एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया जाता है जो माइक्रोकंप्यूटेड टोमोग्राफी का उपयोग करके विकास के किसी भी चरण में बरकरार ड्रोसोफिला मेलनोगास्टर के दृश्य के लिए अनुमति देता है।
बायोमेडिकल इमेजिंग उपकरण जीन से जीवों तक, स्थानिक तराजू में आणविक तंत्र की जांच की अनुमति देते हैं। एक अच्छी तरह से विशेषता वाले मॉडल जीव ड्रोसोफिला मेलनोगेस्टर को कोशिकाओं और ऊतकों के स्तर पर जीन फंक्शन को समझने के लिए प्रकाश और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के इस्तेमाल से फायदा हुआ है । इमेजिंग प्लेटफार्मों का अनुप्रयोग जो पूरे अक्षुण्ण जीव के स्तर पर जीन समारोह की समझ के लिए अनुमति देता है, आनुवंशिक तंत्र के बारे में हमारे ज्ञान को और बढ़ाएगा। यहां एक पूरी पशु इमेजिंग विधि प्रस्तुत की गई है जो माइक्रोकंप्यूटेड टोमोग्राफी (μ-सीटी) का उपयोग करके किसी भी विकासात्मक चरण में ड्रोसोफिला की कल्पना करने के लिए आवश्यक कदमों को रेखांकित करती है। μ-सीटी के फायदों में ऊतक विच्छेदन या समाशोधन विधियों की आवश्यकता के बिना माइक्रोन-स्तर के संकल्प पर सटीक 3डी जानकारी का उत्पादन करने के लिए वाणिज्यिक रूप से उपलब्ध इंस्ट्रूमेंटेशन और न्यूनतम हाथों पर समय शामिल है। छवि विश्लेषण और 3 डी प्रतिपादन में तेजी लाने वाले सॉफ़्टवेयर के साथ जोड़ा गया, किसी भी ऊतक या अंग प्रणाली का विस्तृत रूपात्मक विश्लेषण वर्णनात्मक और परिकल्पना परीक्षण अध्ययन दोनों के लिए विकास, शरीर विज्ञान और शरीर रचना के तंत्र को बेहतर ढंग से समझने के लिए किया जा सकता है। एक इमेजिंग वर्कफ़्लो का उपयोग करके जिसमें इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, लाइट माइक्रोस्कोपी और μ-सीटी के उपयोग को शामिल किया गया है, जीन फ़ंक्शन का गहन मूल्यांकन किया जा सकता है, इस प्रकार इस शक्तिशाली मॉडल जीव की उपयोगिता को आगे बढ़ाया जा सकता है।
इमेजिंग विधियां जो किसी वस्तु की आंतरिक संरचनाओं की विस्तृत जांच के लिए अनुमति देती हैं, बिना किसी वस्तु की समग्र 3 डी वास्तुकला को नष्ट किए भौतिकी, इंजीनियरिंग, सामग्री विज्ञान, पुरातत्व, जीवाश्म विज्ञान, भूविज्ञान और जीव विज्ञान1,2,3,4,5,6,7,8, 9सहित कई विभिन्न विषयों के लिए व्यापक रूप से फायदेमंद साबितहुई हैं। . इन अविनाशी इमेजिंग विधियों में, एक्स-रे आधारित प्लेटफॉर्म विशेष रूप से उच्च ऊर्जा एक्स-रे की क्षमता के कारण कई अलग-अलग नमूना प्रकारों और सामग्रियों को दृश्यमान प्रकाश तरंगों की तुलना में न्यूनतम बिखरने के साथ प्रवेश करने के लिए उपयोगी होते हैं। गणना टोमोग्राफी (सीटी), माइक्रोकंप्यूटेड टोमोग्राफी (μ-सीटी), नैनोकंप्कुटल्यूटेड टोमोग्राफी (नैनो-सीटी), और सिंक्रोट्रॉन माइक्रोटॉमोग्राफी, इसलिए, मीटर से लेकर माइक्रोन तक के नमूनों के एक्स-रे आधारित इमेजिंग के लिए प्राथमिक प्रौद्योगिकियों के रूप में उभरी है, मिलीमीटर से उप-माइक्रोन संकल्प क्षमताओं10,11,12,13, 14।
