Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Bir Murine Modelinde İskemi Reperfüzyon Yaralanması Sonrası Kök Hücrelerin Gecikmiş İntramiyokardiyal Teslimi

Published: September 3, 2020 doi: 10.3791/61546

Summary

Kök hücreler sürekli miyokardiyal hasarı olan bireyler için potansiyel tedaviler olarak araştırılır, ancak, onların azaltılmış canlılık ve yaralı doku içinde tutma onların uzun vadeli etkinliğini etkileyebilir. Bu yazıda iskemi reperfüzyon yaralanması nın bir murine modelinde kök hücre dağıtımı için alternatif bir yöntem açıklanmaktadır.

Abstract

Miyokardiyal yaralanmaları olan bireylerde kardiyak fonksiyonun iyileşmesi için kök hücre (SC) kullanımına büyük ilgi vardır. En sık, kardiyak kök hücre tedavisi miyokardiyal yaralanma indüksiyonu ile eşzamanlı Olarak SCs teslim ederek çalışılır. Ancak, bu yaklaşım iki önemli sınırlamalar sunar: erken düşmanca pro-inflamatuar iskemik ortam nakledilen SCs sağkalım etkileyebilir, ve SCs büyük olasılıkla kullanılacak subakut enfarktüs senaryo temsil etmez. Burada iskemi-reperfüzyon yaralanması indüksiyonu ve mezenkimal kök hücre (MsC) teslimi için iki bölümlü bir dizi cerrahi işlem denilmektedir. Kök hücre yönetimi bu yöntem ilk bağışıklık yanıtı atlatarak hasarlı doku etrafında daha uzun canlılık ve tutma için izin verebilir. İskemi reperfüzyon yaralanması bir model farelerde mezenkimal kök hücrelerin teslimi ile birlikte indüklenen oldu (3.0 x 105),ststitutively ifade CMV organizatörü altında muhabir gen firefly luciferase ifade, intramiyokardial 7 gün sonra. Hayvanlar sırasıyla yaralanma ve hücre enjeksiyonu onayı için ultrason ve biyolüminesans görüntüleme ile görüntülendi. Daha da önemlisi, SC doğumu için bu iki işlem yaklaşımını gerçekleştirirken ek komplikasyon oranı yoktu. Kök hücre yönetimi bu yöntem, topluca state-of-the-art muhabir genlerin kullanımı ile, canlılık ve kronik iskemi bir durumda nakledilen SCs tutulması in vivo çalışma için izin verebilir klinik olarak görülen, aynı zamanda ilk pro-inflamatuar yanıtı atlatmak. Özetle, kök hücrelerin miyokardyuma gecikmeli olarak ulaştırılması için bir protokol oluşturduk, bu da hasarlı dokunun yenilenmesini teşvik etmede potansiyel yeni bir yaklaşım olarak kullanılabilir.

Introduction

Kardiyovasküler hastalık dünya çapında en sık morbidite ve mortalite nedeni olmaya devam etmektedir. Kardiyak iskemik olayların miyokardiyum un ve çevresindeki hücrelerin genel işlevine zararlı olduğu bulunmuştur1. Kardiyomiyositlerin sadece %00.45-1.0'̴ miyokardiyal hasar oluştuktan sonra her yıl yenilenecektir2. Artan talep ve tedaviler geliştirmeye doğal odak rağmen, yaralı doku rejenerasyonyardımcı tedaviler kurmak zor olmuştur ve hala daha fazla optimizasyon gerektirir3,4,5. Kök hücre tedavileri iskemik bir olaydan sonra hasarlı dokuyu gençleştirmek için alternatif bir yol olarak sunulmuştur; ancak, bu tedavilerin ilerlemesi sınırlı sağkalım ve yaralı bir alana hücrelerin tutulması ile meydan olmuştur6.

