移植片対宿主病は、同種骨髄移植後の主要な合併症である。樹状細胞は、移植片対宿主病の病因において重要な役割を果たす。現在の記事では、移植片対宿主病の発症における樹状細胞の役割と移植片対白血病効果を調査するための新しい骨髄移植プラットフォームについて説明しています。
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方法論記事
移植片対宿主病における樹状細胞の役割を調べる骨髄移植プラットフォーム
* These authors contributed equally
この記事について
サマリー
要約
同種骨髄移植(BMT)は、腫瘍を根絶するための移植片対白血病(GVL)効果による血球悪性腫瘍に対する効果的な治療法です。しかし、その適用は、移植片対宿主病(GVHD)、BMTの主要な合併症の開発によって制限される。GVHDは、ドナー移植片のT細胞がレシピエント細胞によって発現する認識allo抗原を誘発し、レシピエントの健康組織に対して望ましくない免疫学的攻撃を仕掛ける。したがって、従来の治療法は、ドナーT細胞のアロロ活性を抑制するように設計されている。しかし、これらのアプローチは、実質的に、レシピエントの生存が改善されないようにGVL効果を損なう。したがって、BMT、GVL、およびGVHDに対する治療アプローチの効果を理解することが不可欠です。ドナーT細胞を刺激する抗原提示およびサイトカイン分泌能力のために、レシピエント樹状細胞(DC)はGVHDの誘導において重要な役割を果たす。したがって、受信者 DC をターゲットにすることは、GVHD を制御するための潜在的なアプローチになります。この研究は、ホストDCが移植後のGVHおよびGVL応答をどのように調節するかを調査するための新しいBMTプラットフォームの説明を提供する。また、移植後のGVHDおよびGVLの生物学を研究するための効果的なBMTモデルも提示される。
概要
同種造血幹細胞移植(BMT)は、移植片対白血病(GVL)効果3を介して血球悪性腫瘍11、22を治療するための有効な治療法である。しかし、ドナーリンパ球は常にレシピエント組織に対して望ましくない免疫学的攻撃を仕掛け、移植片対宿主病(GVHD)4と呼ばれるプロセスである。4
GVHDのマウスモデルはGVHDの生物学とGVL応答5を研究するための効果的なツールです。マウスは費用対効果の高い研究動物モデルです。彼らは小さく、効率的に開発の初期段階で分子や生物学的製剤を使用しています 6.マウスは遺伝的に適切に定義されているため、遺伝子操作研究に理想的な研究動物であり、生物学的経路およびメカニズム6を研究するのに理想的である。GVHDのいくつかのマウス主要組織適合性複合体 (MHC) MHC 不一致モデルは、C57BL/6 (H2b)から BALB/c (H2d)および FVB (H2q)→C57BL/6 (H2b)
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プロトコル
実験手順は、セントラルフロリダ大学の施設動物のケアと使用委員会によって承認されました.
1. GVHD誘導
注:同種骨髄(BM)細胞移植(ステップ1.2)は、照射後24時間以内に行われる。以下に説明するすべての手順は、無菌環境で行われます。組織培養フードで手順を実行し、濾過試薬を使用します。
- 0 日目: 受け取ったマウスを準備します。
- バルB/cバックグラウンド(CD45.2+ H2kd+)上の雌の野生型(WT)マウスを使用し、10-12週齢をレシピエントとして使用します。
- TBI の前に、受取人の耳札と重み付け。次に、照射チャンバーに最大11匹のマウスを入れ、照射器に保管します。10-15分間、700 cGyの単回投与で照射します。
- 照射された動物をケージに戻し、移植前に病原体のない施設に収容してください。
注:レシピエントの最小体重は約20 gである必要があります。
- 1日目:ドナーマウスからT細胞枯渇骨髄(TCD-BM)を調製する。
- CD45.1/Ly5.1 C57BL/6マウスをCO2窒息で安楽死させ、意識不明になるまで2-3分待ちます。必要に応じて二次安楽死として子宮頸部脱臼を行う。
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結果
主要なMHC不一致B6(H2kbb)-BALB/C(H2kd)モデルは、移植後のGVHDの発達に密接に対応した(図2)。Cookeららによって以前に確立された6つのGVHD臨床徴候はすべて、WT-B6 T細胞を移植したレシピでは起こったが、Bm単独で移植されたレシピエント(ステップ1.5)では起こらなかった、GVHD陰性基を表す。GVHD の開発には、このモデルの 2 つのフェーズがあります。まず、重症度のピークは移植後約11日、続いて臨床スコアおよび体重回復の16日までの減少である。この段階では、照射誘発性炎症および生着症候群などのいくつかのメカニズムが病原性およびGVHDを駆動する。レシピエントは移植後約30〜40日でGVHDに均一に屈する。
BMの少なくとも85%がDCに分化した(
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ディスカッション
特定の個体に適した幹細胞の使用は、進行癌および耐性癌18を治療するための効果的なアプローチである。しかし、低分子医薬品は、長い間、パーソナライズされたがん治療の主な焦点であり続けています。一方、細胞療法では、ドナーと宿主との間の多数の相互作用が、BMT1後のGVHDの発達など、治療結果に決定的に影響を1与えることができる。
BMTの主要なMHCミスマッチマウスモデルは、GVHDの生物学を理解し、その治療における薬物の有効性をテストする上で貴重なツールです。その中で、C57BL/6(H2b)からBALB/c(H2d)およびFVB(H2 q)→C57BL/6(H2qb)は、確立されたモデル5,77である。5これらのモデルは、単回投与(BALB/c)または分画線(C57BL/6)として骨髄化.......