हालांकि ये प्लेटफ़ॉर्म नमूना आकार और संकल्प को संतुलित करने के लिए उनके डिजाइन, एक्स-रे ज्यामिति और घटकों में भिन्न होते हैं, वे सभी छवि कैप्चर के लिए एक ही बुनियादी सिद्धांत पर भरोसा करते हैं: एक्स-रे का एक स्रोत जो वस्तु के माध्यम से यात्रा करता है और डिटेक्टर द्वारा कैप्चर किया जाता है। एक्स-रे बीम का अंतर क्षीणता के रूप में यह वस्तु के भीतर अलग घनत्व के माध्यम से गुजरता है छवि विपरीत उत्पन्न करता है । 3डी डेटा या तो नमूना या डिटेक्टर को घुमाकर प्राप्त किया जाता है, 2D प्रक्षेपण छवियों की एक श्रृंखला एकत्र करता है जिसे एल्गोरिदम का उपयोग करके टोमोग्राम में खंगाला जाता है जिसमें 3डी जानकारी होती है जिसका रिज़ॉल्यूशन एक्स, वाई, जेड15में आइसोट्रोपिक है। कई बेंचटॉप μ-सीटी स्कैनर के लिए जो इमेजेड की जा रही वस्तु पर एक्स-रे प्रोजेक्ट करने के लिए शंकु-बीम एक्स-रे ज्यामिति का उपयोग करते हैं, फेल्डकामम्प एल्गोरिदम का उपयोग न्यूनतम त्रुटियों16के साथ वस्तु को सही ढंग से पुनर्निर्मित करने के लिए किया जाता है।
किसी दिए गए प्लेटफ़ॉर्म का संकल्प मुख्य रूप से सिस्टम मापदंडों जैसे एक्स-रे बीम (स्पॉट आकार), स्कैनर ज्यामिति (वस्तु से एक्स-रे स्रोत तक की दूरी), डिटेक्टर पर पिक्सल का आकार और नियोजित पुनर्निर्माण एल्गोरिदम द्वारा निर्धारित किया जाता है। अतिरिक्त कारक, जैसे स्कैनर कंपन, एक्स-रे बीम में उतार-चढ़ाव, नमूना आंदोलन, और वस्तु की कल्पना करने के लिए उपयोग किए जाने वाले भौतिक प्रकार या रासायनिक दाग वास्तविक दुनिया इमेजिंग कॉन्डिक्शन15के तहत स्थानिक संकल्प को भी काफी प्रभावित कर सकते हैं।
जैव चिकित्सा अनुप्रयोगों के लिए, सीटी और μ-सीटी ने शरीर रचना विज्ञान, शरीर विज्ञान, विकास और रोग तंत्र की हमारी समझ को आगे बढ़ाने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है, जो मानव रोगी निदान दोनों के लिए एक उपकरण के रूप में और मॉडल जीवों17, 18के लिए एक प्रीक्लिनिकल इमेजिंग प्लेटफॉर्म के रूप में कार्य कर रहा है। उदाहरण के लिए, माउस इंटरनेशनल फेनोटाइपिंग कंसोर्टियम, जिसका लक्ष्य माउस जीनोम में हर जीन के कार्य की पहचान करना है, उनकी फेनोटाइपिंग पाइपलाइन19के हिस्से के रूप में μ-सीटी का उपयोग करता है। उनके परिणाम विकास और रोग प्रक्रियाओं में शामिल जीन को समझने के लिए महत्वपूर्ण रहे हैं, जबकि माउस शरीर रचना विज्ञान और विकास20के लिए एटलस के रूप में भी सेवा कर रहे हैं। जेब्राफिश और चूहों जैसे अन्य मॉडल जीवों ने भी कई जीन म्यूटेंट17, 21,22, 23के पूरे पशु फेनोटाइपिंग करने के लिए μ-सीटी के उपयोग को पूरीतरहसे अपनाया है।
मॉडल जीवों के साथ पूरे पशु इमेजिंग के संयोजन का लाभ यह है कि किसी दिए गए जैविक प्रक्रिया के लिए जीन फ़ंक्शन की मशीनी समझ पूरी तरह से पता लगाया जा सकता है। यह मॉडल जीवों में अच्छी तरह से विशेषता वाले जीनोम और कई आनुवंशिक उपकरणों के कारण संभव है जो अलग-अलग विकासात्मक टाइमपॉइंट, विशिष्ट ऊतकों, व्यक्तिगत कोशिकाओं और यहां तक कि उपकोशिकीय ऑर्गेनेल्स पर जीन फ़ंक्शन के सटीक हेरफेर की अनुमति देते हैं। इनमें यूएएस/जीएल4 सिस्टम (और इसके कई डेरिवेटिव), CRISPR/Cas9 और आरएनएआई24,25, 26जैसी बाइनरी एक्सप्रेशन सिस्टम शामिल हैं । जब इन आनुवंशिक उपकरणों का उपयोग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, प्रकाश माइक्रोस्कोपी (फ्लोरोसेंट और गैर-फ्लोरोसेंट) से मिलकर एक शक्तिशाली इमेजिंग पाइपलाइन के साथ किया जाता है, और μ-सीटी जैसे पूरे पशु इमेजिंग, अणुओं, कोशिकाओं, ऊतकों, अंगों का गहन मूल्यांकन, और पूरे जीव को प्राप्त किया जा सकता है, जिससे जीन समारोह की बहुत गहरी समझ हो सकती है।