Bir iskemik olay dan sonra kalbin mikroçevre hipoksik olarak karakterize edilebilir, pro-oksidan, ve pro-inflamatuar, terapötik kök hücrelerin hayatta kalmak için adapte için düşmanca koşullar sunan7,8. Bir bağışıklık yanıtı yaralanma sonrasında tetiklenir gibi, naif lenfositler, makrofajlar, nötrofiller ve mast hücreleri ölen hücreleri kaldırarak hasarı onarmak için girişimi ve doku remodeling için süreci modüle9,10,11. İlk 3 gün post-iskemi içinde, inflamasyon bölgede nötrofil ve monositler yüksek sayıda pro-inflamatuar sitokinlerin salınımı ile zirvede10,12. 7 gün sonra, çok iltihap yatışmış ve reparative hücrelere geçiş başlar, remodeling kaskad tamamlanana kadar devam, farelerde yaklaşık 14 gün13. Cerrahi yöntemimiz, iskemi reperfüzyon uyrması sonrası en yüksek doğuştan gelen immün yanıtı atlamak için miyokardiyuma biyolojik lerin girişine alternatif bir yaklaşımdır. Aynı zamanda, akut miyokard infarktüsile karşılaştırıldığında göz önünde bulundurulması gereken farklı değişkenler olabileceği subakut/kronik iskemi durumunda ki tedavilerin incelenmesine olanak sağlayacaktır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Deneyler dişi C57BL/6 fareler, yaş 10-12 hafta ve 20-25 g vücut ağırlığı üzerinde yapıldı. Tüm hayvan prosedürleri, Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'nda (Laboratuvar Hayvan Kaynakları Enstitüsü, Ulusal Bilimler Akademisi, Bethesda, MD, ABD) belirtilen standartlara uygun ve Mayo Clinic College of Medicine Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.

1. Hazırlık ve entübasyon

  1. Ameliyat tan önce tüm cerrahi aletleri otoklav. Birden fazla ameliyat tek seansta yapılacaksa, her hayvandan sonra aletleri temizleyin ve sıcak boncuk sterilizatörü kullanarak yeniden sterilize edin.
  2. Bir indüksiyon odasında 1 L/dk O2 de% 3.5-4 isofluran ile fareler anestezi.
  3. Buprenorfin SR 1 mg/kg (analjezik) subkutan olarak uygulayın, hayvanı tartın ve ağırlığı ventilatöre tadına koyun.
  4. Göğüs kafesinin sol tarafını omuz seviyesine kadar tıraş edin ve fazla kürkü çıkarmak için tüy dökücü krem uygulayın.
  5. Iskemi reperfüzyon prosedürü için 2 cmH2O'da ventilatörüzerindeki pozitif son ekspiratuar basıncı (PEEP) koruyun. Hücrelerin gecikmiş enjeksiyon prosedürü için akciğer çökmesini önlemek için 3 cmH2O PEEP değiştirin.
  6. Hayvanı 20 G endotrakeal tüp kullanarak entübasyon yapın, vücut Sıcaklığını 35-37 °C'de tutmak için kontrollü bir ısıtma yastığına aktarın.
  7. Fareyi sol tarafta kranial ucu ve sağda kaudal uç ile lateral recumbency bir ventilatör üzerine yerleştirin.
  8. İşlemin geri kalanı için anesteziyi 1 L/dk O2'de %2-2,5 oranında devam ettirin.
  9. Povidon-iyot ve alkol bezleri arasında değişen cerrahi bölgeyi üç kez temizleyin ve her iki göze de oftalmik merhem uygulayın.

