Transformation des racines de tomate suivie de l’inoculation avec Ralstonia Solanacearum pour l’analyse génétique directe de la maladie bactérienne de wilt

Résumé

Ici, nous présentons une méthode polyvalente pour la transformation des racines de tomate suivie de l’inoculation avec Ralstonia solanacearum pour effectuer l’analyse génétique simple pour l’étude de la maladie bactérienne de flétrir.

Résumé

Ralstonia solanacearum est un agent pathogène vasculaire dévastateur transmis par le sol qui peut infecter un large éventail d’espèces végétales, ce qui constitue une menace importante pour l’agriculture. Cependant, le modèle Ralstonia est considérablement sous-exploré par rapport à d’autres modèles impliquant des pathogènes végétaux bactériens, tels que les seringues Pseudomonas dans Arabidopsis. La recherche visant à comprendre l’interaction entre Ralstonia et les plantes cultivées est essentielle pour développer des solutions durables pour lutter contre la flétrie bactérienne, mais elle est actuellement entravée par l’absence d’essais expérimentaux simples pour caractériser les différentes composantes de l’interaction dans les plantes hôtes indigènes. Dans ce scénario, nous avons développé une méthode pour effectuer l’analyse génétique de l’infection Ralstonia de la tomate, un hôte naturel de Ralstonia. Cette méthode est basée sur Agrobacterium rhizogenes- transformation médiatisée des racines de tomate, suivie par l’inoculation du sol Ralstonia des plantes résultantes, contenant des racines transformées exprimant la construction de l’intérêt. La polyvalence de l’essai de transformation des racines permet d’effectuer soit la surexpression génétique ou le silençage génétique médié par les ARNi. Comme preuve de concept, nous avons utilisé cette méthode pour montrer que le silence par médiation RNAi de SlCESA6 dans les racines de tomate confère une résistance à Ralstonia. Ici, nous décrivons cette méthode en détail, permettant aux approches génétiques de comprendre la maladie bactérienne de flétrissement dans un temps relativement court et avec de petites exigences de l’équipement et de l’espace de croissance des plantes.

Introduction

Ralstonia solanacearum, l’agent causal de la maladie bactérienne de flétrissement, est un agent pathogène vasculaire dévastateur transmis par le sol avec une distribution mondiale qui peut infecter une grande gamme d’espèces végétales, y compris la pomme de terre, la tomate, le tabac, la banane, le poivre et l’aubergine, entre autres^1,2. Les pertes de rendement causées par Ralstonia peuvent atteindre 80-90% de la production de tomates, de pommes de terre ou de bananes, selon le cultivar, le climat, le sol et d’autres facteurs³. Cependant, le modèle Ralstonia e....

Protocole

REMARQUE : Des parties importantes de cette méthode impliquent la manipulation des matériaux végétaux in vitro, et il est donc important de maintenir des conditions stériles pendant toutes ces procédures, y compris la visualisation de la fluorescence DsRed. Pendant tout le processus de transformation, les semis de tomates poussent à 25 à 28 oC et à 16 h/8 h léger/foncé (130 photons demol m^-2s^-1 lumière). Les plaques sont scellées avec du ruban adhésif micropore afin de faciliter l’échange de gaz et la transpiration.

1. Préparation des plants de tomates et des rhizogenes Agrobacterium

Résultats

La figure 5 montre le développement des symptômes de la maladie des plants de tomates avec des racines transformées avec un vecteur vide (EV), et les plantes avec des racines transformées avec une construction d’ARNi ciblant SlCESA6 (Solyc02g072240). Les données de l’indice de la maladie(figure 5A) sont recueillies à partir de la même unité expérimentale (chaque plante) au fil du temps selon une.......

Discussion

Ralstonia solanacearum représente une menace importante pour l’agriculture; cependant, son interaction avec les hôtes naturels d’importance agricole est encore mal comprise par rapport à d’autres agents pathogènes bactériens, en particulier chez les espèces végétales. Dans la plupart des cas, l’analyse génétique est entravée par le temps et les dépenses nécessaires pour modifier génétiquement les plantes hôtes. Pour résoudre ce problème et faciliter l’analyse génétique de l’infection à R. solanacearum d.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Boîtes de Pétri
Poudre	d’agar Sigma-Aldrich
Bacto peptone	BD (Becton et Dickinson)
Acides aminés	Sigma-Aldrich
Papier
Système d’imagerie végétale In Vivo NightShade LB 985	Berthold Technologies
Pots Jiffy	Jiffy Products International A.S.
Ruban microporeux	3M
Murashige et Skoog medium (M519)	Phytotechlab
Substrat Pindstrup	Mosebrug A/S
Scalpel et lame
Hypochlorite de sodium	Sigma-Aldrich
Banc
Pince à épiler
Wahtman paper	Wahtman International Ltd. Extrait de levure Maldstone
	OXOID

carrées de 90 mmfiltre propre stérile