Method Article

نموذج مورين للتعرض الجنين لالتهاب الأم لدراسة آثار التهاب المشيمة الحاد على نمو الأمعاء حديثي الولادة

DOI:

10.3791/61464

⸱

June 24th, 2020

 ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Neonatology, Stead Family Department of Pediatrics, University of Iowa, 2Division of Maternal Fetal Medicine, Department of Obstetrics & Gynecology, University of Iowa, 3Division of Neonatology, Department of Pediatrics, Vanderbilt University, 4Department of Microbiology & Immunology, University of Iowa

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

طورنا نموذجا لالتهاب المشيمة لمحاكاة تعرض الجنين لالتهاب الأم (FEMI) دون مضاعفات الكائنات الحية لدراسة آثار FEMI على تطور القناة المعوية للذرية. وهذا يسمح لدراسة الأسباب الميكانيكية لتطوير الإصابة المعوية بعد التهاب المشيمة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التهاب المشيمة هو أحد الأمراض الشائعة المبكرة للولادة المبتسرة ويرتبط بالعديد من أمراض الخداج ، بما في ذلك التهاب الأمعاء المعوي النخري (NEC). ومع ذلك، لا يزال يتعين اكتشاف صلة ميكانيكية بين هذين الشرطين. لقد اعتمدنا نموذج مورين لالتهاب المشيمة الذي ينطوي على التعرض للدهون (LPS) الناجم عن تعرض الجنين لالتهاب الأم (FEMI). هذا النموذج من FEMI يحفز الأم العقيمة، المشيمة، وتتالي التهاب الجنين، والذي هو أيضا موجود في كثير من الحالات من التهاب المشيمة السريرية. على الرغم من وجود نماذج تستخدم البكتيريا الحية وتقليد أكثر دقة الفيزيولوجيا المرضية للعدوى الصاعدة مما يؤدي إلى التهاب المشيمة ، قد تسبب هذه الطرق آثارا غير مباشرة على تطور الجهاز المعوي غير الناضج والميكروبيوم النامي المرتبط به. باستخدام هذا البروتوكول، أثبتنا أن FEMI الناجم عن LPS يؤدي إلى زيادة تعتمد على الجرعة في فقدان الحمل والولادة المبتسرة، فضلا عن اضطراب النمو المعوي الطبيعي في النسل. علاوة على ذلك ، أثبتنا أن FEMI يزيد بشكل كبير من الإصابة المعوية والسيتوكينات المصلية في النسل ، مع تقليل الكؤوس وخلايا Paneth في وقت واحد ، وكلاهما يوفر الخط الأول من المناعة الفطرية ضد التهاب الأمعاء. على الرغم من أن نموذجا مماثلا من FEMI الناجم عن LPS قد استخدمت لنموذج الارتباط بين التهاب المشيمة والتشوهات اللاحقة للجهاز العصبي المركزي، على حد علمنا، وهذا البروتوكول هو الأول في محاولة لتوضيح وجود صلة ميكانيكية بين التهاب المشيمة والاضطرابات في وقت لاحق في التنمية المعوية كحلقة وصل محتملة بين التهاب المشيمة والأمعاء.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تلعب الأغشية المشيمية دورا أساسيا في حمل الثدييات. وهي تشمل المشيمة و amnion، والتي تخدم وظائف متعددة. فهي تحيط وتحمي الجنين ، وتسهيل إشارات الباراكورين بين مقصورات الأم والجنين1، وخلق حلقات التغذية المرتدة المحلية داخل الأغشية المشيمية ، والتي قد تشارك في بدء الولادة1. الفهم الحالي للأغشية يشير إلى أن amnion يوفر وظيفة الحاجز الهيكلي ، ويوفر المشيمة حاجزا مناعيا في المقام الأول لحماية الجنين النامي من الجهاز المناعي للأم2. التهاب هذه الأغشية يعرف باسم التهاب المشيمة. تاريخيا، تم تشخيص التهاب المشيمة السريرية بعد وجود حمى الأم بالإضافة إلى واحد أو أكثر من النتائج السريرية الجنينية أو الأمومية

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل لجنة العناية والاستخدام المؤسسية للحيوانات في جامعة أيوا (البروتوكول #8041401). تم إيواء جميع الحيوانات في جمعية لتقييم واعتماد رعاية الحيوانات المختبرية (AALAC) وافقت vivarium في جامعة أيوا. وكانت جميع الفئران سلالة نوع البرية C57Bl/6J.