2. İskemi reperfüzyon yaralanması

  1. #10 bir bıçak neşteri kullanarak görüş alanında sol daki meme ucunun 2,5 mm'si kadar dikey bir kesi yapın.
  2. Interkostal kaslar ve kaburgalar görünür olana kadar yüzeysel kas katmanları ile kesip makas kullanarak.
  3. Kaburga ve çevresindeki doku kaldırırken, 4 ve 5 kaburga arasındaki interkostal boşluk üzerinden kesilmiş, sonra açık alana göz kapağı retraktör eklemek.
  4. Kavisli forceps kullanarak perikard geri çekin, yukarı ve görüş dışında akciğer hareket.
  5. LAD arter görselleştirin ve, 9-0 naylon sütür kullanarak, arter altında miyokardiyum geçmek 2.5 sol auricle mm distal ve gevşek bir kare düğüm kravat.
  6. 1 cm polietilen boru kesin ve gevşek düğüm içine yerleştirin.
  7. Tüpün etrafındaki sütürü sabitle, iskemiyi onayla, 35 dk sonra serbest bırak.
    NOT: Pallor ve ventriküler aritmi ile iskemi doğrulayın.
  8. Ligasyon serbest ve tüp çıkardıktan sonra, miyokardinre reperfüzyon onaylamak için 5 dakika bekleyin.
  9. 24 G I.V. kateter tüpünü açılışın sağındaki torasik kaviteye yerleştirin.
  10. Basit bir kesik desen 6-0 emilebilir dikiş ile interkostal kesi kapatın.
  11. Sürekli dikiş deseni 6-0 emilebilir dikiş ile kas tabakasıkapatın.
  12. Yüzeysel kas tabakasını kapattıktan sonra, göğüs tüpünü çıkarırken göğüs tüpünü 1 mL tüberkülin şırınga kullanarak göğüs boşluğundan çekin.
  13. Sürekli yatay yatak deseni içinde 6-0 emilebilir dikiş ile cilt kesisini kapatın
    NOT: Cilt tabakası için naylon dikişler ve kesintisiz dikiş deseni de kullanılabilir.
  14. 1,5 mL ılık tuzlu su altı uygulayın ve enfeksiyonu önlemek için kesi bölgesine üçlü antibiyotik merhem uygulayın.
  15. Isofluran'ı kapatın ve hayvanın yardım almadan sürekli nefes alana kadar %100 O2 ile ventilatörden nefes almasına izin verin.
  16. Fareyi 35-37 °C sıcaklıkta, tamamen iyileşene kadar yataksız bir kafese veya kapalı yatak takımları (kağıt havlu veya perde) ile bir kafese aktarın.

3. Fare mezenkimal kök hücre teslimi

NOT: İşlem için kullanılan farelerin suşları inbred bir çizgidir ve genetik olarak aynı kabul edilir. Mezenkimal kök hücreler aynı türdeki hayvanlardan elde edildi ve protokol tasarımı ile1immünsupresyon 1.000'e indüklenmedi.

  1. İlk işlem için daha önce yapılan hazırlık ve entübasyon adımlarını tamamlayın.
  2. Makas ve forceps kullanarak deri tabakasından dikiş çıkarın.
  3. #10 neşter ile, önceki ameliyat la aynı yerde bir kesi yapmak.
  4. Kas tabakası sütür görünür olana kadar skar dokusu nu kesmek için neşter kullanmaya devam edin
  5. Makas ve forceps kullanarak dikiş kaldırmak ve açık kas tabakası kesti.
  6. Kaburgaları bir arada tutan dikişleri görselleştirin ve çıkarın ve bir önceki kesiden interkostal kası kesmeye devam edin.
    NOT: Akciğerler göğüs duvarına yapışmış olabilir, bu durumda, künt veya kavisli forceps dikkatle ayırmak ve onları serbest bırakmak için kullanın.
  7. Göz kapağı retraktörü interkostal alana yerleştirin ve önceki ligasyon alanını bulun.
  8. Mezenkimal kök hücreleri (3.0 x 105),20 μL PBS'de asılı, 30 G insülin şırıngasına yükleyin, iğneyi enjekte etmek için uygun açı için gerektiği gibi hafifçe bükün.
    NOT: Mezenkimal kök hücreler (MSCs) 4-6 haftalık C56BL/6 farelerin yağ dokusundan izole edildi. Erken geçiş hücreleri (p3) in vivo hücre canlılık izleme sağlamak için CMV organizatörü altında firefly luciferase genifade eden bir vektör ile transek. Yağ türetilmiş fare MSC akış sitometri sitometri sitometri sitometri sitometri sitometri ile karakterize edildi ve hücreler CD44, CD29, CD90 ve CD105 için pozitif ama hematopoetik marker CD4514için negatif . Enjeksiyondan önce, MsC'ler erime sürecinden hücre kaybını önlemek için en az bir geçit için kültüre alındı.
  9. İğne açma tamamen miyokardium içinde olana kadar kalbin tabanına doğru apeksten doğru hareket eden şırınga peri-infarkt bölgesine yerleştirin.
  10. İçeri girdikten sonra hücreleri yavaşça miyokardyuma enjekte edin, 3'leri bekleyin, sonra iğneyi çıkarın.
  11. Ventriküler fibrilasyon gibi hücrelere anormal reaksiyonlar olmadığından emin olmak için 3 dakika boyunca kalbi yakından gözlemleyin.
  12. 24 G IV kateter tüpünü göğüs boşluğuna, açıklığın sağına bir interkostal boşluk yerleştirin.
  13. Interkostal, kas ve deri tabakalarını kapatın ve göğüs tüpünü ilk işlemle aynı yöntemle çıkarın.
  14. 1,5 mL ılık tuzlu su altı uygulayın ve enfeksiyonu önlemek için kesi bölgesine üçlü antibiyotik merhem uygulayın.
  15. Isofluran'ı kapatın ve hayvanın yardım almadan sürekli nefes alana kadar %100 O2 ile ventilatörden nefes almasına izin verin.
  16. Fareyi 35-37 °C sıcaklıkta, tamamen iyileşene kadar yataksız bir kafese veya kapalı yatak takımları (kağıt havlu veya perde) ile bir kafese aktarın.