यह प्रोटोकॉल गैर-स्तनधारी मॉडल जीव ड्रोसोफिला मेलनोगेस्टर में μ-सीटी के उपयोग पर केंद्रित है, जिसके असंख्य आनुवंशिक उपकरणों ने कई आणविक तंत्र26, 27को स्पष्ट करने में मदद कीहै। इसे गैर-मॉडलकीटों 1,28, 29,30, 31,32में पिछले प्रोटोकॉल से अपनाया गया था, और इसजानवर33, 34, 35,36,36,37,38,39 में इसके उपयोग के लिए एक मानकीकृत प्रोटोकॉल स्थापित करने के लिए ड्रोसोफिला में पिछले μ-सीटी अध्ययनों से दूर बनाता है। ,40,41. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध स्कैनर का उपयोग करके फ्लाई μ-सीटी डेटासेट के सफल नमूना तैयारी, इमेजिंग और विश्लेषण के लिए कदम रेखांकित किए गए हैं। इस प्रोटोकॉल के साथ, फ्लाई के सभी विकासात्मक चरणों को वर्णनात्मक और परिकल्पना-परीक्षण अध्ययन दोनों के लिए उच्च संकल्प पर कल्पना की जा सकती है, जिसमें वर्गीकरण, शरीर रचना विज्ञान, विकास, शरीर विज्ञान और रोग27शामिल हैं। यह प्रोटोकॉल लगभग किसी भी कीट और यहां तक कि गैर-जीवित सामग्रियों को इमेजिंग के लिए भी उपयोगी होगा, जिन्हें μ-सीटी द्वारा दृश्य को बढ़ाने के लिए छवि विपरीत के लिए रासायनिक धुंधला की आवश्यकता होती है।
सभी विकास चरणों में बरकरार ड्रोसोफिला मेलानोगेस्टर की कल्पना करना एक चुनौती बनी हुई है, मुख्य रूप से इस जानवर में पाए जाने वाले मोटी, पिगमेंटेड क्यूटिकल के साथ प्रकाश माइक्रोस्कोपी की असंगति के कारण। जबकि चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई), ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी (OCT), और ऊतक समाशोधन के साथ मिलकर अल्ट्रामाइक्रोस्कोपी जैसे अन्य पूरे पशु इमेजिंग तरीकों का उपयोग मक्खियों में सफलता के साथ किया गया है50,51,52,53,54,μ-सीटी कई फायदे प्रस्तुत करते हैं जो इसे इस जीव13,15,30 के पूरे पशु इमेजिंग के लिए आदर्श बनाते हैं। . एक्स-रे आसानी से पिगमेंटेड क्यूटिकल में प्रवेश करते हैं और उनकी छोटी तरंगदैर्ध्य उप-माइक्रोन इमेजिंग के लिए अनुमति देती है। लेबलिंग के लिए व्यापक रूप से उपलब्ध रसायनों में न्यूनतम निवेश की आवश्यकता होती है और कोई विशेष बेंच कौशल13नहीं । μ-सीटी स्कैनर भी व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं, और लागत प्रकाश माइक्रोस्कोपी प्लेटफार्मों के बराबर हैं, जबकि विषयों (भूविज्ञान, जीवाश्म विज्ञान, इंजीनियरिंग, आदि) की व्यापक श्रृंखला के लिए भी अधिक आकर्षक है कि एक संस्थान में इसकी उपलब्धता से भी लाभ उठा सकते हैं । सिंक्रोट्रॉन एक्स-रे स्रोतों का उपयोग उच्च रिज़ॉल्यूशन μ-सीटी इमेजिंग के लिए फिक्स्ड और जीवितकीटों के 31,55, 56के लिए भी किया जा सकता है, लेकिन वाणिज्यिक बेंचटॉप स्कैनर की तुलना में कम सुलभ हैं।
यह प्रोटोकॉल फ्लाई वयस्कों, पिल्ला, लार्वा और सेलुलराइज्ड भ्रूण की μ-सीटी छवियों को प्राप्त करने का एक कुशल तरीका प्रदान करता है। ध्यान दें कि ऊपर उल्लिखित कई चरणों के लिए, इमेजिंग के लिए नमूने तैयार करने के लिए वैकल्पिक तरीके भी लागू किए जा सकते हैं। अन्य अध्ययनों में कीड़ों में उपयोग के लिए विभिन्न निर्धारण, लेबलिंग और सुखाने के कदमों की विस्तृत तुलना प्रदान की गई है और इस तकनीक को अपनाने में रुचि रखने वालों को प्रत्येकदृष्टिकोण1, 4, 13,29,30,30,57के गुणों का मूल्यांकन करने के लिए प्रोत्साहित कियाजाताहै। हालांकि यह प्रोटोकॉल अपेक्षाकृत सीधा है, कुछ उपयोगी सुझाव प्रस्तुत किए जाते हैं।
