés : (1) les études d'effets multigénérationnels (TG) et (2) multigénérationnelles, dont cette dernière est séparée des études d'effet multigénérationnels (MGE) et multigénérationnelles résiduelles (MGR). L'étude sur l'effet TG est robuste dans un but simple pour déterminer si l'exposition chimique aux parents peut entraîner des conséquences résiduelles sur la progéniture. Une fois que les effets sont mesurés sur les parents, des solutions d'hypochlorite de sodium sont utilisées pour tuer les parents et garder la progéniture afin de faciliter la mesure de l'effet sur la progéniture. L'étude sur l'effet TG est utilisée pour déterminer si la progéniture est affectée lorsque son parent est exposé aux polluants. L'étude d'effet MGE et MGR est systématique pour déterminer si l'exposition générationnelle continue peut entraîner des réponses adaptatives chez les enfants au fil des générations. Le ramassage et le transfert soigneux sont utilisés pour distinguer les générations afin de faciliter la mesure de l'effet sur chaque génération. Nous avons également combiné des protocoles pour mesurer le comportement de locomotion, la reproduction, la durée de vie, les changements biochimiques et d'expression génique. Quelques exemples d'expériences sont également présentés pour illustrer les études d'effets trans et multigénérationnels.
Introduction
L'application et la gestion des déchets de produits chimiques dépendent fortement de l'information sur leurs effets à certaines concentrations. Notamment, le temps est un autre élément essentiel entre les effets et les concentrations. C'est-à-dire que les produits chimiques, en particulier ceux à faibles concentrations dans les environnements réels, ont besoin de temps pour provoquer des effets mesurables1. Par conséquent, les chercheurs organisent différentes longueurs de la durée d'exposition dans les expériences animales, et couvrent même l'ensemble du cycle de vie. Par exemple, les souris ont été exposées à la nicotine pendant 30, 90 ou 180....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Protocole
1. Culture E. coli OP50
- Préparer une solution d'hydroxyde de sodium de 1 M en dissolvant 4 g d'hydroxyde de sodium dans 100 ml d'eau.
- Préparer le bouillon de lysogénie (LB) moyen en dissolvant 10 g de tryptone, 5 g d'extrait de levure et 10 g de chlorure de sodium avec 1 L d'eau ultrapure dans un flacon conique de 1 L. Ajuster le pH à 7,0 avec une solution d'hydroxyde de sodium de 1 M.
- Aliquot le milieu liquide LB de l'étape1.2 à 20 flacons coniques (volume maximal admissible: 100 ml) avec 50 ml milieu dans chaque. Couvrir les flacons coniques de papier kraft.
- Stériliser le milieu liquide LB à 121 oC et 0,105 MPa pendan....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Résultats
Ici, nous décrivons des protocoles pour étudier les effets des produits chimiques au cours des générations utilisant C. elegans dans les études d'effet transgénérationnel (TG), multigénérationnelle (MGE) et multigénérationnelle résiduelle (MGR). Nos propres résultats de recherche sont présentés comme des exemples. Une étude présente les effets TG des métaux lourds sur le comportement de locomotion3. Les deux autres études présentent les effets MGE et MGR d.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Discussion
Afin de mener avec succès le protocole décrit, les suggestions suivantes doivent être prises en considération. Effectuer l'ensemble des opérations expérimentales dans un environnement stérile. Une mauvaise exploitation peut entraîner la contamination des souches d'E. coli, par exemple, les champignons et les acariens peuvent entraver la croissance normale de C. elegans et donc affecter les résultats expérimentaux. Dans la section décrivant la culture de C. elegans, observez l'échelle de croiss.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Déclarations de divulgation
Les auteurs sont reconnaissants pour le soutien financier du National Science and Technology Major Project for Water Pollution Control and Treatment (2017ZX07201004) et du Programme international de coopération en sciences et technologies de la Chine (No. 2016YFE0123700).
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| ; poudre de gélose | OXOID, Thermo Fisher Scientific, | Royaume-Uni 9002-18-0 | |
| 79nnHT Système de PCR rapide en temps réel | ; Biosystèmes appliqués ; | ||
| Microplaque stérile à 96 puits | Costar ? Corning? Amérique | ||
| Stérilisateur autoclave | Tomy, Tomy Digital Biology, Japon | ||
| Armoire de biosécurité | LongYue, Shanghai longyue instrument equipment co. Ltd, Chine | ||
| chlorure de calcium | Sinopharm chemical reagent company Ltd, Chine | 10043-52-4 | |
| centrifugeuse ; 5417R | Eppendorf, Ai Bende (Shanghai) International Trade Co., Ltd, Allemagne | ||
| Tubes à centrifuger | Axygen, Aixjin biotechnology (Hangzhou) co. Ltd, Amérique | ||
| cholestérol | Sinopharm société de réactifs chimiques Ltd, Chine | 57-88-5 | |
| Diméthylsulfoxyde VETEC | , Sigmar aldrich (Shanghai) trading co. Ltd, Amérique | 67-68-5 | |
| hydrogénophosphate disodique | Sinopharm chemical reagent company Ltd, Chine | 7558-79-4 | |
| éthanol | Sinopharm chemical reagent company Ltd, Chine | 64-17-5 | |
| Filtre | Thermo, Thermo Fisher Scientific, Amérique | ||
| incubateur | YiHeng17, Shanghai yiheng scientific instrument co. Ltd, Chine | ||
| boucle d’inoculationK2HPO4&bull ; 3H2O | Sinopharm chemical reagent company Ltd, Chine | 16788-57-1 | |
| papier | |||
| Mcroplate Reader | Boitek, Boten apparatus co. Ltd, Amérique | ||
| MgSO4&bull ; 7H2O | Sinopharm chemical reagent company Ltd, Chine | 10034-99-8 | |
| Microscopes XTL-BM-9TD | BM, Shanghai BM optical instruments manufacturing co. Ltd, Chine ; | ||
| Boîtes | |||
| Pipette | Eppendorf, Ai Bende (Shanghai) International Trade Co., Ltd, Allemagne | ||
| Chlorure de potassium | Sinopharm chemical reagent company Ltd, Chine | 7447-40-7 | |
| dihydrogénophosphate de potassium | Sinopharm chemical reagent company Ltd, Chine | 7778-77-0 | |
| Qiagen RNeasy kits | Qiagen Inc., Valencia, CA, États-Unis | ||
| QuantiTect SYBR Green RT-PCR | kits Qiagen Inc., Valencia, CA, États-Unis | ||
| RevertAid First Strand cDNDNA Synthesis Kit | Thermo Scientific, Wilmington, DE, États-Unis | ||
| Chlorure de sodium | Sinopharm chemical reagent company Ltd, Chine | 7647-14-5 | |
| hydroxyde de | sodiumSinopharm chemical reagent company Ltd, Chine | 1310-73-2 | |
| solution d’hypochlorite de sodium | Aladdin, Shanghai Aladdin biochemical technology co. Ltd, Chine | 7681-52-9 | |
| tryptone | OXOID, Thermo Fisher Scientific, | Royaume-Uni 73049-73-7 | |
| extrait de levure | OXOID, Thermo Fisher Scientific, Royaume-Uni | 119-44-8 |
Références
- Yu, Z., Zhang, J., Hou, M. The time-dependent stimulation of sodium halide salts on redox reactants, energy supply and luminescence in Vibrio fischeri. Journal of Hazardous Materials. 342, 429-435 (2018).
- Li, W., et al.
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Réimpressions et autorisations