4. Her iki prosedürü takip eden ameliyat sonrası bakım

  1. Spontan solunum, sternal recumbency ve normal hareket kurulana kadar sürekli hayvan gözlemleyin.
  2. Ameliyat günü en az 3 saat boyunca her 15-30 dakikada bir gözleme devam edin.
  3. 5 gün boyunca günde bir kez yara dehiscence veya anormal ağrı için fareler kontrol edin, sonra 2-3 kez haftalık.
  4. Hayvan ağrı belirtileri gösterirse (yani kemerli sırt, minimal hareket, grimacing, veya scruffy kürk) sonra 72 saat post-op, Buprenorfin SR analjezik ek bir doz sağlar.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

İskemi reperfüzyon yaralanması farelerde 0. Ultrason ve elektrokardiyogram analizi enfarktüs ve azalmış ventriküler kontraktil fonksiyonu doğruladı (Şekil 1A-D). Verilerin ileri incelenmesinde iskemik yaralanma alan farelerde ejeksiyon fraksiyonu ve fraksiyonel kısalma azalırken, son diyastolik ve sistolik hacimler artmıştır(Tablo 1). Normal bir fare kalbi ile karşılaştırıldığında(Şekil 2A),Masson Trikrom boyanması miyokard dokusunun 7 gün sonra yaralanma(Şekil 2B)artmış kollajen birikimi ve sol ventrikül duvarının incelmesi saptanmıştır. İkinci işlem yaralanmadan 7 gün sonra yapıldı; farelere, konstitutively ifade edilmiş CMV organizatörü altında muhabir gen firefly luciferase'i ifade eden mezenkimal kök hücrelerin intramiyoldiyal enjeksiyonu (20 μL PBS'de 3.0 x 105) verildi. Bu farelerin in vivo biyolüminesans görüntüleme (BLI) başarılı bir enjeksiyon onayı için kök hücre implantasyonu gün sonra tamamlandı. MSC'lerin başarılı bir şekilde teslimi, iskemi reperfüzyon yaralanmasına neden olan ancak MSC almayan farelere kıyasla BLI sinyali ile örneklenmiştir(Şekil 3A,B). Bu çift girişimsel işlem, akut senaryoda MSC alan hayvanlarda gözlenene benzer şekilde %22'lik bir yıpranma oranına sahipti.

Figure 1
Şekil 1: Farelerin kalp fonksiyonunun görüntülenmesi. Farenin bazal(A)ultrason analizi, iskemi reperfüzyon yaralanması(B)sonrası bir fareile karşılaştırıldığında sol ventrikül miyokardinin düzgün kasılması olduğunu gösterir ventrikül hareketinin azaldığını gösterir. Normal bir farenin(C)temel elektrokardiyogramı ile karşılaştırıldığında, bir farenin ST segmentinde iskemi reperfüzyon yaralanması(D)ile önemli kaymalar vardır ventriküler fonksiyonda azalma gösterir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