1. إنشاء FEMI في الفئران الحوامل

  1. إعداد LPS
    1. استخدام LPS المستمدة من الإشريكية القولونية O55:B5 (تركيز المخزون 2 ملغم / مل).
    2. تمييع تركيز مخزون LPS 1:100 مع محلول ملحي معقم لتركيز عمل 20 ميكروغرام /مل.
  2. حقن LPS الأم
    1. حقن السدود الحوامل في يوم الحمل e15. هذه النقطة الزمنية هي حوالي 75٪ من خلال الح....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التعرض لFEMI في اليوم الجنيني 15 يؤدي إلى فقدان الجرعة تعتمد على الحمل ومعدل الجرعة تعتمد على المخاض قبل الأوان (الشكل 1)42. بالنسبة للتجارب ، اخترنا استخدام جرعة LPS من 100 ميكروغرام / كجم لتقليل فقدان الحمل والخداج (50٪ فقدان بين كل من الخداج وزوال الجنين داخل الرحم) مع تعريض الأجنة لإهانة التهابية كبيرة.

باستخدام هذا النهج ، درسنا بعد ذلك آثار FEMI على الإصابة اللاحقة للذرية. باستخدام مقياس الهسولوجية من 3 نقاط لقياس الإصابة المعوية المع.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يؤثر التهاب المشيمة على 2٪، و25٪، من حالات الولادة قبل الأوان8،9. ومع ذلك ، فإن تأثير التهاب المشيمة يمكن أن يمتد لفترة طويلة بعد الولادة حيث ثبت أن له تأثيرات كبيرة على الجنين والوليد10،11،12،13،14،15،16. الأهم من ذلك، وقد ثبت أن ال.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تم دعم هذا العمل جزئيا من خلال المعاهد الوطنية للصحة (DK097335 و T32AI007260) وقسم الأسرة في جامعة أيوا ستيد لطب الأطفال.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
10٪ فورمالين محايدسيجماHT501128
وصمة عار الزرقاء ألسيانتوريد الوافد الجديد1003A
C57Bl6 / J الفئرانمختبرات جاكسون664
مختبراتالإيثانولديكون 2701
حمض الهيدروكلوريكسيجماH1758
صبغة الهيماتوكسيلينلايكا381562
LPSSigmaL2880
NaHCO3SigmaS6014
نيكون Eclipse Ni-U مجهرنيكون2CE-MQVJ-1
حمض دوريACROSH5106CAS # 10450-59-9
RNAlaterThermofisherAm7021
كاشف شيفسيجماS5133
Secor اكتشاف مقياس Meso Imager 2400(MSD) V-Plex
AssayMeso Scale Discovery (MSD)
XyleneSigma534056
مخزن

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Myatt, L., Sun, K. Role of fetal membranes in signaling of fetal maturation and parturition. International Journal of Developmental Biology. 54 (2-3), 545-553 (2010).
  2. Verbruggen, S. W., Oyen, M. L., Phillips, A. T., Nowlan, N. C.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Fetal Exposure Maternal InflammationChorioamnionitis ModelLPS Injection ProtocolIntestinal Injury AssessmentGoblet Cell QuantificationPaneth Cell AnalysisSerum Cytokine MeasurementNecrotizing Enterocolitis ResearchMurine Pregnancy LossPreterm Birth Model

Related Articles