सबसे पहले, अक्षुण्ण नमूनों के क्यूटिकल को बाधित करते समय देखभाल की जानी चाहिए जैसे कि अंतर्निहित नरम ऊतकों को काफी बाधित नहीं किया जाता है। पोकिंग से पहले बोइन के समाधान में 2 घंटे के लिए लार्वा और प्रारंभिक प्यूपल चरणों को निर्धारण करना महत्वपूर्ण है। यह ऊतक को कठोर करेगा और हीमोलिम्फ की मात्रा को सीमित करेगा जो क्यूटिकल छेद से बाहर निकल जाएगा, जो अंग वास्तुकला को बदल सकता है। यदि ब्याज की संरचना (ओं) वहां स्थित है तो वयस्क के व्यक्तिगत शरीर खंड (सिर, छाती और पेट) को अलग किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, आंत या केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के 3 डी वास्तुकला को बाधित करने के बजाय इन खंडों के माध्यम से सफाई से टुकड़ा करने के लिए एक स्केलपेल का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है। समय के लिए के रूप में, वयस्कों को आम तौर पर केवल 16 बजे की आवश्यकता है । पूर्ण निर्धारण के लिए, जबकि लार्वा और प्यूपल चरणों को 24 घंटे की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, यदि आयोडीन या पीटीए धुंधला असमान प्रतीत होता है, तो नमूना को तब तक कम करने के लिए समाधान में वापस रखा जा सकता है जब तक कि धुंधला भी हासिल नहीं हो जाता है। अंत में, हाइड्रेटेड नमूनों को 4 डिग्री सेल्सियस पर नहीं रखा जाना चाहिए, क्योंकि यह कमरे के तापमान पर वार्मिंग के बाद शरीर गुहा के भीतर हवा के बुलबुले के गठन को प्रेरित करने लगता है।
दूसरा, नमूना बढ़ते उपकरण, मंच प्रकार के अनुसार भिंन होगा और क्या नमूना हाइड्रेटेड रहने की जरूरत है या महत्वपूर्ण बिंदु सूख गया है । यदि हाइड्रेटेड है, तो सुनिश्चित करें कि नमूना रिसाव नहीं करता है और संभवतः स्कैनर को नष्ट कर देता है। जब एक पिपेट टिप के अंदर नमूना बढ़ते, एक सुस्त वस्तु के साथ धीरे धक्का सुनिश्चित करें जब तक नमूनों मामूली प्रतिरोध मुठभेड़ों और स्थानांतरित नहीं कर सकते । बहुत मुश्किल धक्का से हीकित विकृति और अंतर्निहित संरचनात्मक दोष हो सकते हैं। इसके अलावा, सुनिश्चित करें कि नमूना धारक में संभव के रूप में रोटेशन की धुरी के करीब के रूप में गठबंधन किया है। किसी भी लड़खड़ा देखने के बड़े क्षेत्र के कारण स्कैन समय में वृद्धि होगी और पुनर्निर्माण के बाद अंतिम tomogram के संकल्प को कम ।
तीसरा, प्रक्षेपण छवियों को प्राप्त करने के लिए स्कैनर सेटिंग्स भी साधन के अनुसार भिन्न होंगे। स्कैनर की संकल्प क्षमताओं को अधिकतम करने के लिए, एक्स-रे बीम स्पॉट आकार जितना संभव हो उतना छोटा होना चाहिए (5-10 माइक्रोन)। यह एक्स-रे वोल्टेज और वर्तमान सेटिंग्स को संतुलित करके प्राप्त किया जा सकता है जैसे कि कुल बिजली 3-4 डब्ल्यू है। इन सेटिंग्स और कैमरे पर उचित जोखिम समय के साथ, नमूना और इष्टतम छवि विपरीत द्वारा उचित एक्स-रे बीम तनु को प्राप्त किया जा सकता है। वस्तु और एक्स-रे स्रोत के बीच एल्यूमीनियम या कॉपर फिल्टर का उपयोग सबसे अच्छी छवि के विपरीत के लिए इष्टतम एक्स-रे ऊर्जा सेटिंग्स को ठीक करने या उच्च संचालित स्रोतों के लिए पर्याप्त रूप से बीम को कम करने के लिए उपयोग किया जा सकता है। छवि रिज़ॉल्यूशन के लिए, यह दाग प्रकार, प्रक्षेपण छवियों की संख्या, छवि पिक्सेल आकार, कैमरा स्थिति, नमूना आंदोलन, स्कैनर कंपन और पुनर्निर्माण मापदंडों सहित कई अलग-अलग चरों पर निर्भर करेगा। ज्ञात आकार मार्कर युक्त एक बार पैटर्न प्रेत (क्यूआरएम जीएमबीएच) किसी दिए गए स्कैनर और कैमरा सेटिंग के लिए स्थानिक संकल्प का मूल्यांकन करने में मदद कर सकता है।