EF% FS% EDV (3l) ESV (3l) SV (μl)
Temel 74.19±1.2 44,67±2 23.8±3.6 6.14±0.98 17.68±2.7
İr-İr'den Sonra 43.9±3.8 30,65±3,8 33,88±4,4 18.11±1.4 15.74±3.2

Tablo 1: Ekokardiyografi analizi. Değişkenler Ortalama ± Standart Hatası olarak ifade edilir. EF: Ejeksiyon Fraksiyonu, FS: Kesirli Kısaltma, EDV: End-Diyastolik Hacim, ESV: End-Sistolik Hacim, SV: İnme Hacmi.

Figure 2
Şekil 2: Kalp Dokusunun Histolojik Boyanması. Masson'un normal farede miyokardin trikrom lekesi(A)kardiyak dokuda herhangi bir yaralanma göstermezken, iskemi reperfüzyon yaralanması olan fare(B)sol ventrikül miyokardinde kollajen birikiminin arttığını ve incelme olduğunu gösterir ve başarılı bir enfarktüs tayininin belirlenmesini destekler. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Figure 3
Şekil 3: In vivo biyolüminesans görüntüleme. Kök hücrelerin intramiyokardiyal enjeksiyon uyamayan iskemi reperfüzyon yaralanması olan bir farede biyolüminesans sinyali(A)saptanmadı. Mezenkimal kök hücre (CMV-FLUC) gecikmiş enjeksiyon ualmış iskemi reperfüzyon yaralanması olan bir fare önemli miktarda sinyal gösterdi(B). Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Dünya çapında 85 milyondan fazla insan kardiyovasküler hastalık3etkilenir. Bu iskemik olayların yüksek yaygınlığı, hasarlı dokunun yenilenmesini teşvik etmek için alternatif tedavilerin daha da geliştirilmesini ve genişletilmesini gerektirmektedir. Geleneksel yöntemler terapötik sonraki uygulama ile akut bir ortamda iskemi reperfüzyon prosedürü kullanmak1. İnflamatuar reaksiyonlar 3-4 gün arasında zirvede olan bir kardiyak iskemik olay postdating, nötrofillerin infiltrasyonu ile, makrofajlar, ve artan sitokin sinyalizasyon10,12. Ölü hücre ayrıştırma bu dönemden sonra, birincil bağışıklık yanıtı yatışmaya başlar ve yeniden şekillendirme aşamaları na doğru geçiş13. Ayrıca, tedavilerin klinik ortamda sunulan aynı senaryo içinde araştırılması önemlidir. Bu yazıda, iskemik farelerden elde edilen temsili sonuçları, çift cerrahi işlemin fizibilitesini ve güvenliğini göstermek için, geciken MSC enjeksiyonu ile gösteriyoruz. Bu yaklaşımın sadece miyokardiyal iskemi hayvan modelleri için değil, aynı zamanda inflamasyonun kritik bir rol oynayabileceği hayvan modelleri için de kullanılabileceğine inanıyoruz, hücre veya ilaç tedavileri gibi biyolojik stratejileriiçeren tedavi stratejilerinin başarısını değiştirerek.

Bu nedenle bu yazıda farelerde iskemi reperfüzyon yaralanmasına neden olduktan 7-10 gün sonra, subakut enfarktüse kök hücre nakli için cerrahi bir yöntem açıklanmaktadır. Bu teknik, immün yanıtın farklı evrelerinde ve iskemik hastalık sürecinin subakut/kronik evresinde kök hücre canlılığı ve biyolojisinin incelenmesinde yararlı olacaktır. Murine modelleri tekrarlanabilirlik ve kolaylık açısından bu çalışma yöntemi için ideal konulardır, ancak bazı dezavantajları taşıyabilir. Hayvanın büyüklüğü, pratik te bu işlemler başarıyla tamamlansa da, belirli bir dereceye kadar cerrahi beceri gerektirmeye devam eder.

