यहां वर्णित प्रोटोकॉल का उद्देश्य नैनोकण ट्रैकिंग विश्लेषण (एनटीए) के माध्यम से जलीय मीडिया में गोलाकार नैनोकणों, अधिक विशेष रूप से सोने के नैनोकणों के हाइड्रोडायनामिक व्यास को मापना है । बाद में ब्राउनियन गति के कारण कणों के आंदोलन पर नज़र रखने और हाइड्रोडायनामिक व्यास प्राप्त करने के लिए स्टोक्स-आइंस्टीन समीकरण को लागू करने शामिल है ।
नैनो टेक्नोलॉजी के क्षेत्र में, विश्लेषणात्मक लक्षण वर्णन नैनोमैटेरियल्स (एनएम) के व्यवहार और विषाक्तता को समझने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। लक्षण वर्णन के लिए पूरी तरह से होना चाहिए और चुना तकनीक संपत्ति के लिए अच्छी तरह से अनुकूल होना चाहिए निर्धारित किया जाना चाहिए, सामग्री का विश्लेषण किया जा रहा है और जिस माध्यम में यह मौजूद है । इसके अलावा, उपकरण संचालन और पद्धति को डेटा संग्रह त्रुटियों से बचने के लिए उपयोगकर्ता द्वारा अच्छी तरह से विकसित और स्पष्ट रूप से समझने की आवश्यकता है। लागू विधि या प्रक्रिया में किसी भी विसंगतियों से प्राप्त डेटा के अंतर और खराब प्रजनन क्षमता हो सकती है। इस पेपर का उद्देश्य नैनोपार्टिकल ट्रैकिंग एनालिसिस (एनटीए) के माध्यम से सोने के नैनोकणों के हाइड्रोडायनामिक व्यास को मापने की विधि को स्पष्ट करना है। यह अध्ययन मानक परिचालन प्रक्रिया के प्रदर्शन और प्रजनन क्षमता को मान्य करने के लिए सात विभिन्न प्रयोगशालाओं के बीच एक अंतर-प्रयोगशाला तुलना (आईएलसी) के रूप में किया गया था। इस आईएलसी अध्ययन से प्राप्त परिणाम विस्तृत मानक परिचालन प्रक्रियाओं (एसओपी), सर्वोत्तम अभ्यास अपडेट, उपयोगकर्ता ज्ञान और माप स्वचालन के महत्व और लाभों को प्रकट करते हैं।
नैनोमैटेरियल्स (एनएम) भौतिक और रासायनिक दोनों विशेषताओं में भिन्न हो सकते हैं जो बदले में उनके व्यवहार, स्थिरता और विषाक्तता को प्रभावित करते हैं1,2,3,4,5। प्रमुख कठिनाइयों में से एक, जब एनएम गुणों, खतरों और व्यवहारों की पूरी तरह से समझ विकसित करना, भौतिक और रासायनिक नैनोमटेरियल विशेषताओं के बारे में प्रजनन योग्य जानकारी प्राप्त करने की क्षमता है। ऐसे भौतिक गुणों के उदाहरणों में कणों का आकार और आकार वितरण6,7,8शामिल हैं . ये महत्वपूर्ण पैरामीटर हैं क्योंकि वे ‘ नैनो ‘9शब्द की यूरोपीय आयोग (ईसी) परिभाषा का एक महत्वपूर्ण पहलू हैं ।
एनएम6,10के भाग्य और विषाक्तता प्रभावों को समझने के अलावा कई अलग – अलग औद्योगिक और अनुसंधान अनुप्रयोगों और प्रक्रियाओं के लिए सटीक कण आकार माप प्राप्त करना भी महत्वपूर्ण है । एनएम के आकार को सही, मज़बूती से मापने और पुन: पेश करने में सक्षम अच्छी तरह से स्थापित तरीकों का होना महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, रिपोर्ट की गई जानकारी का उपयोग की जाने वाली तकनीक की गहरी समझ प्रदान करनी चाहिए जैसे, आकार पैरामीटर के प्रकार (जैसे, वास्तविक आकार या हाइड्रोडायनामिक आकार) के साथ-साथ नमूना स्थिति जैसे, विशिष्ट माध्यम जिसमें एनएम मौजूद है, और विभिन्न मीडिया में मज़बूती से प्रदर्शन करने की विधि के लिए इंगित करें। आकार को मापने के लिए, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (ईएम), डायनामिक लाइट स्कैटरिंग (डीएलएस), एकल कण प्रेरक रूप से प्लाज्मा मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एसपीआईसीपी-एमएस), अंतर अपकेंद्रित्र तलछट (डीसीएस), स्कैनिंग प्रोब माइक्रोस्कोपी (एसपीएम), छोटे कोण एक्स-रे बिखरने (एसएक्सएस) और नैनोपार्टिकल ट्रैकिंग विश्लेषण (एनटीए) सहित कई तकनीकों का उपयोग किया जा सकता है।
एनटीए एक अपेक्षाकृत नई तकनीक है जो हाल के वर्षों में अच्छी तरह से उन्नत रही है और जटिल जलीय मीडिया में गोलाकार एनएम के हाइड्रोडायनामिक व्यास को मज़बूती से मापने के लिए दिखाया गया है जैसे कि पर्यावरणीय प्रासंगिकता वाले, उदाहरण के लिए, मीठे पानी की प्रणालियां। हाइड्रोडायनामिक व्यास ‘एक काल्पनिक कठोर क्षेत्र का आकार है जो उसी फैशन में फैलता है जैसा कि कण को मापा जा रहा है’11; व्यावहारिक दृष्टि से और जलीय मीडिया में यह कण की तुलना में बड़े व्यास का वर्णन करता है, जिसमें कमजोर इलेक्ट्रोस्टैटिक बलों द्वारा कण की सतह पर आयोजित अणुओं (ज्यादातर पानी) की एक परत भी शामिल है। एक कण का हाइड्रोडायनामिक व्यास विभिन्न मीडिया में भिन्न होगा, जो मीडिया की आयनिक ताकत के रूप में छोटा हो रहा है जिसमें इसे मापा जाता है।
एनटीए तकनीक की एक अतिरिक्त महत्वपूर्ण विशेषता यह है कि यह विश्लेषक को संख्या-भारित आकार माप प्राप्त करने की अनुमति देता है, जो ईसी नैनोमटेरियल परिभाषा के संदर्भ में आवश्यक हैं। उच्च संकल्प, कण-दर-कण विश्लेषण इस तकनीक को कण थ्रूपुट10, 12की उच्च दर के साथ विषम परीक्षण नमूने में मौजूद होने पर समूह या बड़े कणों के कारण हस्तक्षेप से कम प्रवण बनाता है।
माप प्रक्रिया में नमूने का उपयुक्त निलंबन तैयार करना होता है, जिसके लिए अक्सर नमूना कमजोर पड़ने की आवश्यकता होती है, इसके बाद कणों के ब्राउनियन मोशन व्यवहार और वीडियो विश्लेषण की वीडियो रिकॉर्डिंग होती है। नमूना कक्ष से, एक लेजर बीम पारित किया जाता है, और लेजर बीम स्कैटर लाइट के रास्ते में निलंबन कण एक घुड़सवार कैमरे के साथ ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप का उपयोग करके उनके दृश्य के लिए अग्रणी होते हैं। कैमरा ब्राउनियन मोशन के तहत चलने वाले कणों से बिखरे लेजर लाइट की वीडियो फाइल कैप्चर करता है । कई कणों को व्यक्तिगत रूप से ट्रैक किया जा सकता है उनके प्रसार गुणांक निर्धारित करने के लिए और उनके हाइड्रोडायनामिक व्यास स्टोक्स-आइंस्टीन समीकरण का उपयोग कर गणना की जा सकती है: डी = kT/3πηD जहां डी हाइड्रोडायनामिक व्यास है, कश्मीर Boltzmann स्थिर है, टी तापमान है, η चिपचिपाहट है और डी प्रसार गुणांक10है । एनटीए का उपयोग उन कणों के एकत्रीकरण व्यवहार को ट्रैक करने के लिए भी किया जा सकता है जो आम तौर पर कोलाइडायल अस्थिर होते हैं (कणों को माप समय पैमाने पर कोलॉयडली रूप से स्थिर होना चाहिए)13,14। एनटीए एक निरपेक्ष विधि है और इस कार्य में उपयोग किए जाने वाले साधन पर किसी प्रणाली अंशांकन की आवश्यकता नहीं है। यदि उपयोगकर्ता सिस्टम प्रदर्शन की जांच करना चाहते हैं तो यह आसानी से आकार मानक सामग्री को मापने के रूप में अक्सर चाहता था द्वारा किया जा सकता है ।
एनटीए उपकरण त्वरित विश्लेषण समय (प्रति नमूना 10 मिनट से कम) के साथ काम करना आसान है। अच्छे डेटा रिपीटेबिलिटी और प्रजनन क्षमता के साथ उच्च गुणवत्ता वाले मापों के लिए, नमूना तैयारी के साथ-साथ साधन संचालन दोनों में कई कारकों पर विचार किया जाना चाहिए। यदि ऐसे कारकों पर सावधानीपूर्वक विचार नहीं किया जाता है, तो विभिन्न प्रयोगशालाओं और ऑपरेटरों में एक ही सामग्री पर माप अज्ञात या खराब मात्रात्मक अनिश्चितताओं के अधीन हो सकते हैं। एनपी लक्षण वर्णन के दौरान, घर में सबसे अच्छा अभ्यास विकसित एसओपी का उपयोग करना हमेशा अन्य प्रयोगशालाओं के साथ स्थिरता की गारंटी नहीं देता है, जैसा कि डीएलएस तकनीक15के लिए रोबबेन एट अल द्वारा दिखाया गया है।
वास्तव में, विभिन्न प्रयोगशालाओं, उपयोगकर्ताओं और उपकरणों के बीच एक प्रारंभिक (पहला दौर) एनटीए आईएलसी ने असंगत परिणामों का खुलासा किया। मुख्य मुद्दों में से एक विभिन्न पुराने विरासत उपकरणों के उपयोग के साथ था, जिनके पास नियमित सेवाएं या अंशांकन जांच नहीं थी, साथ ही विधि व्याख्या में अंतर था। होल एट अल द्वारा एक एनटीए आईएलसी अध्ययन में पाया गया कि एक प्रणाली का उपयोग करने और नमूने तैयार करने के बारे में साझा दिशानिर्देशों के अभाव के साथ, प्रयोगशालाओं में परिवर्तनशीलता अपेक्षाकृत मोनोडिस्पेड नमूनों के लिए भी बड़ी हो सकती है16। आईएलसी के पहले दौर के परिणामों के साथ-साथ अच्छे उपकरण रखरखाव के साथ-साथ विधि प्रशिक्षण और अच्छी तरह से विकसित मानक परिचालन प्रक्रियाओं (एसओपी) की आवश्यकता पर प्रकाश डाला गया है। बाद के वर्णन और अच्छे अभ्यास के साथ अनुपालन दस्तावेज़ के लिए एक शक्तिशाली उपकरण के रूप में कार्य करते हैं । यदि अच्छी तरह से विस्तृत, मानक ऑपरेटिंग प्रक्रियाओं (एसओपी) स्पष्टता, स्पष्टीकरण, समझ, मानकीकरण, और गुणवत्ता आश्वासन प्रदान कर सकते हैं ।
इसलिए आईएलसी अध्ययन को अपनाने की सिफारिश16प्रोटोकॉल विकसित करने और परीक्षण दोनों के लिए आदर्श है । आईएलसी अभ्यास ने इस विशिष्ट एनटीए एसओपी को मान्य करने का काम किया और इसलिए इस विशिष्ट नैनोमटेरियल जोखिम मूल्यांकन विधि में आत्मविश्वास और स्पष्टता की शुरुआत की। इसमें तीन राउंड शामिल हुए। राउंड 1 प्रशिक्षण से पहले प्रत्येक प्रतिभागी के अपने उपकरणों पर 60 एनएम सोने के नैनोकणों का विश्लेषण किया। राउंड 2 में एक साधारण परीक्षण के रूप में आम विन्यास के साथ एक नए उपकरण का उपयोग करके 100 एनएम लेटेक्स का विश्लेषण करना शामिल था ताकि यह निर्धारित किया जा सके कि उपकरण को सही ढंग से स्थापित किया गया था और उपयोगकर्ताओं को उपकरण का उपयोग करने के तरीके पर एक अच्छा ज्ञान था। राउंड 3 में प्रशिक्षण के बाद, सामान्य विन्यास के साथ नए साधन पर 60 एनएम सोने के नैनोकणों का विश्लेषण शामिल था। आईएलसी में प्रतिभागी सात अलग-अलग प्रयोगशालाओं, क्षितिज 2020 एसीएननो परियोजना17के सभी कंसोर्टियम सदस्यों से आए थे।
इस लेख का उद्देश्य एनटीए प्रौद्योगिकी के लिए बेंचमार्किंग के तीसरे दौर से विधि और परिणामों पर चर्चा करना है जहां विस्तृत प्रशिक्षण और एसओपी विकास के बाद सात भागीदारों द्वारा 60 एनएम गोल्ड एनपीएस का फिर से विश्लेषण किया गया था। आईएलसी के पहले दौर में प्राप्त परिणामों की तुलना और संदर्भ भी किया जाएगा । आईएलसी के दौर 3 से सभी विश्लेषण एक 405 एनएम लेजर और एक उच्च संवेदनशीलता sCMOS कैमरे के साथ आपूर्ति समान विन्यास के एक ही उपकरण (सामग्रीकी मेज देखें) का उपयोग कर किया गया। बेंचमार्किंग नमूनों पर प्रौद्योगिकी के प्रदर्शन का आकलन करता है और इसलिए ‘सर्वश्रेष्ठ अभ्यास’ प्रोटोकॉल का विकास होता है। इस प्रकार, यह लेख वैज्ञानिक समुदाय के लिए उपलब्ध इस आईएलसी में उपयोग किए जाने वाले साधन के लिए एनटीए विधि को भी साझा करता है और बनाता है क्योंकि इसे अंतर्राष्ट्रीय मानकों के अनुसार आईएलसी के संचालन और मूल्यांकन के माध्यम से सुसंगत किया गया है।
राउंड 1 आईएलसी से प्राप्त असंगत परिणामों में पुरानी प्रणालियों के लिए साधन स्वास्थ्य जांच के साथ-साथ अधिक विस्तृत एसओपी के विकास, हाथों से प्रशिक्षण की आवश्यकता और माप और विश्लेषण सेटिंग्स की बेहतर समझ पर प्रकाश डाला गया ताकि विभिन्न प्रयोगशालाओं में अधिक सुसंगत परिणाम सुनिश्चित किए जा सकें । वास्तव में, होल एट अल ने पाया कि एनटीए प्रणाली का उपयोग करने और नमूने तैयार करने के बारे में साझा दिशानिर्देशों के अभाव में अपेक्षाकृत मोनोडिस्प्स्ड नमूनों के लिए भी प्रयोगशालाओं में परिवर्तनशीलता हुई16। इसलिए, सभी आईएलसी प्रतिभागियों ने सिस्टम ऑपरेशन और माप शर्तों के लिए सर्वोत्तम प्रथाओं के साथ-साथ विशिष्ट एनटीए उपकरण के लिए सफाई और रखरखाव मार्गदर्शन को कवर करते हुए एक प्रशिक्षण कार्यशाला में भाग लिया। सभी प्रतिभागियों को भी बाद में आईएलसी दौर के लिए अपनी प्रयोगशालाओं में एक ही उपकरण पर माप प्रदर्शन किया । प्रक्रिया में पहले एक दौर शामिल था जिसने लेटेक्स मानक नमूनों (आईएलसी राउंड 2) पर आईएलसी चलाकर प्रत्येक प्रयोगशाला में स्थानीय स्तर पर प्रणाली का परीक्षण किया, इससे पहले कि भागीदारों द्वारा सोने के माप (आईएलसी राउंड 3) को दोहराने के लिए उपयोग किया जा रहा है। एनटीए के माध्यम से इन सोने के नमूनों को मापने का उद्देश्य नैनोमटेरियल जोखिम मूल्यांकन विधियों और नैनोसेफ्टी मार्गदर्शन प्रोटोकॉल को प्रभावित करने के लिए आवश्यक प्रथाओं में आत्मविश्वास और स्पष्टता लागू करना था ।
एनटीए एक तकनीक है जो कणों के हाइड्रोडायनामिक गोलाकार समकक्ष व्यास को माप सकती है और कण द्वारा कण के लिए उपयोग किया जा सकता है, 10 एनएम – 50 एनएम से लेकर पॉलीडिस्पर सिस्टम का वास्तविक समय दृश्य विश्लेषण, आकार में लगभग 1000 एनएम तक (गुणों के नमूने और उपकरण विन्यास के आधार पर)। न्यूनतम नमूना तैयार करने की आवश्यकता है। न्यूनतम नमूना तैयारी के बावजूद, यह कदम प्रोटोकॉल के लिए महत्वपूर्ण है और नमूना को कमजोर करते समय और पतला चुनते समय बहुत सावधानी बरती जानी चाहिए। आकार एनटीए के संबंध में एक सीमित कारक हो सकता है क्योंकि गोलाकार समकक्ष आकार माप प्राप्त किए जाते हैं और गैर-गोलाकार कणों में कम सटीक आकार मूल्य होगा।
एनटीए प्रौद्योगिकी के लिए, कुछ परिणाम भिन्नता हमेशा उम्मीद की जाती है क्योंकि पूरे नमूने से केवल एक प्रतिनिधि नमूना देखा जाता है। बावजूद, सभी परिणाम कण आकार घटाने के लिए आईएसओ 19430 मानक को पूरा करते हैं। प्रदान करने के लिए इष्टतम एकाग्रता आम तौर पर एक30-60 दूसरे विश्लेषण समय के भीतर १० ८ कणों/मिलीलीटर के आसपास है । निचले कण सांद्रता वाले नमूनों के लिए, प्रजनन योग्य परिणाम सुनिश्चित करने के लिए लंबे विश्लेषण समय की आवश्यकता होगी। १०९ कणों/एमएल से अधिक कणों की एकाग्रता वाले नमूनों के लिए, समस्याओं पर नज़र रखने की अधिक संभावना है और नमूनों को एनटीए माप के लिए एक उपयुक्त रेंज के लिए नीचे पतला करने की आवश्यकता होगी ।
कुल मिलाकर3 दौर आईएलसी से परिणाम वृद्धि की सटीकता और पुनरावृत्ति के साथ एनटीए के साथ सोने नैनोपार्टिकल माप की अच्छी प्रजनन क्षमता दिखाते हैं । सभी एनटीए माप स्वचालित कैमरा स्तर और फोकस सेटिंग्स का उपयोग करके किया गया था छवि को समायोजित करने के लिए, के रूप में सॉफ्टवेयर में ऑटो सेटअप सुविधा द्वारा चयनित । सॉफ्टवेयर द्वारा निर्धारित कैमरा स्तर बहुत सुसंगत था, 10 या 11 के कैमरे के स्तर के साथ सभी मामलों में सेट किया जा रहा है कि जैसा कि अपेक्षित था, अधिक स्वचालन एक प्रक्रिया में अधिक स्थिरता हासिल की जाती है। आकार घटाने के परिणाम TEM के माध्यम से निर्माता द्वारा प्राप्त उन लोगों के बराबर थे जो यह दर्शाते हैं कि परिणाम प्रजनन योग्य थे, हालांकि विभिन्न तकनीकों से न्यूनतम अंतर की उम्मीद की जानी चाहिए क्योंकि TEM हाइड्रोडायनामिकल व्यास निर्धारित नहीं करता है। परिणामों की निरंतरता में महत्वपूर्ण सुधार एनटीए के लिए उपकरण रखरखाव, विस्तृत एसओपी, सर्वोत्तम अभ्यास अपडेट, उपयोगकर्ता ज्ञान और अनुप्रयुक्त माप स्वचालन के महत्व और लाभों को दर्शाता है। अंत में आईएलसी ने इस विशिष्ट एनटीए एसओपी को मान्य किया और इसलिए इस विशिष्ट नैनोमटेरियल जोखिम मूल्यांकन विधि में आत्मविश्वास और स्पष्टता की शुरुआत की।
The authors have nothing to disclose.
लेखक H2020 वित्त पोषित परियोजना से वित्तीय सहायता स्वीकार करते हैं: ACEnano (अनुदान समझौते नहीं 720952) । इस काम को आंशिक रूप से अंतर्राष्ट्रीय सहकारी अनुसंधान एवं विकास कार्यक्रम द्वारा समर्थित किया गया था जो व्यापार, उद्योग और कोरिया की ऊर्जा मंत्रालय द्वारा वित्त पोषित था (अनुदान संख्या N0531000009, “क्षितिज 2020 कोर-ईयू सहयोगी आर एंड बीडी एटेनो टूलबॉक्स पर”) जिसने क्षितिज 2020 एसीएननो प्रोजेक्ट के कंसोर्टियम में कोरियाई भागीदारों की भागीदारी सक्षम की।
60 nm gold colloid dispersion | BBI Solutions OEM Ltd. | Product EM. GC60, Batch number 024650 | |
0.02 µm syringe filter – Whatman Anotop 25 Sterile Syringe Filters | Sigma Aldrich | WHA68092102 | |
NanoSight | Malvern Panalytical Ltd. | NS300 | |
NanoSight NTA Software v3.4 | Malvern Panalytical Ltd. | v3.4 | |
Syringe PP/PE without needle luer slip tip, centered, capacity 1 mL, graduated, 0.01 mL, sterile | Sigma Aldrich | Z230723 |