यह इमेजिंग महत्वपूर्ण बिंदु सूखे या हाइड्रेटेड नमूनों के गुणों का मूल्यांकन करने लायक भी है। सोम्बके एट अल ने दो तरीकों का तुलनात्मक आकलन किया और आर्थ्रोपोड्स30से जुड़े μ-सीटी अनुप्रयोगों के लिए महत्वपूर्ण बिंदु सुखाने को बेहतर पाया। हालांकि, हाइड्रेटेड नमूनों के लाभ यह हैं कि जानवरों को कम रासायनिक और यांत्रिक जोखिम के अधीन किया जाता है जो मात्रात्मक और रूपात्मक कलाकृतियों दोनों का कारण बन सकता है। यह भी नाजुक ऊतकों सीपीडी से बेहतर संरक्षित करने के लिए जाता है । हालांकि, हाइड्रेटेड नमूनों में बहुत कम शेल्फ जीवन होता है और निर्धारण के बाद एक महीने से बाद में चित्रित नहीं किया जाना चाहिए क्योंकि ऊतक क्षरण और कम छवि गुणवत्ता उस बिंदु पर स्पष्ट हो जाती है। इसके अलावा, हाइड्रेटेड नमूनों का समाधान एक महत्वपूर्ण बिंदु सूखे नमूने से थोड़ा कम होगा, क्योंकि एक्स-रे को प्लास्टिक पिपेट टिप और आसपास के तरल (पानी या बफर) दोनों के माध्यम से भी प्रवेश करना होगा। क्रिटिकल पॉइंट सूखे नमूनों को बहुत लंबे समय तक संरक्षित किया जा सकता है, खासकर जब ड्रिराइट पर रखा जाता है। उन्हें सीधे एक्स-रे बीम पथ में पंखों या पैरों को एक कीट पिन में चिपकाकर और बढ़ते प्रक्रिया को सरल बनाते हुए चरण चक में रखकर भी रखा जा सकता है। हालांकि, इन नमूनों के व्यापक इथेनॉल निर्जलीकरण ऊतक सिकुड़न और नाजुक ऊतक वास्तुकला के नुकसान के लिए नेतृत्व कर सकते हैं, यही वजह है कि इन प्रभावों को कम करने के लिए EtOH सांद्रता बढ़ाने की एक श्रृंखला प्रदर्शन करने के लिए महत्वपूर्ण है । फिर भी, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि पैराफॉर्मेल्डिहाइड निर्धारण और यहां तक कि आयोडीन धुंधला सहित रासायनिक उपचार के सभी रूपों ऊतक सिकुड़न58,59का कारण बन सकता है। जबकि न तो विधि एक जीवित मक्खी में ‘वास्तविक अंग आकार’ के माप प्रदान करेगा, रूपांतरित माप अभी भी मान्य हैं जब उत्परिवर्ती और जंगलीताकार जानवरों की तुलना इतनी देर तक निर्धारण, धुंधला, और सुखाने के कदम नमूनों के दोनों सेटों के लिए समान रूप से किए जाते हैं – अधिमानतः समानांतर में।
अंत में, μ सीटी ड्रोसोफिला33, 34, 35, 36,37,38,39,40, 41के लिए एक उपयोगी संपूर्ण पशु इमेजिंग उपकरण प्रदान करता है। कई अन्य अध्ययनों ने कीट वर्गीकरण, पारिस्थितिकी, शरीर विज्ञान, विकास और शरीर रचना विज्ञान के विभिन्न पहलुओं को समझने के लिए इस तकनीक की शक्ति का प्रदर्शन किया है जो मक्खियों1,28,30, 31, 32,55, 56,57में भविष्य के अध्ययनों को सूचित करने में मदद कर सकता है . इस जीव में पहले से ही व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले आनुवंशिक और हल्के माइक्रोस्कोपी उपकरणों के साथ संयुक्त, μ-सीटी खुद को एक प्रयोगात्मक पाइपलाइन के भीतर रख सकता है जो जीनोटाइप और फेनोटाइप के बीच गहरी समझ के लिए अनुमति देता है।
The authors have nothing to disclose.