Bu el yazmasında sunulan prosedürleri gerçekleştirmek için, bu ameliyatların başarıyla tamamlanması için gerekli bazı önemli adımlar ve gözlemler dikkat etmek önemlidir. İlk işlemin kritik bir adım sol anterior inen koroner arter ligasyon (LAD) ve polietilen tüp yerleşimi miyokard geçici iskemi elde etmektir. Steril konik uçlu pamuk lu bezlerin atriyuma disal kardiyak doku distal basınç yerleştirmek için kullanımı LAD gelişmiş tasvir sağlar. Tüp yerleştirildikten ve dikiş sıkıca sabitledikten sonra, iskeminin başarılı indüksiyonunun belirlenmesi için aritmi ve doku pallorunun gözlemi esastır. İskemi dönemi ve sonraki reperfüzyon, dikiş serbest bırakıldıktan sonra, birden fazla hayvan arasında yaralanma tutarlılığı için önemlidir. Ayrıca, açıklanan ikinci işlem sırasında, mezenkimal kök hücrelerin enjeksiyonu proksimal yönde distal yatay hareketlerle yapılmalıdır. İlk işlemden kaynaklanan fibrozis nedeniyle, şoku önlemek için hücrelerin yavaş ve tutarlı bir enjeksiyon ardından iğne eklemek için önemli ama sabit basınç gereklidir. Son olarak, anestezi den fareler uyanma önce sürekli ısı ve tamamlayıcı deri altı sıvıları sağlanması, ısı kaybı nı önleyecek ve herhangi bir kan prosedürleri sırasında kaybedilen değiştirilmesinde yardımcı, hem de hayvanın genel iyileşme.

Bu yazıda, kronik iskemi reperfüzyon yaralanması bir murine modelinde terapötik tedavi olarak kök hücreleri yönetmek için bir yöntem olarak birden fazla prosedürü tamamlamak için bir protokol sağlamak. Bu cerrahi işlemlerin kullanımı zaman içinde canlılıklarını artırmak için yaralanma sonrası düşmanca iskemik ortama kök hücrelerin teslimi için yeni bir yaklaşım sunuyor. Kök hücre tedavisi nin incelenmesinde bu yaklaşımın kullanımı, akut ortamda SC'lerin kullanımına odaklanan diğer çalışmaları önemli ölçüde tamamlayacaktır. Sonuç olarak, açıklanan protokol iskemik yaralanmaya neden olan ve preklinik çalışmalarda model olarak kullanılmak üzere kök hücrelerin daha sonra gecikmiş implantasyonunda başarılıdır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Acknowledgments

Hiçbiri.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
0.9% NaCl Irrigation, USP Baxter 0338-0048-04
11x12" Press n' Seal surgical drape, autoclavable SAI Infusion Technologies PSS-SD
24G 3/4" IV catheter tube Jelco 4053
28G x 1/2" 1mL allergy syringe BD 305500 Injection of analgesic
30G x 1/2" 3/10cc insulin syringe Ulticare 08222.0933.56 Injection of stem cells
6-0 S-29, 12" Vicryl suture Ethicon J556G Intercostal, superficial muscle and skin layer incision closure
9-0 BV100-4, 5" Ethilon suture Ethicon 2829G Ligation of the LAD artery
Absorbent underpad Thermo Fischer Scientific 14-206-64 For underneath the animal
Alcohol prep pads, 2 ply, medium Coviden 6818
Anti-fog face mask Halyard 49235
Bonn Strabismus scissors, curved, blunt Fine Science Tools 14085-09
Buprenorphine HCL SR LAB 1mg/ml, 5 ml ZooPharm Pharmacy Buprenorphine narcotic analgesic formulated in a polymer that slows absorption extending duration of action (72 hours duration of activity).
Castroviejo needle holders, curved Fine Science Tools 12061-01
Curity sterile gauze sponges Coviden 397310
Delicate suture tying forceps, 45 angle bent Fine Science Tools 11063-07
Electric Razor Wahl Fur removal
Isoflurane 100 ml Cardinal Health PI23238 Anesthetic
Lab coat
Monoject 1 mL hypodermic syringe Coviden 8881501400
Moria iris forceps, curved, serrated (x2) Fine Science Tools 11370-31
Moria speculum retractor Fine Science Tools 17370-53
Mouse endotracheal intubation kit Kent Scientific
Nair depilatory cream Johnson & Johnson Fur removal
Optixcare eye lube plus Aventix Sterile ocular lubricant
Physiosuite ventilator Kent Scientific
PolyE Polyethylene tubing Harvard Apparatus 72-0191 Temporary compression of LAD artery
Povidone-iodine swabs PDI S41125
Scalpel, 10-blade Bard-Parker 371610
Sterile 3" cotton tipped applicators Cardinal Health C15055-003
Sterile 6" tapered cotton tip applicators Puritan 25-826-5WC
Sterile gloves Cardinal Health N8830
Sterilization pouches Medline MPP100525GS
Surgery cap
Surgical Microscope Leica M125
Suture tying forceps, straight (x2) Fine Science Tools 10825-10
Transpore surgical tape 3M 1527-1
Triple antibiotic ointment G&W Laboratories 11-2683ILNC2 Topical application to prevent infection
Vannas-Tübingen Spring Scissors, curved Fine Science Tools 15004-08
Vetflo vaporizer Kent Scientific

