ex vivo assay המתואר במחקר זה באמצעות תמציות הומוגנטיות במעיים וכתמי immunofluorescence מייצג שיטה חדשנית לבחון את המורפוגנזה המקף של קנדידה אלביקנים במערכת העיכול. שיטה זו יכולה להיות מנוצלת כדי לחקור את האותות הסביבתיים המסדירים מעבר מורפוגנטי במעיים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
Ex vivo Assay לחקר קנדידה אלביקנים מקף מורפוגנזה במערכת העיכול
במאמר זה
סיכום
תקציר
קנדידה אלביקנים מקף morphogenesis במערכת העיכול (GI) מערכת העיכול נשלטת היטב על ידי אותות סביבתיים שונים, וממלא תפקיד חשוב בהפצה ופתוגנזה של פתוגן פטרייתי אופורטוניסטי זה. עם זאת, שיטות לדמיין hyphae פטרייתי במערכת העיכול ב vivo הם מאתגרים אשר מגביל את ההבנה של אותות סביבתיים בשליטה על תהליך morphogenesis זה. הפרוטוקול המתואר כאן מדגים שיטת ex vivo חדשנית להדמיה של מורפוגנזה מקפית בתמציות הומוגניות במעיים. באמצעות מבחן אקס ויוו, מחקר זה מדגים כי תוכן cecal מעכברים מטופלים אנטיביוטיים, אבל לא מעכברי בקרה מטופלים, לקדם C. אלביקנים מקף morphogenesis בתכולת המעיים. כמו כן, הוספת קבוצות ספציפיות של מטבוליטים במעיים לתכולת cecal מעכברים שטופלו באנטיביוטיקה מווסתת באופן דיפרנציאלי את המקף morphogenesis ex vivo. יחד, פרוטוקול זה מייצג שיטה חדשנית לזהות ולחקור את האותות הסביבתיים השליטה C. אלביקנים מקף morphogenesis במערכת העיכול.
מבוא
קנדידה אלביקנים הוא פתוגן פטרייתי אופורטוניסטי, פולימורפי, כי הוא בדרך כלל בקנה אחד, אבל יכול לעבור שינוי מורפולוגי לתוך צורה ארסית המסוגלת לגרום לזיהומים מסכניחיים אצלאנשים immunocompromised 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13. ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הפרוטוקולים של בעלי חיים אושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים מוסדיים של אוניברסיטת המערב התיכון (IACUC) כמתוארלפני 57. ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים מוסדיים באוניברסיטת המערב התיכון אישרה מחקר זה תחת פרוטוקול MWU IACUC #2894. מדיניות הטיפול בבעלי חיים של MWU פועלת בהתאם למדיניות שירות הבריאות הציבורי (PHS) בנוגע לטיפול בבני אדם ולשימוש בבעלי חיים במעבדה ולמדיניות שנקבעה לחוק לרווחת בעלי חיים (AWA).
1. עכברים לומדים פרוטוקול סטנדרטי
- השתמש בעכברים C57BL/6J זכר ונקבה לפחות שישה שבועות. משלימים אותם עם מים סטריליים עם או בלי cefoperazone (0.5 מ"ג / מ"ל).
- עכברי בית שותף בקבוצות של 5, כאשר כל ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
תוצאות אלה יחד עם ממצאים קודמים ממעבדת Thangamani60 מצביעים על כך שכאשר C. albicans גדל ex vivo בתמציות הומוגנטיות במעיים שנלקחו מהבטן, המעי הדק והמעי הגס של שליטה לא מטופלת ועכברים שטופלו באנטיביוטיקה, C. אלביקנים מתפתחים בדרך כלל עם מורפולוגיה שמרים (איור 1B). עם זאת, כאשר גדל בתמצית cecal מעכברים שטופלו באנטיביוטיקה, C. albicans בקלות עובר מורפוגנזה, וכתוצאה מכך דגימות המכילות שמרים וצורות hyphae (איור 1B); מ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
השיטה המתוארת כאן מציגה דרך חדשנית לחקור את ההשפעה של השפעות אנטיביוטיות, תזונתיות, קסנוביוטיות וטיפוליות על C. אלביקנים מקף מורפוגנזה במערכת העיכול. מאז רוב זיהומים מערכתיים מקורם GItract 21,22,23,24,25,26,27,28,29
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין אינטרסים פיננסיים מתחרים או ניגודי אינטרסים אחרים.
תודות
המחברים מכירים במשאבים ותמיכה ממכון מחקר הליבה התאית והמולקולרית של אוניברסיטת המערב התיכון.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 1 - 10 ומיקרו; L טיפים פיפט | פישר סיינטיפיק | 02-707-454 | שונות |
| 100 - 1000 ומיקרו; L טיפים | פיפט פישר סיינטיפיק | 02-707-400 | שונות |
| 20 - 200 ומיקרו; L טיפים לפיפט | פישר סיינטיפיק | 02-707-451 | שונות |
| 2-חומצה מתיל-בוטירית | סיגמא | 193070-25G | תרכובת מעכבת היפאלית |
| 488 עז אנטי-ארנב IgG | Invitrogen (פישר) | A11008 | IF צביעה משנית ab |
| אגר | פישר | BP1423-500 | YPD רכיב אגר |
| מיקרוסקופ הדמיה אוטומטי | Keyence | BZX700 | |
| קנדידה אלביקנס נוגדן | Invitrogen (פישר) | PA1-27158 | IF צביעת בטן ראשונית |
| cefoperazone | קיימן | 16113 | אנטיביוטיקה |
| חומצה דאוקסיקולית | סיגמא | 30960 | תרכובת מעכבת היפאלית |
| D-גלוקוז | פישר | D16-500 | מלקחיים תרכובת מקדמת היפי |
| פישר | 08-885 | ||
| חומצה לקטית | Alfa Aesar | AAAL13242-06 | תרכובת מעכבת היפאלית |
| חומצה ליטוכולית | Sigma | L6250-10G | תרכובת מעכבת היפאלית |
| חומצה פלמיטית | Sigma | P5585-10G | תרכובת מעכבת היפאלית |
| Paraformaldehyde | אלפא | Aesar A11313 | מקיבוע |
| פוספט חוצץ פוספט (PBS), 10x | אלפא Aesar | J62692 | PBS רכיב |
| p-tolylacetic חומצה | SCBT | sc-257959 | תרכובת מעכבת היפאלית |
| חומצה סבצית | Sigma | 283258-250G | תרכובת מעכבת היפאלית |
| מספריים חדים פישר | 28301 | ||
| מים סטריליים Milli-Q N | / A | N / | |
| A שונות YPD מרק | BD Biosciences | 242810 | רכיב אגר YPD |
מקורות
- Huffnagle, G. B., Noverr, M. C. The emerging world of the fungal microbiome. Trends in Microbiology. 21 (7), 334-341 (2013).
- Wisplinghoff, H., et al. Nosocomial bloodstream infections in US hospitals: analysis o....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
