כאן, אנו מציגים פרוטוקולים של culturing ברצועה חניכיים האדם (PDL) תא spheroids על ידי סרטים chitosan. תרבות של הספרואידים תלת ממדיים (3D) הסלולר מספק אלטרנטיבה של מערכת התרבות הקונבנציונלית פוליסטירן מרקמת רקמה (TCPS).
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
היווצרות של חניכיים האדם ברצועה הספרואידים תא על סרטים Chitosan
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
ברצועה חניכיים (PDL) תאים להחזיק הבטחה גדולה להתחדשות רקמת חניכיים. באופן מקובל, תאים PDL הם מתורבתים על דו מימדי (2D) מצעים כגון פוליסטירן מעור הרקמה (TCPS). עם זאת, שינויים אופייניים של תאים PDL נצפו במהלך תרבות מבחנה. תופעה זו היא כנראה משום שהדו הדו שונה ממיקרו-vivo תלת-מימדי (3D). בהשוואה לתאים בעלי מצעים דו-ממדיים, תאים שגדלו בתצוגה מיקרוסביבתית תלת-ממדית דומים יותר לתאים vivo. לכן, מודלים של תרבית תאים תלת-ממדיים מספקים חלופה מבטיחה לתרבות התאים הקונבנציונלית של 2D מונאולייר. כדי לשפר את המסורת המקובלת של התרבות התאית, פיתחנו לאחרונה שיטת התרבות התא 3D, אשר מבוססת על היווצרות ספרואיד של תאים PDL על סרטים chitosan. כאן, אנו מציגים פרוטוקולים מפורטים של התרבות התאית המבוססת על סרטים chitosan. מערכת התרבות התלת-ממדית של PDL תאית הסלולר להתגבר על חלק מן המגבלות הקשורות תרבות התאים 2D קונבנציונאלי מונאולייר, ובכך עשוי להיות מתאים להפקת תאים PDL עם יעילות טיפולית משופרת עבור התחדשות רקמות העתיד חניכיים.
מבוא
חניכיים, מאותחל בעיקר על ידי רובד דנטלי1, מאופיין בנזק של רקמות חניכיים כולל ברצועה חניכיים (PDL), מכתשיים העצם, ו המלט. הטיפולים הנוכחיים עבור חניכיים מצליחים בדרך כלל במניעת ההתקדמות של המחלה הפעילה, אבל התחדשות של רקמות חניכיים איבד נשאר אתגר קליני. לאחרונה, התקדמות חשובה נעשתה בגישות מבוססות תא עבור התחדשות רקמות חניכיים כדי להתגבר על החסרונות של הטיפולים הנוכחיים2,3,4.
סקירה שיטתית הקודם שלנו חשף כי תאים PDL הראה פוטנציאל גדול התחדשות חניכיים5. באופן מקובל, תאים PDL הם מתורבתים על דו מימדי (2D) מ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
פרוטוקול המחקר אושר על ידי ועדת האתיקה של בית הספר ובית החולים לרפואת שיניים, אוניברסיטת טונגג'י. כל המטופלים סיפקו הסכמה מושכלת בכתב.
1. בידוד תא PDL
- להפוך בינונית התפשטות עבור התרבות של תאים PDL: α-הגברת מדיום שיושלם עם 10% FCS ו 100 U/mL עט/דלקת.
- הכן מכולה עם קרח כדי להעביר טוחנות שלישי מבודדים.
- לעקר כלי ניתוח באמצעות החיטוי.
- לחלץ מטוחנות שלישי השפיעו על האדם הרגיל ממבוגרים (18-28 שנים של גיל) במרפאת השיניים של בית הספר ובית החולים לרפואת שיניים, אוניברסיטת טונגג'י.
- מניחים את הטוחנות השלישי לתוך המדיום ההתפשטות ומעבירים למעבדה ב -4 ° c.
- מניחים את השן מחולץ בצלחת פטרי 100 מ"מ סטר....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
שימוש בפרוטוקול הנוכחי, מזהי תאים PDL הקיימים בהצלחה נוצרו. איור 1 הראה כי תאים מושעה או spheroids במקום תאים מחוברים נצפו בעיקר על סרטים chitosan. עבור צפיפות הזריעה של 0.5 x 104 תאים/ס"מ2, תאים pdl מצורפים נמצאו מדי פעם ביום 1 ו-3, ו-pdl החוליות של התא לא נצפו לעתים רחוקות. להיפך, עבור צפיפות הזריעה של 3 x 104 ו-6 x 104 תאים/cm2, גדלים שונים של תאים PDL spheroids נמצאו מאז יום 1. PDL תא ספרואיד היווצרות.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
המחקר הנוכחי הציג מערכת התרבות תא תלת-ממד כדי להתגבר על מספר מגבלות הקשורות לתרבות התא 2D קונבנציונאלי מונאולייר. על פי הפרוטוקול, מזהי הסלולר PDL נוצרו בהצלחה על ידי תאי culturing על סרטים chitosan. המחקר הקודם שלנו דיווח כי היווצרות ספרואיד הגדילה את התחדשות עצמית ויכולות הבידול אוסטגניים של תאים PDL14. במקום להשתמש באנזים כדי לקצור תאים מ TCPS משתמשים בתאי משתמש PDL ניתן לקצור מסרטים chitosan על ידי פשוט ללטף את המדיום כמה פעמים14. כך ניתן לשמור היטב על הצמתים של ECM ושל.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
. למחברים אין מה לגלות
תודות
מחקר זה היה בחסות הלאומי המדע הטבעי הקרן של סין (NSFC 81700978), קרנות המחקר היסודי עבור האוניברסיטאות המרכזיות (1504219050), הקרן המדע הטבעי של שנגחאי (17ZR1432800), ושנגחאי פרויקט חיפושי רפואי ( 17411972600).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| α-MEM | Gibco | 11900-073 | |
| חומצה אצטית | Sigma-Aldrich | 64197 | |
| בקבוק תרבית תאים 25 ס"מ2 | 430639 | ||
| תרבית תאים קורנינג 75 ס"מ2 | קורנינג | 430641 | |
| צ'יטוזן | הפה רפואי Chitosan GmbH | / | משקל מולקולרי 500 kDa, דרגת דה-אצטילציה 85% |
| FCS | Gibco | 26140-079 | |
| ערכת כדאיות חיה/מתה/ציטוטוקסיות | מולקולרית בדיקות | L3224 | |
| NaOH | סיגמא-אולדריץ' | 1310732 | |
| PBS | KeyGen Biotech | ||
| KGB5001 עט/סטרפטוקוס | Gibco | 15140-122 | |
| טריפסין/EDTA | KeyGen ביוטק | ||
| KGM25200 צינור צנטריפוגה חרוטי 15 מ"ל | קורנינג | 430790 | |
| צלחת 24 בארות | קורנינג | 3524 |
מקורות
- Albandar, J. M. Epidemiology and risk factors of periodontal diseases. Dental Clinics of North America. 49 (3), 517-532 (2005).
- Bartold, P. M., McCulloch, C. A., Narayanan, A. S., Pitaru, S. Tissue engineering: a new paradigm for periodo....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