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Franchi, F., et al. The Myocardial Microenvironment Modulates the Biology of Transplanted Mesenchymal Stem Cells. Molecular Imaging Biology. , (2020).
  2. Bergmann, O., et al. Evidence for cardiomyocyte renewal in humans. Science. 324 (5923), 98-102 (2009).
  3. Writing Group, M., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 133 (4), 38 (2016).
  4. Gersh, B. J., Simari, R. D., Behfar, A., Terzic, C. M., Terzic, A. Cardiac cell repair therapy: a clinical perspective. Mayo Clinic Protocol. 84 (10), 876-892 (2009).
  5. Terzic, A., Behfar, A. Regenerative heart failure therapy headed for optimization. European Heart Journal. 35 (19), 1231-1234 (2014).
  6. Beegle, J., et al. Hypoxic preconditioning of mesenchymal stromal cells induces metabolic changes, enhances survival, and promotes cell retention in vivo. Stem Cells. 33 (6), 1818-1828 (2015).
  7. Kubli, D. A., Gustafsson, A. B. Mitochondria and mitophagy: the yin and yang of cell death control. Circulation Research. 111 (9), 1208-1221 (2012).
  8. Psaltis, P. J., et al. Noninvasive monitoring of oxidative stress in transplanted mesenchymal stromal cells. JACC Cardiovascular Imaging. 6 (7), 795-802 (2013).
  9. Peet, C., Ivetic, A., Bromage, D. I., Shah, A. M. Cardiac monocytes and macrophages after myocardial infarction. Cardiovasc Research. 16 (6), 1101-1112 (2020).
  10. Swirski, F. K., Nahrendorf, M. Cardioimmunology: the immune system in cardiac homeostasis and disease. Nature Reviews Immunology. 18 (12), 733-744 (2018).
  11. Zhang, Z., et al. Mesenchymal Stem Cells Promote the Resolution of Cardiac Inflammation After Ischemia Reperfusion Via Enhancing Efferocytosis of Neutrophils. Journal of the American Heart Association. 9 (5), 014397 (2020).
  12. Saxena, A., Russo, I., Frangogiannis, N. G. Inflammation as a therapeutic target in myocardial infarction: learning from past failures to meet future challenges. Translational Research. 167 (1), 152-166 (2016).
  13. Prabhu, S. D., Frangogiannis, N. G. The Biological Basis for Cardiac Repair After Myocardial Infarction: From Inflammation to Fibrosis. Circulation Research. 119 (1), 91-112 (2016).
  14. Dominici, M., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).

Tags

JoVE Bu Ay Sayı 163 kardiyovasküler iskemi reperfüzyonu sol anterior inen arter enfarktüs kök hücreler mikrocerrahi fareler
Bir Murine Modelinde İskemi Reperfüzyon Yaralanması Sonrası Kök Hücrelerin Gecikmiş İntramiyokardiyal Teslimi
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Olthoff, M., Franchi, F., Peterson,More

Olthoff, M., Franchi, F., Peterson, K. M., Paulmurugan, R., Rodriguez-Porcel, M. Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model. J. Vis. Exp. (163), e61546, doi:10.3791/61546 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter