В этом исследовании представлены методологии для изучения патоморфологических и молекулярных механизмов, лежащих в основенут-Ризоктония бататикола взаимодействия. Метод blotting бумаги полезн для того чтобы быстро изучить реакции генотипа нута, пока больной бак-основанный метод можно использовать для того чтобы одновременно навести засуху и инфекцию R. bataticola и экран для толерантных генотипов.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Сухой корень Rot болезни анализы в Chickpea: Подробная методология
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Сухая корневая гниль (DRR) болезнь представляет собой возникающие биотические угрозы стресса для выращивания нута во всем мире. Это вызвано почвенным грибкового патогена, Rhizoctonia bataticola. В литературе всеобъемлющие и подробные пошаговие протоколы по анализу заболеваний являются редкими. В этой статье приводится полная информация о шагах, связанных с созданием метода блоттинг бумаги для быстрого скрининга генотипов на устойчивость к DRR. Техника blotting бумаги легка и более менее дорогая. Другой метод, основанный на подходе больной горшок, является имитацией естественной инфекции и может быть применен для изучения взаимодействующих компонентов- растений, патогенов и окружающей среды, участвующих в треугольнике болезни.
Кроме того, в природе, DRR происходит в основном в дождевых районах выращивания нута, где влажность почвы отступает по мере роста урожая. Засуха стресс, как известно, предрасполагают растения нута к drR болезни. Патоморфологическое и молекулярное понимание взаимодействия растений и патогенов в условиях засухоустойчивого стресса может проложить путь для выявления элитных сортов, устойчивых к ДРР, из бассейна зародышевой плазмы нута. В этой статье приводится пошаговая методология подготовки больного горшка и последующего анализа заболеваний. В целом, информация, представленная в настоящем документе поможет исследователям подготовить R. bataticola грибковый инокулум, поддерживать этот патоген, создать технику blotting бумаги, подготовить больную культуру и больной горшок, и оценить патогенной инфекции в растениях нута.
Введение
Сухая корневая гниль (DRR) является одним из экономически значимых заболеваний внуте 1,2. Это корень конкретных заболеваний, вызванных Rhizoctonia bataticola (телеоморф, Макрофомина phaseolina). Зараженные растения не имеют бокового корня и обладают хрупкими тапрутами и желтойлиствой 1,3. DRR под засухой стресс, как сообщается, возникающие угрозы для выращиваниянута 1,2,3. Кроме того, заболеваемость ДРР, как сообщается, усугубляется в условия....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Изоляция R. bataticola и хранение
- Подробная информация о генотипе нута и симптомах DRR
- Используйте нут растений (генотип, JG 62), которые обычно показывают типичные симптомы DRR, такие как сухой, хрупкий первичный корень без бокового корня и микросклероции под корой и внутрисердцевины 1,3.
- Сбор и стирка
- Выкорчевывание растений, проявляя такие симптомы, как сухой соломенный цвет флоры и хрупкий первичный корень с микросклеротия под слоем эпидермиса. При выкорчевывании большая часть корней останется внутри почвы, так как зараженные корни хрупкие. Удали....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Это исследование было направлено на демонстрацию таких методов, как blotting бумаги и больных горшок методы для облегчения патоморфологических и молекулярных понимание растительно-патогенного взаимодействия в условиях засухи стресса. Для достижения этой цели, растения, выставленные симптомы DRR1,3,4 были собраны из нута поле, и грибок был изолирован с помощью метода hyphal отзыв8. R. bataticola г.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Техника blotting бумаги обеспечивает простой подход к экрану генотипов нута в лабораторных условиях. Прививка от погружения позволяет исследование взаимодействия на временной основе с легким контролем над инокулум нагрузки(Дополнительная цифра 1) и облегчает in vitro скрининга. Кроме того, даже молодые саженцы могут быть использованы. Пятидневная грибковая культура(рисунок 1B) может дать достаточно инокулума, чтобы заразить растения. Инокулум жидкости содержит как мицелия, т.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нам нечего раскрывать
Благодарности
Проекты в лаборатории M.S.K поддерживаются основным финансированием Национального института исследований генома растений. VI признает DBT- JRF (DBT/2015/NIPGR/430). Мы благодарим студентов-стажеров, мисс Ришика, г-на Джаячендраяна и мисс Дургадеви за техническую помощь во время видеосъемки, а также г-на Сандипа Диксита, мисс Анджали и д-ра Аваниш Рай за критическую оценку необработанных данных и рукописных файлов. Мы благодарим г-на Рахима Тарафдара и г-на Сандера Соланки за помощь в работе лаборатории. Мы признаем, DBT-eLibrary консорциум (DeLCON) и NIPGR библиотека для обеспечения доступа к электронным ресурсам и NIPGR завод роста фонда для поддержки роста растений ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Грибок - Rhizoctonia bataticola | Pathogen inoculum | Indian Type Culture Collection No. 8365 | GenBank: MH509971.1, ITCC 8635 (https://www.iari.res.in/index.php?option=com_content&view=article& id=1251&Itemid=1370) |
| Soilrite mix | Почвенная среда в лаборатории | Keltech Energies Limited, Бангалор, Индия | http://www.keltechenergies.com/ |
| Фильтровальная бумага | Промокательная бумага для поддержки роста растений | Himedia | http://himedialabs.com/catalogue/chemical2017/index.html#374 |
| Горшки | для выращивания растений | размером 10 и 30 см | Обычно используемые горшки для питомников, например, https://dir.indiamart.com/impcat/nursery-pots.html |
| Картофельная декстроза агар/бульон | Выращивание и поддержание грибка | Cat# 213400, DifcoTM, MD, США | https://www.fishersci.com/shop/products/bd-difco-dehydrated-culture-media-potato-dextrose-agar-3/p-4901946 |
| Инкубатор | Культура гриб | LOM-150-2, S/N AI13082601-38, MRC, инкубатор и шейкер | http://www.mrclab.com/productDetails.aspx?pid=91131 |
| Ростовая камера | Выращивание растений в контролируемых условиях | Модель No A1000, Conviron, Канада | https://www.conviron.com/products/gen1000-reach-in-plant-growth-chamber |
| Ламинарный воздушный поток | Проведение асептических упражнений | Telstar, Bio II advance, Класс II кабинет, EN-12469-2000 | https://www.telstar.com/lab-hospitals-equipment/biological-safety-cabinets/bio-ii-advance-plus/, http://www.atlantisindia.co.in/laminar-air-flow.html |
| Сетка | Фильтрация грибкового мицелия | Нейлоновая москитная сетка | Сетка с размером пор 0,6-1 мм |
| Автоклав | Автоклавные среды и семена нута | Автоклав | http://www.scientificsystems.in/autoclave |
| Микроскопы | Визуализация инфекции и грибкового мицелия | SMZ25 / SMZ18, Исследовательские стереомикроскопы, Учебный стереомикроскоп | Leica EZ4https://www.microscope.healthcare.nikon.com/products/stereomicroscopes-macroscopes/smz25-smz18<чел./><чел./> https://www.leica-microsystems.com/products/stereo-microscopes-macroscopes/p/leica-ez4/<чел/><чел/> https://www.microscopyu.com/museum/eclipse-80i |
| Весы | Взвешивание грибов и химикатов | Электронные весы Sartorius, BSA 4202S-CW | https://www.sartorius.com/en/products/weighing/laboratory-balances |
| WGA-FITC | Окрашивание грибка | Sigma | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/l4895?lang=en®ion=IN |
| Анилиновый синий | Окрашивание гриба | Himedia | http://www.himedialabs.com/intl/en/products/Chemicals/Dyes-Indicators-and-Stains/Aniline-blue-Water-soluble-Practical-grade-GRM901 |
Ссылки
- Sharma, M., Ghosh, R., Pande, S. Dry root rot (Rhizoctonia bataticola (Taub.) Butler): an emerging disease of chickpea - where do we stand. Archives of Phytopathology and Plant Protection. 48 (13-16), 797-812 (2015).
- Srinivas, P. Studies on dry root rot of chickpea (Cicer arietinum L.). , Available from:
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