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開示事項
著者には利益相反はありません。
謝辞
この研究は、セントラルフロリダ大学医学部のスタートアップ助成金(HN)、ピッツバーグ大学医療センターヒルマンがんセンターのスタートアップ助成金(HL)、米国NIHグラント#1P20CA210300-01、ベトナム保健省の助成#4694/QD-BYT(PTH)によってサポートされています。研究のための資料を提供してくれたサウスカロライナ医科大学の徐中宇博士に感謝します。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 0.5 M EDTA pH 8.0 100ML | Fisher Scientific | BP2482100 | MACS バッファー |
| 10X PBS Fisher | Scientific | BP3994 | MACS バッファー |
| A20 B 細胞リンパ腫 | セントラルフロリダ大学 | 社内 | GVL 実験 |
| ACC1 fl/fl | Jackson Lab | 30954 | GVL 実験 |
| ACC1 fl/fl CD4cre | セントラルフロリダ大学 | GVL実験 | |
| 抗ビオチンマイクロビーズ | Miltenyi Biotec | 130-090-485 | T細胞濃縮 |
| 抗ヒト/マウスCD45R (B220) | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 13-0452-85 | T細胞濃縮 |
| 抗マウス B220 FITC | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 10452-85 | フローサイトメトリー解析 |
| 抗マウスCD11c- AF700 | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 117319 | フローサイトメトリー解析 |
| 抗マウスCD25 PE | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 12-0251-82 | 流動染色 |
| 抗マウスCD4 ビオチン | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 13-0041-86 | T細胞濃縮 |
| 抗マウスCD4 eFluor® 450 (Pacific Blue® replacement) | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 48-0042-82 | 流動染色 |
| 抗マウスCD45.1 PE | サーモフィッシャーサイエンティフィ | 12-0900-83 | フローサイトメトリー解析 |
| 抗マウスCD8a APC | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 17-0081-83 | フローサイトメトリー解析 |
| 抗マウスH-2Kb PerCP-Fluor 710 | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 46-5958-82 | フローサイトメトリー解析 |
| アンチマウスMHCクラスII抗体 APC | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 17-5320-82 | フローサイトメトリー解析 |
| 抗マウス TER-119 ビオチン | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 13-5921-85 | T細胞濃縮 |
| 抗Thy1.2 | バイオエクセル | BE0066 | BM世代 |
| B6 fB-/- マウス | セントラルフロリダ大学 | 社内 | 受信者 |
| B6.Ly5.1 (CD45.1+) マウス | Charles River | 564 | ドナー |
| BALB/c マウス | Charles River | 028 | 移植レシピエント |
| C57BL/6 マウス | Charles River | 027 | ドナー/レシピエント |
| CD11b | Thermo Fisher Scientific | 13-0112-85 | T-cell enrichment |
| CD25-biotin | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 13-0251-82 | T細胞の濃縮 |
| CD45R | Thermo Fisher Scientific | 13-0452-82 | T-cell enrichment |
| CD49b モノクローナル抗体 (DX5)-biotin | Thermo Fisher Scientific | 13-5971-82 | T-cell enrichment |
| Cell strainer 40 uM | Thermo Fisher Scientific | 22363547 | Cell preparation |
| strainer 70 uM | Thermo Fisher Scientific | 22363548 | Cell preparation |
| D-ルシフェリン | Goldbio | LUCK-1G | 生きた動物イメージング |
| ウシ胎児血清 (FBS) | Atlanta Bilogicals R&Dシステム | D17051 | 細胞培養 |
| フローサイトメトリーチューブ | フィッシャーサイエンティフィック | 352008 | フローサイトメトリー分析 |
| FVB/NCrl | チャールズリバー | 207 | ドナー |
| リポポリサカライド (LPS) | ミリポア シグマ | L4391-1MG | DC成熟 |
| LSカラム | Mitenyi Biotec | 130-042-401 | 細胞調製 |
| MidiMACS | Miltenyi Biotec | 130-042-302 | T細胞濃縮 |
| ニューブランズウィックギャラクシー 170R インキュベーター | エッペンドルフ | ギャラクシー 170 R | 細胞培養 |
| ペニシリン+ストレプトマイシンペニシリン/ストレプトマイシン (10,000 ユニット ペニシリン / 10,000 mg/ml 連鎖球菌) | GIBCO | 15140 | メディア |
| RPMI 1640 | サーモフィッシャー サイエンクティフィック | 11875-093 | メディア |
| TER119 | サーモフィッシャーScientific | 13-5921-82 | T細胞濃縮 |
| Xenogen IVIS-200 | Perkin Elmer | Xenogen IVIS-200 | 生きた動物イメージング |
| X-RAD 320 生物学的照射器 | 精密X線 | X-RAD 320 | 全身照射 |
参考文献
- Shlomchik, W. D. Graft-versus-host disease. Nature Reviews Immunology. 7, 340-352 (2007).
- Appelbaum, F. R. Haematopoietic cell transplantation as immunotherapy. Nature. 411, 385-389 (2001).
- Blazar, B. R., Murphy, W. J., Abedi, M.
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再版と許可