इसमें से कोई भी नासिर रुसान के समर्थन के बिना संभव नहीं होता । मैं एच डौग मॉरिस, डेनिएल Donahue, और NIH माउस इमेजिंग सुविधा और प्रशिक्षण और उपयोगी चर्चा के लिए माइक्रो फोटोनिक्स के बेन दर्द के ब्रेंडा Klaunberg शुक्रिया अदा करना चाहूंगा । मैं भी Xradia ५२० वर्सा पर पेट के नमूनों स्कैनिंग के लिए Zeiss के Mansoureh Norouzi रेड शुक्रिया अदा करता हूं । लॉरेन स्मिथ, सामंथा स्मिथ, और राहेल एनजी भी स्कैनिंग के साथ मदद की । माइक मार्श ऑफ ऑब्जेक्ट रिसर्च सिस्टम्स ने ड्रैगनफ्लाई तकनीकी सहायता प्रदान की। मैं नेशनल हार्ट, फेफड़े और रक्त संस्थान (1K22HL137902-01) और व्योमिंग विश्वविद्यालय से स्टार्ट अप फंड्स के समर्थन के लिए भी आभारी हूं। मैं गुमनाम समीक्षकों को उनके मददगार सुझावों और टिप्पणियों के लिए भी धन्यवाद देता हूं ।
100% Ethanol | For critical point drying | ||
Bouin's Solution | Sigma-Aldrich | HT10132 | For animal fixation |
Critical Point Dryer | Dries samples using the critical point method; multiple options available (Balzers CPD 020 or Leica EMCPD300) | ||
Dragonfly Software | Object Research Systems | For visualization and segmentation of micro-CT datasets; https://www.theobjects.com/dragonfly/index.html | |
Heat Block | For microfuge tubes | ||
Image Analysis Workstation | Should contain sufficient RAM and quality graphics card for 3D rendering | ||
Iodine Solution (I2KI) | Fisher Scientific | SI86-1 | For staining |
Microcomputed Tomography Scanner | Bruker | Skyscan 1172 | Cone-beam X-Ray geometry; detector is a Hamamatsu 10 MP camera with 11.54 µm pixel size. |
Microcomputed Tomography Scanner Software | Bruker | For controling the scanner itself (e.g., performing flat field corrections, X-ray tube power, camera expsoure times, acquisition, etc.) | |
Minutien Pins | Fine Science Tools | 26002-15 | For poking hole in cuticle |
NRecon Image Reconstruction Software | Bruker | Used to reconstruct cross-section images from 2D projection images taken with cone-beam X-Ray geometry | |
P10 pipet tips | Genesee Scientific | 24-120 | Sample mounting |
Phosphate Buffered Saline | Resarch Products International | P32060-4000.0 | Dilute to 1X with water before use |
Phosphotungstic Acid Hydrate | Sigma-Aldrich | 79690-25g | For staining |
Pin Holder | Fine Science Tools | 26018-17 | For Minutien Pins |
Triton X-100 | Research Products International | 111036 | To remove waxy coating from adult flies (as 0.5% PBST) |
X-Ray Microscope | Zeiss | Xradia 520 Versa | Cone-beam X-Ray geometry featuring Fresnel zone plate objective lenses for Resoluton at a Distance (RaaD™) |