Os adipocytes existem em depósitos discretos e têm papéis diversos dentro de seus microambientes originais. Como as diferenças regionais no caráter e na função do adipócitos são descobertas, a identificação estandardizada e a isolação dos depósitos são cruciais para o avanço do campo. Nisto, nós apresentamos um protocolo detalhado para a excisão de vários depósitos adiposos do rato.
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Artigo de método
Identificação e dissecção de diversos depósitos de Adipose de camundongo
Neste artigo
Resumo
Resumo
Os tecidos adiposos são órgãos complexos com uma ampla gama de funções, incluindo armazenamento e mobilização de energia em resposta às necessidades locais e globais, desacoplamento do metabolismo para gerar calor, e secreção de adipocinas para regular a homeostase de corpo inteiro e respostas imunes. A pesquisa emergente está identificando diferenças regionais importantes nos perfis desenvolventes, moleculars, e funcionais dos adipócitos situados em depósitos discretos durante todo o corpo. As propriedades diferentes dos depósitos são medicamente relevantes desde que as doenças metabólicas demonstram frequentemente efeitos depósito-específicos. Este protocolo fornecerá investigadores com um guia anatômico detalhado do Atlas e da dissecção para a identificação e a excisão reprodutíveis e exatas de vários tecidos adiposos do rato. A dissecção padronizada de depósitos adiposos discretos permitirá comparações detalhadas de suas características moleculares e metabólicas e contribuições para estados patológicos locais e sistêmicos várias condições nutricionais e ambientais.
Introdução
Os tecidos adiposos desempenham papéis críticos na homeostase do corpo inteiro, incluindo armazenamento e liberação de energia em resposta às necessidades locais e globais, termorregulação e secreção de adipocinas para regular o equilíbrio energético, metabolismo e respostas imunes1 , 2. os adipócitos são distribuídos por todo o corpo em depósitos discretos, e em alguns casos servem papéis especializados dentro de seus microambientes3,4,5. Historicamente, o estudo do tecido adiposo centrou-se no tecido adiposo branco ....
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Protocolo
Todos os procedimentos animais são realizados com a aprovação do Comitê institucional de cuidados e uso de animais (IACUC) da Universidade de Michigan.
1. eutanização
Nota: Para efeitos deste protocolo de vídeo, são utilizados 4 a 6 meses de idade C57BL/6J ratos.
- Coloque o rato numa câmara de vaporizador isoflurano e ajuste o caudal de isoflurano para 5% ou superior. Continue a exposição ao isoflurano até um minuto após a respiração parar. Em seguida, retire o rato da câmara do vaporizador e confirme a eutanásia utilizando uma medida secundária aprovada.
Nota: As med....
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Resultados
A identificação e a isolação bem sucedidas de vários depósitos adiposos do rato podem ser conseguidas usando o protocolo descrito acima. As localizações anatômicas brutas dos depósitos subcutâneo (A, E-F), marrom (B), visceral (C, D, G-J) e poplíteo (K) são mostradas na Figura 2.
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Discussão
Como a importância das diversas características moleculares e funcionais de clusters de adipócitos discretos é cada vez mais reconhecida, é crucial que os investigadores dentro do campo identifiquem uniformemente e distribuam depósitos adiposos para análises complementares. Até o momento, existem poucos protocolos para localização padronizada e isolamento da ampla gama de depósitos adiposos do mouse. Os métodos previamente publicados são centrados primeiramente em um ou dois depósitos e faltam os detalhes necessários par.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
O.A.M. é apoiado por concessões de NIH DK062876 e DK092759; D.P.B. é apoiado pelo programa de treinamento de cientista médico da Universidade de Michigan (T32GM007863), programa de treinamento da Universidade de Michigan em organogênese (T32HD007605), Universidade de Michigan Rackham mérito Fellowship, e Tylenol futuro cuidados Fellowship.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Formalina tamponada neutra a 10% | Fisher Scientific | 22-110-869 | |
| Placas de 24 poços, | CLS3738 | Sigma-Aldrich | |
| com etanol a 70% (diluído a partir de 95%) | Fisher Scientific | 04-355-226 | |
| Pinça de dissecação com pontas curvas | VWR | 89259-946 | |
| Panela de dissecação | Carolina Biological Supply Company | ||
| Tesoura de dissecação (ponta afiada/romba) | VWR | 82027-588 | |
| Esponjas de gaze | Vitality Medical | 2634 | Curity Esponja de gaze de 4 polegadas x 4 polegadas, 12 camadas |
| Handi-Pins para dissecação | Carolina Biological Supply Company | 629132 | |
| Iris tesoura (reta) | VWR | 470018-890 | |
| Isoflurano | VetOne | ||
| Bisturi | VWR | 100499-578 | Cabo de bisturi de penas com lâmina, descartável |
Referências
- Cinti, S. The adipose organ at a glance. Disease Models & Mechanisms. 5 (5), 588-594 (2012).
- Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. What we talk about when we talk about fat. Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).
- Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A.
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Reimpressões e permissões
